微生物学第7章细菌与病毒的微生物学检查.ppt

第7章细菌与病毒的微生物学检查法LaboratoryDiagnosisofBacterialandViralInfections商庆龙InstructorinMicrobiologyDept ofHMUNov 6 2009 病原学检查程序 标本 分离培养 鉴定 怎么办 培养基制备细菌培养法三段划线 纯培养无菌技术 油镜使用 细菌形态学观察革兰染色法生化反应观察药敏试验血清学诊断核酸检测 标本 染色镜检 血平板 观察 可疑菌落 染色镜检 纯培养 甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验耐热核酸酶试验动物试验 药敏试验 化脓性球菌的分离鉴定程序 MicrobiologyLab 标本的采集与送检原则 无菌操作感染部位 病变部位采集标本不同时间采集不同标本尽量在使用抗生素前采集检查特异性抗体 采急性期和恢复期双份血清及时送检 第一节细菌感染的微生物血检查法 一 细菌学诊断 示踪性检测形态学检查分离培养生化试验血清学鉴定 致病力和药敏测定动物实验毒力检测药物敏感试验 形态学检查 细菌染色检查法暗视野检查 形态和染色性有明显特征的病原菌 革兰染色结果比较抗酸染色 革兰染色阳性菌革兰染色阴性菌 葡萄球菌 大肠埃希菌 结核分枝杆菌M Tuberculosis 确定细菌性感染最可靠的方法培养特征形态特征 病原菌的分离和鉴定 菌落 大小形态颜色表面性状透明度溶血性 金黄色葡萄球菌光滑型菌落 结核分枝杆菌粗糙型菌落 Flamesterilizewireloop metalforceps etcbeforeandafteruseinahoodedBunsenburner 得到细菌纯培养物后 用糖发酵试验 吲哚试验 硝酸盐还原试验等对细菌的酶系统和其代谢产物的检查 是鉴别细菌的重要方法之一 特别是有些细菌特征基本相同 因此有必要经分离培养后用生化试验进行鉴定 但步骤繁杂耗时 随着现代化技术的发展 细菌检测的技术水平也不断地提高 正在逐步实现快速化 微量化 自动化和标准化 生化反应 血清学鉴定 利用含已知的特异性抗体的免疫血清 对细菌 志贺菌属 沙门菌属 进行群和型的鉴别常用方法是玻片凝集试验 动物试验 毒力检测 半数致死量LD50半数感染量ID50Elek平板 纸碟法试管法小杯法凹孔法 最低抑菌浓度 MIC 是能够抑制细菌生长的最低药物浓度 最低杀菌浓度 MBC 是指能够杀灭细菌最低药物浓度 MIC和MBC的值越低 表示细菌对该药越敏感 药物敏感试验 二 病原菌成分检测 抗原的检测用已知的特异性抗体检测未知的细菌抗原成分核酸的检测核酸杂交PCR ToxinsfromE coli0157 H7bacteriaandotherscancausefataldiseaseinhumans andtheycanbefoodborne 细菌核酸的检测 基因探针DNA印迹杂交 southernblot 质粒指纹图谱分析PCR PCRMachine 聚合酶链反应 PCR PCR产物的检测 三 抗体的检测 辅助诊断抗体存在于血清或其他体液中 由中国科学院研制的IgM抗体检测试剂盒 酶联免疫法 被国家食品药品监督管理局批准进行试生产 Immunologyevaluatesapatientimmunesystembydetectingthebodiesresponse anantibody toaforeignagent orantigen Thepresenceofantigenscanbedetectedtoo 细菌感染的血清学诊断 BioThreatAlertTestStrips BTAAssayandReader TrackingChainofCustody AutonomousPathogenDetectionSystem APDS TheAutonomousPathogenDetectionSystemiscapableofcontinuous automated 24 hourmonitoringforpathogens withresultsreportedevery30minutes HANAAinHandAboutthesizeofabrick theHANAAbiodetectionsystemcanbeheldinonehandandweighslessthanakilogram Thesystemwasdesignedforemergencyresponsegroups suchasfirefightersandpolice whoareoftenfirstonthesceneatsiteswherebioterrorismmayhaveoccurred Eachhandheldsystemcantestfoursamplesatonce eitherthesametestonfourdifferentsamplesorfourdifferenttestsonthesamesample HANAAcanprovideresultsinlessthan30minutes comparedwiththehourstodaysthatregularlaboratoryteststypicallytake BioSensors ThistechniqueisessentiallyanELISA Enzyme LinkedImmunosorbentAssay method howeverwithanextremelysensitiveall electronicdetectionsystem TinycomputerchipcandetecttoxinsThe labonachip itsdeveloperssay couldhavepotentialapplicationsinlawenforcement environmentalpollutiondetection militarymedicalcare orforanyonewhoneedsacheapandportablemethodofidentifyingthepresenceofspecifictoxinsorDNAwithoutthebenefitofalaboratory Thisdevicecouldbedevelopedintosomethingmedicsuseinthefieldtogetanswersinamatterofminutesratherthanhours Researchonthefluorescencemicroscopydetectionsystem whichprovidesacheapandportablemethodforidentifyingspecifictoxinsorDNA wasfundedbytheNationalScienceFoundation UCBERKELEYPHOTO 第二节病毒感染的微生物学检测法 一 形态学检查 电子显微镜光学显微镜内基小体 Negribody 可辅助诊断狂犬病 扫描电镜透射电镜 狂犬病病毒 天花病毒 冠状病毒 SARS冠状病毒 二 病毒分离培养的方法 采集标本 抑制杂菌 青 链霉素 病毒分离易感动物 出现病状鸡胚 病变或死亡细胞培养 细胞病变 病毒鉴定 血清学方法 动物接种鸡胚培养组织培养 细胞培养 原代细胞二倍体细胞传代细胞 细胞培养技术 三 病毒在细胞内增殖的鉴定指标 细胞病变效应 cytopathiceffect CPE 红细胞吸附 hemadsorption 红细胞凝集 hemagglutination 病毒干扰作用 viralinterference 中和试验 neutralizationtest NT 正常细胞 病变细胞 病毒的定量 TCID50病毒感染性和毒力的指标是50 组织细胞感染量 50 tissuecultureinfectiousdose PFU空斑形成试验 plaqueformation 用于病毒浓度的精确定量 空斑形成试验 红细胞吸附hemadsorption病毒在细胞内增殖 病毒或其血凝素会出现于感染细胞膜上 使感染细胞能与红细胞结合 检测正粘病毒和副粘病毒的间接指标 Hemadsorptionofmonkeyredbloodcells 红细胞凝集hemagglutination一种检测含血凝素病毒的方法 四 病毒成分的检测 病毒核酸的检测核酸杂交技术核酸扩增技术基因芯片 genechip 病毒抗原的检测荧光标记技术 ELISA或放射免疫标记技术 将已知的抗病毒血清先与病毒悬液混合在一起 在一定温度条件下作用一定时间后 接种于敏感细胞