脂肪酸β氧化作用ppt课件.ppt

实验八脂肪酸 氧化作用 一 目的与任务 了解脂肪酸的 氧化作用通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量 掌握测定 氧化作用的方法及其原理 二 实验原理 在肝脏中 脂肪酸经 氧化作用生成乙酰辅酶A 2分子乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸 乙酰乙酸可脱羧生成丙酮 也可还原生成 羟丁酸 乙酰乙酸 羟丁酸和丙酮总称为酮体 酮体为机体代谢的中间产物 问题 为什么要生成酮体 其意义是什么 氧化的生化历程 乙酰CoA RCH2CH2CO SCoA 脂酰CoA脱氢酶 脂酰CoA 烯脂酰CoA水化酶 羟脂酰CoA脱氢酶 酮酯酰CoA硫解酶 RCHOHCH2CO ScoA RCOCH2CO SCoA RCH CH CO SCoA CH3CO SCoA R CO ScoA 乙酰CoA 酮体的生成 肝脏 羟甲基戊二酸单酰CoA HMGCoA 脂肪酸 硫解酶 2CH3COSCoA CH3COCH2COSCoA 乙酰乙酰CoA HMG CoA合成酶 CH3COSCoA CoASH 氧化 CoASH 2NaOH I2NaOI NaI H2OCH3COCH3 3NaOICHI3 CH3COONa 2NaOH剩余的碘用标准硫代硫酸钠溶液滴定 NaOI NaI 2HClI2 2NaCl H2OI2 2Na2S2O3Na2S4O6 NaI 碘仿 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温 生成的丙酮在碱性条件下 与碘生成碘仿 反应式 问题 为什么说本实验的关键是制备新鲜的肝糜 根据滴定对照与滴定样品所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差 可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量 三 实验器材 5ml微量滴定管恒温水浴吸管剪刀50ml锥形瓶漏斗试管及试管架 四 试剂与材料 鲜猪肝 0 5g ml0 5 淀粉溶液 0 5g淀粉溶解于水中 定容至100ml0 9 氯化钠溶液 0 9g氯化钠溶解于水中 定容至100ml0 5M丁酸溶液 取5ml丁酸溶于100ml0 5M氢氧化钠溶液中15 三氯乙酸溶液 15g三氯乙酸溶解于水中 定容至100ml 10 氢氧化钠 10g氢氧化钠溶解于水中 定容至100ml10 盐酸 10ml浓盐酸稀释至100ml0 2M碘液 25 4gI2 50gKI定容到1000ml 用标准0 05M硫代硫酸钠标定标准0 01M硫代硫酸钠 将已标定的0 05M硫代硫酸钠稀释成0 01M1 15MPH7 6磷酸缓冲液 1 15MNa2HPO486 8ml 1 15MNaH2PO413 2ml 五 操作步骤 肝糜制备 取肝用0 9 NaCl冲洗污血 用滤纸吸去表面水分 称肝组织5g置研钵中 加少量的0 9 NaCl研成细浆 再加0 9 NaCl到总体积10ml 取2个50ml锥形瓶 各加入3ml1 15M磷酸盐缓冲液 pH7 6 其中一个锥形瓶中加2ml正丁酸 另一个锥形瓶中不加正丁酸 对照 再各加入2ml肝糜 混匀于43 恒温水浴内保温1 5小时 取出锥形瓶 各加入3ml15 三氯乙酸 混匀 对照瓶内追加2ml正丁酸 混匀 静置15min 分别过滤 滤液收集在2支试管中 酮体测定 吸取两种滤液各2ml分别放入另2个锥形瓶中 各加3ml0 1M碘液和3ml10 NaOH 摇匀 静置10min 加入6ml10 盐酸中和 用0 01M标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘 滴至浅黄色时 加入3滴0 1 淀粉作指示剂 摇匀 滴至蓝色消失为止 记录所消耗的硫代硫酸钠液的ml数 问题 15 三氯乙酸的作用是什么 肝脏的丙酮含量 mmol g A B CNa2S2O3 1 6 5A 滴定对照所消耗的0 01M硫代硫酸钠溶液的ml数B 滴定样品所消耗的0 01M硫代硫酸钠溶液的ml数CNa2S2O3 标准硫代硫酸钠溶液的浓度 M 1 6 1mol标准硫代硫酸钠相当于丙酮的量 六 结果计算 七 课后研讨题 1 总结本实验操作的关键环节和注意事项 2 酮体为什么只能在肝外组织进行作用 3 什么叫酮体 为什么正常代谢时产生的酮体含量少 在什么情况下血中酮体含量增高 而尿中也能出现酮体 4 为什么测定碘仿反应中剩余的碘可以计算出样品中的丙酮的含量 5 查阅资料 介绍在哪些情况下会促进脂肪酸的氧化 6 查阅资料 介绍酮体检测的方法 参考值及临床意义 八 汇报要求 以大组为单位课后总结结果 讨论 制作一