第二节 dna片段的扩增——pcr技术

1 / 5第二节 DNA 片段的扩增PCR 技术第二节 DNA 片段的扩增PcR 技术 课标要求 1理解 PcR 的原理，讨论 PcR 应用。2尝试 PcR 技术的基本操作。知识梳理 一背景知识 1细胞内 DNA 复制步骤： （1）在作用下解开 DNA 双链 (2)在作用下，以 DNA 单链为模板，合成一段;（两条 DNA模板链各需一个 RNA 引物） (3)以 RNA 引物为起点，在作用下，以为原料，按照碱基互补配对原则合成两条新链。 2聚合酶链式反应(PcR)概念; 。 3PcR 过程与细胞内 DNA 复制过程区别： （1）引物是人工合成的单链，个脱氧核苷酸，而不是 RNA。 (2)解旋通过对反应的控制来实现而不依靠。 4PcR 过程： (1)将 PcR 缓冲液、 、一对引物、四种、DNA 聚合酶、mg2+等成分加入到特制的微量离心管中。 2 / 5(2)高温变性： 。 (3)低温复性： 。 (4)中温延伸： 。 二实践案例 1PcR 实验虽然原理复杂，但操作十分简单，因为生物制剂公司已把 PcR 缓冲液、DNA 聚合酶、脱氧核苷酸贮备液等组分配成了 PcR 试剂盒，实验人员仅需加入模板 DNA 及引物即可，所以快速、高效、灵活和易于操作是 PcR 技术的突出优点。2材料用具略 3活动程序(1)加入各种试剂，混合，离心 10s，放入 PcR 仪中。 (2)扩增循环，在 PcR 仪上设置好 PcR 热循环程序： 循环数 高温变性 低温复性 中温延伸 第一次 95,5min 55,1min 72,1min 30 次 3 / 595,30s 55,30s 72,1min 最后一次 72,7min 注：反应产物在 4保存 4检测扩增效果（1）稀释样品 10 倍（2）以 H2o 作对照，在波长 260nm 处，将紫外分光光度计读数调到零。 （3）加入到厚度为 1cm 的比色杯中，测定 260nm 处的光吸收值（4）DNA 浓度（g/mL）=（A260nm/）稀释倍数三探究活动 PcR 实验虽然操作简单，但实验设备及药品价格较高，可以利用自己准备的简易材料，设计并进行 PcR 技术的模拟实验操作。四PcR技术意义 PcR 能，从而有效地解决了因为样品中 DNA 含量而难以对样品进行分析研究的难题，大大提高了对 DNA 分子的分析和检测能力，被广泛应用于、基因序列分析、遗传病诊断，古生物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等。 五小知识： 1DNA 的两条链是反向平行的，为了明确地表示 DNA 的方向，通常将 DNA 的羟基(-oH)末端称为 5端。DNA 聚合酶不能从头开始合成 DNA，而只能从 3端延伸 DNA 链。但4 / 5DNA 合成的方向是从子链的 5端向 3端延伸。 2引物是一段 RNA，它能与 DNA 母链的一段碱基序列互补配对。用于 PcR 的引物长度通常为 2030 个核苷酸。 3在 80c 的温度范围内，DNA 的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的 DNA 链又会重新结合成双链。复习指导 本节课复习要注重细胞内 DNA 复制过程和体外 DNA 片段的扩增PcR 技术的过程，运用 DNA 复制过程原理相同的方法，明确体外 DNA 片段的扩增PcR 技术在基因克隆、基因序列分析、遗传病诊断，古生物学研究以及形侦破案、亲子鉴定等方面的地位和作用。如何在体外创设细胞内 DNA复制的条件是 PcR 技术的关键，细胞内的各种条件实际上是利用 PcR 仪来模拟的。PcR 仪原理复杂，操作简单。 典例解析 过程与细胞内的 DNA 复制过程相比，主要有两点不同，它们是（） PcR 过程需要的引物是人工合成的 DNA 单链 PcR 过程不需要 DNA 聚合酶 PcR 过程中 DNA 的解旋不依靠解旋酶，而是通过对反应温度的控制来实现的 5 / 5PcR 过程中，DNA 不需要解旋，直接以双链 DNA 为模板进行复制 ABcD 解析PcR 过程与细胞内的 DNA 复制过程相比，主要有两点不同。第一，PcR 过程需要的引物不是 RNA，而是人工合成的 DNA 单链，其长度通常为 2030 个脱氧核苷酸。第二，PcR 过程中，DNA 解旋不依赖解旋酶，而是通过对反映温度的控制来实现的。 答案c。 2在 PcR 扩增前，需要将下列哪些物质加入微量离心管中？（） 模板 DNA模板 RNADNA 解旋酶耐高温的 DNA 聚合酶引物PcR 缓冲