消毒剂消毒效果确认方案

For use only in Respirent Pharmaceuticals Company Limited No COPYING PERMITTED All original copies to be Issued and Approved by QA 本文件属重庆润生科技有限公司所有 经 QA 批准后复印 消毒剂消毒效果确认方案消毒剂消毒效果确认方案 For use only in Respirent Pharmaceuticals Company Limited No COPYING PERMITTED All original copies to be Issued and Approved by QA 本文件属重庆润生科技有限公司所有 经 QA 批准后复印 姓名姓名 职职位位签名签名日期日期 制定人制定人 格式审核人格式审核人 审核人审核人 批准批准人人 生效日期生效日期 For use only in Respirent Pharmaceuticals Company Limited No COPYING PERMITTED All original copies to be Issued and Approved by QA 本文件属重庆润生科技有限公司所有 经 QA 批准后复印 TABLE OF CONTENTS 目录目录 1PURPOSE AND SCOPE 目的和范围 4 2OVERVIEW 概述 4 3REGULATIONS STANDARDS REFERENCES 法规 标准和参考文献 4 4RESPONSIBILITIES AND TRAINING 职责和培训 4 5PREPARATION 验证准备 5 6VALIDATION TESTS 验证测试 6 7DEVIATIONS CHANGES 偏差和变更 10 8ANNEXES 附件 11 9VERSION 修订记载 11 For use only in Respirent Pharmaceuticals Company Limited No COPYING PERMITTED All original copies to be Issued and Approved by QA 本文件属重庆润生科技有限公司所有 经 QA 批准后复印 1目的和范围目的和范围 1 1目的 本方案的目的是为了确认各洁净级别的操作间及设备外表面按照规定的消毒程序消毒能够达 到消毒 防止污染的目的 并在消毒剂有效期内能确保其消毒效力能符合要求 1 2范围 本验证方案适用于 QC 洁净区的墙面 天花板 门窗 机器设备 仪器 操作台 桌椅等表 面以及操作人员双手 手套 所用的消毒 本文件合并了方案和记录 当验证完成后 本文件将作为确认报告的附件 2概述概述 2 1本公司拟定用于仪器设备和洁净区表面消毒的消毒剂有 XXXXXX 本次验证方案将选用以 上 X 种消毒剂分别进行验证试验 作用对象一样的消毒剂每月轮换使用 避免表面微生物 产生耐药菌株 为了确认消毒剂的消毒效力我们通过定量悬液试验和定量载体试验对消毒效 果进行确认 2 2洁净区设施表面材质有彩钢板 不锈钢和玻璃三种 故定量载体试验选用彩钢板载片 不锈 钢载片和玻璃裁片模拟洁净区设施表面进行验证试验 3法规 标准和参考文献法规 标准和参考文献 3 1中华人民共和国国家标准 消毒与灭菌效果的评价方法与标准 3 2中华人民共和国药典 2015 年版 第四部 4职责和培训职责和培训 4 1职责 姓名部门职务职责 4 2Training 培训 上表中提及的员工都会参与验证实施 并且会在验证实施前经过培训 培训记录作为附件附 入本方案 For use only in Respirent Pharmaceuticals Company Limited No COPYING PERMITTED All original copies to be Issued and Approved by QA 本文件属重庆润生科技有限公司所有 经 QA 批准后复印 5验证准备验证准备 5 1仪器 设备 本次验证需要使用到的仪器 设备及其信息如下 仪器名称编号校准有效期至 