Ube基础与血液肿瘤研究

基础与血液肿瘤研究应用进展,主要内容,肿瘤微环境与CD13白血病与CD13CD13抑制剂乌苯美司乌苯美司双重作用机制的基础研究乌苯美司在血液肿瘤治疗中应用,肿瘤微环境,肿瘤微环境就是指在肿瘤在生长、浸润和转移过程中，由肿瘤细胞及细胞外间质相互作用后形成的肿瘤细胞生长的特殊环境。肿瘤微环境中的各种成份相互作用，通过多种途径刺激肿瘤细胞生长和转移。,3,肿瘤血管生成是肿瘤微环境中的重要环节,内皮细胞,周细胞,成纤维细胞,基底膜细胞外间质,免疫细胞,肿瘤微环境中的各个成份通过多种途径调节肿瘤血管的生长和形态肿瘤微脉管系统是决定其内部微环境的主要因素,血管内血管生成调节因子,4,肿瘤微环境与肿瘤侵袭、转移,5,降解基板和细胞外基质是肿瘤转移的关键步骤,降解基板和细胞外基质所涉及的蛋白酶,6,T细胞:TIL/CTLNK单核巨噬细胞,肿瘤转移微环境,肿瘤微环境肿瘤转移的关键,内皮细胞降解周围基质血管生成因子,血小板、血管内皮细胞血管壁和细胞外基质,金属蛋白酶 氨肽酶N，CD13,氨肽酶N(APN，CD13)属于结合Zn的金属蛋白酶超家族，广泛分布于造血细胞、成纤维细胞、脑细胞和肠、肾、肝细胞等，参与蛋白水解，参与细胞和器官的正常蛋白代谢。,在多种肿瘤细胞表面高水平表达，如白血病、前列腺癌、结肠癌、非小细胞肺癌等，被称作肿瘤细胞标记物。,子宫内膜腺癌、卵巢癌组织中APN/CD13的表达,子宫内膜腺癌,粘液性囊腺癌,浆液性囊腺癌,阴性对照,APN/CD13在肿瘤细胞表达较强，间叶组织较弱,Int. J. Cancer.2007,120, 22432250,氨肽酶N CD13作用,一、促进肿瘤细胞侵袭与转移CD13通对基底膜成分(基膜和型胶原蛋白) 的水解作用, 进行组织消化穿透;一种辅助的粘附分子，促进肿瘤细胞附着，参与细胞信号传导、炎症驱化；促进肿瘤新生血管的形成： 在血管形成刺激因素如缺氧、VEGF 作用下, 新生血管内皮CD13mRNA 及表达上调, 而成熟血管内皮无CD13 表达。,氨肽酶N CD13 作用,CD13 连续降解：多的肽调节因子，其中包括免疫活性物质，从而降低了机体免疫；抑制免疫细胞对肿瘤细胞表面抗原的识别和直接杀伤细胞的能力。,二、 免疫负调节,胰腺癌患者体内CD13的表达量与肿瘤血管密度的关系,IMD：intratumor microvessel density(肿瘤内微血管密度),结论：CD13的表达与肿瘤血管生成成正相关,Ikeda N, et al. Clin Cancer Res , 2003 , 91503,CD13表达阴性(-)胰腺患者生存期明显延长,Ikeda N, et al. Clin Cancer Res , 2003 , 91503,CD13表达低的NSCLC患者总生存率显著延长,A：90例NSCLC患者生存期CD13表达量关系B：40例期NSCLC患者生存期与CD13表达量关系,Haruyasu Murakami，Clin Cancer Res, 2005，11：8674,主要内容,肿瘤微环境与CD13白血病与CD13CD13抑制剂乌苯美司乌苯美司双重作用机制的基础研究乌苯美司在血液肿瘤治疗中应用,CD13在白血病中表达,CD13最初作为髓细胞表面标志被发现，表达于GM-CFU和髓细胞分化发育的各阶段、成熟的单核细胞和巨噬细胞、树突状细胞(DC)以及急性髓细胞白血病细胞（AML）、慢性髓细胞白血病（CML）急变危象期细胞以及少数淋巴细胞白血病细胞，多年来作为白细胞抗原被用于白血病免疫分型，提示对髓细胞的分化发育有重要作用。,Putti M C,et al.Blood,1998,92(3):795-801,16,CD13在AML患者中的表达,Nada Kraguljac, Am J Clin Pathol 2000;114:29-34,80%以上的患者 高表达CD13,17,18,CD13在B-ALL白血病的表达,方法：90例B-cell ALL，免疫表型分析符合早期B淋巴细胞白血病。分离出具有高度增殖性B细胞亚群，免疫标志与正常人B细胞相似（表达 CD10、CD19、CD22、CD24、Tdt，共表达CD13)。用CD13抗体作用细胞后，观察细胞的生长。,Cancer Immunol Immunother 2010 Jan.59(1) 125-35,19,结果与结论,结果：阻断白血病细胞表面CD13，能抑制其增殖结论：CD13促进该阶段的恶性转化 CD13也许是该阶段急性B淋巴细胞白血病新 的分子治疗的一个重要靶点,Cancer Immunol Immunother 2010 Jan.59(1) 125-35,CD13通过降解IL-8，抑制白血病细胞凋亡,血管内皮细胞,互相接触,释放,（凋亡因子）,高表达 CD13 抵抗,诱导白血病细胞凋亡作用被,IL-8是CD13/APN 的底物，很可能CD13APN通过降解IL-8， 抑制血细胞凋亡，起到促进血细胞增殖发育的作用。