脂质沉积性肌病白细胞脂滴

脂质沉积性肌病外周血白细胞脂滴沉积的超微结构研究,福建医科大学附属第一医院神经内科 慕容慎行 王 柠 福建省泉州市第一医院神经内科 蔡 江 萍,脂质沉积性肌病( lipid storage myopathy, LSM )是由于肉毒碱（carnitine）或作用于脂质代谢的一些酶等缺乏，直接或间接地干扰了肌肉细胞内的脂质代谢，导致脂滴在肌纤维中的异常积聚而引起的肌病,LSM有许多不典型的临床表现，其诊断必须依靠肌肉病理检查。但肌肉活组织检查，具有损伤性，不易重复，病人较难接受，不适于随访病人。因此探讨LSM的其他辅助性诊断手段，配合肌肉活组织病理检查具有重要的临床意义。,研究现况,国外陆续有学者报道LSM患者的周围血液白细胞脂肪染色可观察到脂滴存在。但文献中未见进一步系统研究的报道。国内在这一研究领域尚为空白。,研究目的,利用电镜检查较为深入地研究周围血液白细胞超微结构特征探讨白细胞胞浆脂滴检测在LSM中的临床应用价值,研究对象,LSM患者8例，男3例，女5例；年龄：10-41岁，平均年龄20.99.7岁；病程2-12年。全部病例均经临床表现、实验室检查、电镜和病理组化等检查综合确诊。健康对照者5名，男性2名，女性3名，年龄：23-44岁，平均年龄30.68.3岁。5位自愿者血清CPK、LDH、ALT、AST、Mb均正常，无遗传性疾病家族史。,临床资料,全部LSM病例均呈亚急性或慢性病程，复发者4例。均以肌无力为首发症状，双侧对称性，近端肌肉受累严重，远端肌肉受累较轻。各部位肌肉受累情况：下肢8例，上肢7例，肩胛带及骨盆带肌各7例，颈肌7例，咀嚼肌5例，吞咽肌2例，呼吸肌2例。肌萎缩6例，肌痛及肌压痛5例，有家族史5例。实验室检查：CPK：241-3297 IU/L，LDH：303-3080IU/L，ALT：52-418IU/L，AST：31-717IU/L，3例Mb110g/L。肌电图均为肌源性损害。,研究方法,标本取材及制作：采血离心吸去上清液加入3%戊二醛-1.5%多聚甲醛-0.1M磷酸盐缓冲液4固定半小时细切成长条状标本 4固定2小时以上 0.1M PBS漂洗三次 1%锇酸-1.5%亚铁氰化钾溶液4固定2小时系列梯度酒精、丙酮脱水定向包埋超薄切片电子染色。电镜观察及细胞计数：Hu-12A型透射电镜观察并摄片。每份标本均按固定方向统一顺序计数50个中性粒细胞，统计沉积的脂滴总数和含有脂滴的阳性细胞数。,统计学分析,两组中性粒细胞含脂滴总数及含脂滴的中性粒细胞阳性率比较，若方差齐性采用t检验，若方差不齐采用t检验，并用SPSS10.0软件包统计。,结 果,LSM患者：周围血液白细胞胞浆中可见到脂滴存在，多圆形或椭圆形，内容物接近透明，有的电子密度较高，体积大小不等，直径约0.1-1.1m，同一个细胞中脂滴常为2-3个，有的细胞脂滴多达5个，脂滴沉积以中性粒细胞明显，淋巴细胞及红细胞胞浆中未见脂滴。健康对照者：周围血液白细胞中脂滴极为罕见，细胞中脂滴多为1个，体积细小，直径约0.1-0.2m。,表1两组中性粒细胞中沉积的脂滴数,*平均值为同组数据的均值, *P0.01,表2 两组周围血含脂滴的中性粒细胞阳性率,*平均值为同组数据的均值, *P0.001,讨 论,本文研究结果显示：LSM患者周围血液白细胞胞浆中可观察到脂滴沉积,以中性粒细胞明显，红细胞及淋巴细胞未见脂滴存在。健康对照组只在个别白细胞胞浆中观察到细小脂滴，极为罕见。,白细胞胞浆中出现脂滴沉积，其机制可能为：白细胞膜存在肉毒碱摄取功能减弱，导致长链脂肪酸代谢异常；全身型患者肝脏合成肉毒碱功能缺陷，血清肉毒碱水平降低。,红细胞中未出现脂滴沉积，其原因可能为：红细胞的能量供应，95%来源于糖原酵解，脂肪氧化代谢障碍时对其影响小，不导致脂滴沉积。,国外有多位学者对其他神经肌肉病的周围血液白细胞进行研究：发现除了LSM外，其他神经肌肉疾病均未见到类似的脂滴沉积说明周围血液白细胞脂滴沉积仅见于LSM因而周围血液白细胞脂滴沉积的电镜检查，对LSM的的诊断具有较高的特异性,Hart等4报道1例23个月的LSM患儿在发病初期周围血液白细胞未出现脂滴沉积。病情加重时，很快出现脂滴，油红O染色阳性。说明周围血液白细胞脂滴沉积，随病情加重而变化。国内也有文献报道5，2例LSM患者白细胞内脂滴随病情好转而减少，作者认为白细胞内脂质沉积与病情轻重有关。,结 论,周围血液白细胞脂滴沉积的电镜检查，可作为本病的一种简便、快