电热恒温水浴锅 生化培养箱 生化培养箱 生化培养箱 锥形瓶 试管 移液枪 移液管 量筒 生物安全柜 脉动真空灭菌柜 5 2标准物质 试药和试液 名称浓度 级别编号有效期至 PH7 0 氯化钠 蛋白胨 缓冲液 0 1 卵磷脂 0 1 吐温 80 0 1 蛋白胨缓冲液 5 3菌种 微生物检验方法验证方案适用 菌种传代次数编号有效期至 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 For use only in Respirent Pharmaceuticals Company Limited No COPYING PERMITTED All original copies to be Issued and Approved by QA 本文件属重庆润生科技有限公司所有 经 QA 批准后复印 5 4培养基 培养基批号灭菌批号有效期至 胰酪大豆胨液体培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 6验证测试验证测试 6 1通用项目 6 1 1培养基 按 QS QC GAM 014 培养基配制标准操作规程 和 QS QC GAM 013 培养基适 用性检查标准操作规程 要求准备相应的培养基 培养基适用性检查记录作为附件附入本方 案 6 1 2消毒液 XXXXX 6 1 3稀释剂为 PH7 0 氯化钠 蛋白胨缓冲液 中和剂为 0 1 卵磷脂 0 1 吐温 80 0 1 蛋白胨 缓冲液 6 1 4菌液准备 6 1 4 1菌液的制备 见 XXXX 菌种传代 保藏 使用和灭活标准操作规程 6 1 4 2菌液计数确认 将金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌的新鲜培养物用 PH7 0 氯化 钠 蛋白胨缓冲液按 10 倍梯度稀释成 10 6 10 7 10 8三个浓度 枯草芽孢杆菌 白色念珠 菌的新鲜培养物用 PH7 0 氯化钠 蛋白胨缓冲液按 10 倍梯度稀释成 10 5 10 6 10 7三个浓 度 取黑曲霉新鲜培养物加入 3 5ml 含 0 05 ml ml 吐温 80 的 0 9 无菌氯化钠溶液 将孢 子洗脱 然后用带纱布的移液管吸出孢子悬液至无菌试管 再用 PH7 0 氯化钠 蛋白胨缓冲 液按 10 倍梯度稀释成 10 5 10 6 10 7三个浓度 每种菌各个浓度的菌液分别取 1ml 至平皿 中 同法平行制备两个平皿 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 的平皿倾注 15 20ml 45 以下的胰酪大豆胨琼脂培养基 白色念珠菌 黑曲霉的平皿倾注 15 20ml 45 以下的沙氏葡萄糖琼脂培养基 6 1 4 3胰酪大豆胨琼脂培养基平皿于 30 35 生化培养箱中培养 培养时间不超过 3 天 每天至少 计数一次 沙氏葡萄糖琼脂培养基平皿于 20 25 生化培养箱中培养 培养时间不超过 5 天 每天至少计数一次 根据各个浓度菌液的计数情况推算出 1ml 浓菌悬液的含菌数 记录见附 件一 菌液含菌数计数记录 6 1 5中和剂确认试验 6 1 5 1根据菌液计数所得数据 将新鲜的浓菌液用 PH7 0 氯化钠 蛋白胨缓冲液按 10 倍梯度稀释成 5 105 5 106CFU ml 的工作菌液 6 1 5 2将配制好的消毒液用不同的工作菌液进行以下分组试验 For use only in Respirent Pharmaceuticals Company Limited No COPYING PERMITTED All original copies to be Issued and Approved by QA 本文件属重庆润生科技有限公司所有 经 QA 批准后复印 混合液 A混合液 B 组号取 0 5ml 工作菌液 加入下列溶液中 取混合液 A 0 5ml 加入下列溶液 取混合液 B 或混合 液 B 的稀释溶液 0 5ml 平板计数 2 皿 组 1消毒剂 4 5ml稀释液 4 5ml混合液 B 10 1 2消毒剂 4 5ml中和剂 