大鼠MCAO模型的制作.ppt

大鼠MCAO模型的制作 原理 MCAO即大脑中动脉闭塞 该模型阻断颈外动脉及其分支 且阻断翼腭动脉 以切断颅外来源的侧副循环血流 从颈外动脉插入栓线 经颈内动脉到大脑前动脉 机械性阻断大脑中动脉发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型 如果需要再灌注 只需拔出栓线结扎伤口 即可恢复大脑血供 实验前准备工作 1 手术器械 取脑器械 清洗干净 简单消毒其他 干棉球 酒精棉球 大鼠板 固定线 自制拉钩 培养皿麻醉药 NS配制的10 水合氯醛 用法为0 35ml 100gIP 手术过程中可用1 4 1 3倍液追麻TTC染液 NS配制的1 红四氮唑溶液 现配现用 2 4 避光保存 实验前准备工作 2 栓线选择 准备直径0 205mm 0 235mm 0 26mm三种粗细的鱼线 实验中根据大鼠体重以及大鼠个体差异调整栓线处理 取一段5cm长的鱼线 在一端以及2cm 2 2cm处分别用记号笔作一个标记 垂直在熔化的石蜡中迅速浸入并提起 立即凝固的一薄层石蜡可牢固地粘附在鱼线一端的表面 实验方法 1 动物麻醉后仰卧位固定在鼠板上 剪毛后用75 乙醇简单消毒 颈正中线开口 实验方法 2 沿正中钝性分离两侧鼓泡腺体 暴露颈前肌群沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜 暴露颈总动脉及分支这两步均用弯头止血钳进行钝性分离 实验方法 3 首先分离颈总动脉并穿单线备用沿颈总动脉向远心端依次分离出颈外动脉 甲状腺上动脉 枕下动脉以及颈内动脉 在颈外动脉及枕下动脉穿双线备用 实验方法 4 双线结扎颈外动脉和枕下动脉后剪断血管 在颈外动脉残端上用单线打一个松结动脉夹夹闭颈总动脉近心端以及颈内动脉 颈外动脉残端上45度剪一小口 向颈内方向插入栓线 扎紧固定线 松开动脉夹 实验方法 5 用眼科镊向为内上方轻推栓线 从血管分叉处开始算距离 当插入深度到达鱼线的标记处时 扎紧固定线若鱼线堵在在1cm处 是误进翼颚动脉 若在1 6cm堵住 则是卡在了入颅处 此时都应回抽鱼线调整方向再进线 反复试几次还不行最好换根栓线 很可能前端已经变形如果是再灌注模型 则在缺血一定时间后拔出鱼线 结扎死颈外动脉残端就能恢复颈总到颈内的动脉血供 实验方法 6 待大鼠苏醒后 观察症状 模型成功可见大鼠向对侧绕圈或追尾 倾倒神经功能缺失体征评分参考Longa5分制法 缺血24h后进行评分 0分 无神经损伤症状 1分 不能完全伸展对侧前爪 2分 向对侧转圈 3分 向对侧倾倒 4分 不能自发行走 意识丧失 分值越高 说明动物行为障碍越严重 实验方法 7 取脑 脱颈椎处死大鼠 剪开皮肤暴露头及颈段 从颈椎处剪断颈髓 去除肌肉和颅骨上的膜 剪刀伸进去0 8cm 1cm 沿正中以及两侧45度分别剪一刀 用大号弯头止血钳去除颅骨眼科镊拉断硬脑膜 取出脑组织 实验方法 8 染色 脑组织用NS冲洗净表面的毛和血迹 20 速冻10min后切片5 6片 第一刀在脑前极与视交叉连线中点处 第二刀在视交叉部位 第三刀在漏斗柄部位 第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间 切片置1 TTC染液中 60 烘箱中染色10min用imagepro plus6 0软件计算梗塞面积 讨论 优点不开颅 效果肯定 可准确控制缺血及再灌注时间对全身影响小 动物存活时间长 适于慢性脑损伤的研究 缺点非直视下的手术动物品系 体重 批次会影响结果 操作者手术熟