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文档简介

牛奶中三聚氰胺 Melamine ELISA检测以勤邦CA301试剂盒为例 农业部农产品质量安全监督检验测试中心 呼和浩特 狄彩霞 0471 5904559 内容 一 概要 二 原理 三 检测步骤 四 注意事项 一 概要 三聚氰胺 Melamine 简称三胺 是一种三嗪类含氮杂环有机化合物 被用作化工原料 它是白色单斜晶体 几乎无味 微溶于水 对身体有害 不可用于食品加工或食品添加物 长期或反复大量摄入对肾与膀胱产生影响 导致产生结石 检测方法 气相色谱质谱法 GC MS 液相色谱串联质谱法 LC MS MS 高效液相色谱法 HPLC 准确 成本高 操作复杂 ELISA 试剂盒检测 快速 简便 准确 灵敏度高 二 原理 采用间接竞争ELISA方法 在酶标板微孔条上预包被三聚氰胺抗原 样本残留的三聚氰胺和微孔条上预包被的抗原竞争三聚氰胺抗体 加入酶标二抗后 用TMB底物显色 样本吸光值与其残留物三聚氰胺成负相关 与标准曲线比较 再乘以其对应的稀释倍数 即可得出样本中三聚氰胺的含量 三 检测步骤 1 准备 试剂盒20 回至室温 摇匀 配洗涤工作液 20倍浓缩 1份浓缩洗涤液 19份去离子水 4 下保存1个月 2 编号 取需要数量微孔板 将样本和标准品对应微孔编号 3 加液 加标准品 样本20 l 加酶标二抗50 l 再加抗体工作液80 l 振荡混匀 盖板避光反应20min 4 洗板 孔内液体甩干 每孔加洗涤液250 l 洗涤4 5次 最后用吸水纸拍干 5 显色 加显色液A B各50 l 混匀 盖板避光反应10min 6 测定 加终止液50 l 混匀 在酶标仪450nm读OD值 7 结果判定 标准品 样品输入软件计算 四 注意事项 1 试剂盒选用不同 操作过程不同 请按购买试剂盒说明操作 2 室温低于20 或试剂及样本未回到室温20 25 会导致OD偏低 3 每加一种试剂前要将其摇匀 4 不同批号试剂盒不要混用 5 试剂盒2 8 保存 6 0标准的吸光度值小于0 5时 表示试剂可能变质 7 加入底物液A B后 一般显色10min 若颜色较浅可延长反应时间到15min 但不可超过20min 反之则减短反应时间 8 每种液体加入速度尽量一致 快 1ppm 1000ppb1ppb 1000pptppm即 mg L 毫克 升 ppb即 ug L 微
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