4 5ml混合液 B 10 1 3中和剂 4 5ml稀释液 4 5ml10 2 103 4 中和产物 4 5ml 消毒液与 中和剂比例为 1 1 稀释液 4 5ml10 2 10 3 5稀释液 4 5ml 混匀 作用 10min 稀释液 4 5ml 混匀 作用 10min 10 2 10 3 6稀释液和中和剂各 1 0ml 注入无菌平皿中 各制备 2 皿 作为阴性对照组 具体操作 第一组 取消毒剂 4 5ml 工作菌液 0 5ml 混匀作用 10min 后 取混合液 A0 5ml 稀释 液 4 5ml 混匀作用 10min 取混合液 B 或浓度为 10 1的混合液 B0 5ml 注皿 各平行制备 2 皿 第二组 取消毒剂 4 5ml 工作菌液 0 5ml 混匀作用 10min 后 取混合液 A0 5ml 中和 剂 4 5ml 混匀作用 10min 取混合液 B 或浓度为 10 1的混合液 B0 5ml 注皿 各平行制备 2 皿 第三组 取中和剂 4 5ml 工作菌液 0 5ml 混匀作用 10min 后 取混合液 A0 5ml 稀释 液 4 5ml 混匀作用 10min 用稀释剂进行 10 倍系列稀释成 10 2 10 3 取相应稀释级 0 5ml 注皿 各平行制备 2 皿 第四组 取消毒剂和中和剂 1 1 的混合液 4 5ml 工作菌液 0 5ml 混匀作用 10min 取 混合液 A0 5ml 稀释液 4 5ml 混匀作用 10min 后 用稀释剂进行 10 倍系列稀释成 10 2 10 3 取相应稀释级 0 5ml 注皿 各平行制备 2 皿 第五组 取稀释液 4 5ml 工作菌液 0 5ml 混匀作用 10min 取混合液 A0 5ml 稀释液 4 5ml 混匀作用 10min 后 用稀释剂进行 10 倍系列稀释成 10 2 10 3 取相应稀释级 0 5ml 注皿 各平行制备 2 皿 各组高浓度平皿编号为 1 2 低浓度平皿编号为 3 4 第六组 分别取稀释液和中和剂各 1 0ml 注入无菌平皿中 胰酪大豆胨琼脂培养基和沙 氏葡萄糖琼脂培养基各制备 2 皿 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草杆菌芽孢菌 铜绿假单胞菌用胰酪大豆胨琼脂培养 基 倒置 30 35 培养 3 天计数 白色念珠菌 黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂培养基 倒置 20 25 培养 5 天计数计数 逐日观察 6 1 5 3结果判定 试验结果应符合以下全部条件 判断所选中和剂合格 第 1 组无菌生长 或仅有少数试 验菌菌落生长 第 2 组菌落数比第 1 组菌落数多 但明显少于第 3 4 5 组菌落数 第 3 4 5 组有相似菌落数生长 其每组间菌落数误差率不超过 15 计算公式如下 3 组间菌落平均数 各组菌落平均数 的绝对值之和 误差率 100 3 3 组间菌落平均数 For use only in Respirent Pharmaceuticals Company Limited No COPYING PERMITTED All original copies to be Issued and Approved by QA 本文件属重庆润生科技有限公司所有 经 QA 批准后复印 6 1 5 4记录见附件二 中和剂确认记录 6 2消毒剂消毒效果确认 6 2 1定量悬液试验 6 2 1 1根据菌液计数所得数据 将新鲜的浓菌液用 PH7 0 氯化钠 蛋白胨缓冲液按 10 倍梯度稀释成 5 105 5 106 CFU ml 的工作菌液 6 2 1 2将配制好的消毒液用不同的工作菌液分别进行以下分组试验 试验重复 3 次 混合液 A混合液 B 组号取 0 5ml 工作菌液 加入下列溶液中 作用 时间 取混合液 A 0 5ml 加入下列溶液 作用 时间 取混合液 B 或混合 液 B 的稀释溶液 1ml 平板计数 2 皿 组 消毒剂 4 5ml8min中和剂 4 5ml混合液 B 10 1 消毒剂 4 5ml10min中和剂 4 5ml混合液 B 10 1试验组 