,M ishim a Y .et al.J Natl Cancer Inst,2002,94:10201028,20,主要内容,肿瘤微环境与CD13白血病与CD13CD13抑制剂乌苯美司乌苯美司双重作用机制的基础研究乌苯美司在血液肿瘤治疗中应用,CD13抑制剂 乌苯美司,1976 年, 日本的梅泽滨夫等人从网状橄榄链霉菌培养液中发现了一种具有抗菌作用和免疫增强作用的小分子二肽化合物, 为氨基肽酶N 的特异性抑制剂，具有直接和以宿主为中介的抗肿瘤活性作用。 万乐乌苯美司片（专利创新剂型）于2009年上市。,乌苯美司CD13抑制剂,提高机体免疫力,抑 制CD13,1,2,3,1,2,3,不同蛋白酶抑制剂对ATRA诱导NB4细胞分化的作用,(*P0.05),只有Ube在1ng/ml浓度下可增强ATRA对NB4细胞的分化作用,不加10-7M ATRA,加10-7M ATRA,Amastatin A:抑氨肽酶AAntipain:抗蛋白酶素Chymostatin:糜蛋白酶抑制素Leupeptin:亮肽酶素Pepstatin:胃酶抑素,Ubenimex,Ubenimex,主要内容,肿瘤微环境与CD13白血病与CD13CD13抑制剂乌苯美司乌苯美司双重作用机制的基础研究乌苯美司在血液肿瘤治疗中应用,乌苯美司体外作用,金属蛋白酶CD13抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的生长抑制肿瘤新血管的形成 提高机体免疫力,金属蛋白酶CD13抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的生长抑制肿瘤新血管的形成 提高机体免疫力,不同细胞株CD13金属蛋白酶的活性,Richard A. et al.Blood, 1990,75(2 ): pp 462-469,乌苯美司对细胞表面CD13活性的抑制,Ubenimex,Richard A. et al.Blood, 1990,75(2 ): pp 462-469,phosp、D,L、N-carb: CD10抑制,金属蛋白酶CD13抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的生长抑制肿瘤新血管的形成 提高机体免疫力,抑制K562细胞，诱导细胞凋亡,Sawafuji K, et al. Leukemia & Lymphoma 2003;44(11):1987-1996,氨肽酶(APN)/CD13抑制剂乌苯美司增强卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性,Int. J. Cancer.2007,120, 22432250,Mamoru Yamashita et al,不同卵巢癌细胞株APN/CD13的表达和紫杉醇IC50值的相关性,Int. J. Cancer.2007,120, 22432250,1 Mean fluorescence intensity in FACS analysis,不同卵巢癌细胞株APN/CD13的表达和紫杉醇IC50值的相关性,APN/CD13在肿瘤细胞表达越强，紫杉醇的IC50值越高，肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性越低。,Int. J. Cancer.2007,120, 22432250,c、 含有PAC (100 ng/ml) 或/和乌苯美司(100 ug/ml) 处理24 hr ，ES-2形态学改变d、PAC 或/和乌苯美司对ES-2细胞凋亡的影响,PAC,PAC+UBE,control,凋亡,凋亡,乌苯美司能增强紫杉醇诱导凋亡作用,Int. J. Cancer.2007,120, 22432250,乌苯美司作用引起的凋亡相关分子改变,Int. J. Cancer.2007,120, 22432250,乌苯美司对裸鼠体内腹膜转移OVCA肿瘤生长的影响,PAC,PAC+UBE,四组裸鼠的生长曲线,A:PBSB:PACC:UBED:PAC+UBE,B 和D组生存时间： 27.16.6, 37.7 7.0 d, D组生存时间明显长于B组(p 0.05),乌苯美司联合紫杉醇作用裸鼠体内结果,Int. J. Cancer.2007,120, 22432250,金属蛋白酶CD13抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的生长抑制肿瘤新生血管的形成 提高机体免疫力,乌苯美司对血管内皮细胞生长的影响（相差显微镜图）,血管生成是肿瘤生长和转移的关键步骤，CD13/APN是重要调节因子，Ube作为CD13的功能性抑制剂，与CD13单抗相似，可抑制HUVEC的生长，与对照组有显著差异。