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文档简介

免疫组化基本技术 一 RCA法IGSSIS PCRCSA法UIPEnvisionLSAB法双PAP法PAP法 ABC法桥法间接法直接法 第一部分组织与细胞材料的制备 内容 组织与细胞材料的取材和保存 主要内容一 人体组织标本的取材二 动物组织标本的取材三 取材注意事项四 细胞标本的准备五 组织的固定 脱水 透明和包埋六 切片七 组织与细胞材料的保存 概述免疫组织化学 Immunohistochemistry IHC 技术是一门综合性技术 除了具备优质 高效 特异的一抗 敏感的检测方法 稳定的显示系统外 还需要掌握组织标本或标本的取材 固定 包埋 切片 以及IHC前的处理 内源性酶的消除方法 非特异背景的消除方法 怎样防止IHC染色过程中的脱片 一 人体组织标本的取材手术切除标本 各种活检穿刺标本和尸体解剖标本 1 手术切除标本的取材 抗原在组织中的分布常不均一 取材时应考虑 主要病灶 病灶与正常组织交界处 远离病灶的正常组织 组织大小 长1cm 宽1cm 厚0 2 0 3cm 2 各种小组织的活检取材 它不仅体积小 取材困难 不易取到主要病灶 因此对标本的处理应特别慎重 及时固定 包埋时要平整 3 穿刺标本的取材 光镜 HE 特殊染色 IHC ISH 电镜 透射电镜 免疫电镜 4 尸检组织的取材病人死亡后 一般要在数小时后才能做尸检 因此 及时取材 尽早固定是开展IHC检测的关键 二 动物组织标本的取材动物的处死方式一般为活杀 组织标本来源较新鲜 10min内即可完成固定和冷冻保存 脑组织和神经组织应采用灌注固定后 再进行后固定 动物处死方法 1 麻醉法乙醚或4 戊巴比妥静注2 空气栓塞法3 断头法4 击头法5 股动脉放血法 三 组织取材注意事项1 组织要求离体后30min内浸入固定液 尤其是开展分子生物学工作 动物组织取材要求心脏还在跳动时取材 2 注意防止人为因素的影响刀和剪要快 刀要足够长 3 组织块的大小厚为0 1 0 3cm 大小可根据需要而定4 动物和人体组织的取材位置要视研究目的 观察部位而定 5 取材时间原则上 应尽快取材 但比较大的手术标本如胃 肺 肠等器官 最好先固定后取材 6 注意包埋方向7 边缘标记8 保持材料的清洁9 切除不需要的部分10 明确编号 登记11 骨组织还需脱钙 四 细胞材料的准备细胞的取材和制片法 1 印片法 常用于活检或手术切除标本 将新鲜标本沿病灶中心剖开 将病灶区轻压于载玻片上 吹干后立即固定20 30min 优点 操作简单 抗原保存好缺点 细胞厚薄不均 IHC染色易引起背景染色 2 穿刺吸取
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