消毒剂 4 5ml12min中和剂 4 5ml 10min 混合液 B 10 1 阳性对照用稀释液将工作菌液进行 10 倍系列稀释10 4 10 5 阴性对照稀释液和中和剂各 1 0ml 注入无菌平皿中 各制备 2 皿 作为阴性对照组 具体操作 试验组 取消毒剂 4 5ml 工作菌液 0 5ml 分别混匀作用 8min 10min 12min 后 取 混合液 A0 5ml 中和剂 4 5ml 混匀作用 10min 取混合液 B 或浓度为 10 1的混合液 B1ml 注皿 各平行制备 2 皿 阳性对照 用稀释液将工作菌液进行 10 倍系列稀释至 10 4 10 5 取相应稀释级 1ml 注 皿 各平行制备 2 皿 阴性对照 分别取稀释液和中和剂各 1 0ml 注入无菌平皿中 胰酪大豆胨琼脂培养基和 沙氏葡萄糖琼脂培养基各制备 2 皿 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草杆菌芽孢菌 铜绿假单胞菌用胰酪大豆胨琼脂培养 基 倒置 30 35 培养 3 天计数 白色念珠菌 黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂培养基 倒置 20 25 培养 5 天计数计数 逐日观察 6 2 1 3记录见附件三 消毒剂消毒效果确认定量悬液试验记录 For use only in Respirent Pharmaceuticals Company Limited No COPYING PERMITTED All original copies to be Issued and Approved by QA 本文件属重庆润生科技有限公司所有 经 QA 批准后复印 6 2 2定量载体试验 6 2 2 1所用载体 不锈钢 彩钢板 玻璃 6 2 2 2将灭菌载体平放于灭菌平皿内 每个载体滴注定量菌液 载体回收菌量达 5 105 5 106cfu 片 涂匀 放 37 培养箱待干 6 2 2 3将配制好的消毒液用不同的染菌载体分别进行以下分组试验 试验重复 3 次 混合液 A混合液 B 组号染菌载体作用 时间 与消毒液作用后 的染菌载体 作用 时间 取混合液 B 或混合 液 B 的稀释溶液 1ml 平板计数 2 皿 组 消毒剂 5ml8min中和剂 5ml混合液 B 10 1 消毒剂 5ml10min中和剂 5ml混合液 B 10 1试验组 消毒剂 5ml12min中和剂 5ml混合液 B 10 1 阳性对照稀释剂 5ml 中和剂 5ml 震荡 50 至 80 次 10min 10 2 10 3 阴性对照稀释液和中和剂各 1 0ml 注入无菌平皿中 各制备 2 皿 作为阴性对照组 具体操作 试验组 取消毒剂 5ml 染菌载体 分别混匀作用 8min 10min 12min 后 取与消毒 液作用后的染菌载体 中和剂 5ml 震荡 50 至 80 次混匀作用 10min 取混合液 B 或浓度为 10 1的混合液 B1ml 注皿 各平行制备 2 皿 阳性对照 用稀释液代替消毒液同试验组操作 将混合液 B 用稀释剂进行 10 倍系列稀 释成 10 2 10 3 取相应稀释级 1ml 注皿 各平行制备 2 皿 阴性对照 分别取稀释液和中和剂各 1 0ml 注入无菌平皿中 胰酪大豆胨琼脂培养基和 沙氏葡萄糖琼脂培养基各制备 2 皿 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草杆菌芽孢菌 铜绿假单胞菌用胰酪大豆胨琼脂培养 基 倒置 30 35 培养 3 天计数 白色念珠菌 黑曲霉用沙氏葡萄糖琼脂培养基 倒置 20 25 培养 5 天计数计数 逐日观察 6 2 3记录见附件四 消毒剂消毒效果确认定量载体试验记录 6 2 4各组高浓度平皿编号为 1 2 低浓度平皿编号为 3 4 6 2 5按不同稀释度推算出每个样本存活菌数 cfu mL 计算出杀灭率 杀灭率计算公式如下 6 3结果判定 3 次试验的杀灭率均 99 9 判为消毒合格 7偏差和变更偏差和变更 7 1偏差登记 Number 编号 Description 描述 Re