,UBE,The angiogenic regulator CD13/APN is a transcriptional target of Ras signaling pathways in endothelial morphogenesisBhagwat SV, et al. Blood.2003;101(5):1818-1826,金属蛋白酶CD13抑制剂诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的生长抑制肿瘤新血管的形成 提高机体免疫力,UBE 100ug、500ug能显著上调IL-2 、IFN-。,乌苯美司改变抗原刺激免疫淋巴细胞因子分泌量,Clin Exp Immunol 1998; 111:3035,不同浓度的乌苯美司对NK细胞活性的影响,BS浓度在0.01-1ug/ml范围内，对NK细胞活性的影响不明显（P0.05）,当BS浓度大于10ug/ml时，能显著增强小鼠脾NK细胞活性，并随浓度提高而增强。,乌苯美司对小鼠脾脏天然杀伤细胞活性的增强作用. 中国医药工业杂志，1995，26（6）：255-257, P男性（P0.05) 3年OS组UY和组UN: 43.1%、26.9% (p=0.073). 结论：对于老年AML达到CR者，服用UBE有更多的 生存获益。,Atsushi Wakita, MD et. Al.Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 2008 112: Abstract 2961 American Society of Hematology,乌苯美司联合化疗治疗慢性髓性白血病,CML的主要目标是达到细胞遗传学的完全缓解。方法： 乌苯美司与马利兰联合治疗23例慢性髓性白血病(CML) 结果：全部达到血液学完全缓解。其中细胞遗传学CR 6例(26%)，PR 1例(4%)，PD 6例(26%)。细胞遗传学转为正常中位持续220个月(60410)。,Y Uzuka et al.Gan To Kagaku Ryoho, 1993; 20(2): 207-14.,生存结果,3年生存率为(86.6土9.0) (95%可信限)，对照64土9.6%P (0.01)加速期患者生存期也得到延长。,Y Uzuka et al.Gan To Kagaku Ryoho, 1993; 20(2): 207-14.,Ube,乌苯美司联合化疗治疗CML,研究方法：Ph 染色体及bcr-abl 融合基因均(+) 40例CML （初治31 例, 复治10 例）化疗方案：Ara-C 50mg7 -10 d, HU 1.0 tid，口服至wbc降至10109/L 20109/L 之间, 停用AraC随机分成两组： IFN-和乌苯美司30 mg,每日1次清晨空腹口服，至6个月所有病例均取治疗6月后的检测值,欧阳敏.江西省人民医院; 白血病淋巴瘤 2001,10（4）:422-425,结 果,乌苯美司组全部达完全血液学缓解,6 例获得细胞遗传学反应,经t 检验,IFN 治疗组及乌苯美司治疗组均可使 Ph 量下降(p0.05 )。,欧阳敏.白血病淋巴瘤 2001,10（4）:422-425,国产乌苯美司联合化疗治疗难治性复发性恶性淋巴瘤的临床观察,夏顺中等，浙江实用医学，2000，5（6）：8-9,方案：CHOP方案联合化疗 VCP 2mg iv d1 ADM 40-60mg iv d1、d3 CTX 400-600mg iv d1、d4 Pred 40-60mg d1-d6 6天为1疗程，每月化疗一次，连续2-3疗程 Ube用法：化疗前一天开始30mg/d，连续服药1-6m,结 果,68,副作用：乌苯美司胶囊不良反应发生率很低。 14 例患者中有2 例服药后12h 发生一过性皮疹 1 例服药后3060 分钟感上腹部不适, 随着治疗的继续自行消失,乌苯美司治疗血液肿瘤小结,（-）乌苯美司 （+）,氨肽酶N CD13,免疫调节,通过抑制CD13，诱导肿瘤细胞凋亡，启动Caspase-3，凋亡的信号并级联放大,增强全反式维甲酸诱导分化肿瘤细胞能力,激活单核巨噬细胞系统（MPS）增强自然杀伤（NK）伤细胞活性,增加辅助性T淋巴细胞（Th1）