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文档简介

生物化学检验 酶活性测定方法及酶学分析类型 酶活性测定方法及酶学分析类型 酶学分析是20世纪70年代发展起来的一类检测技术 包括酶活性测定和底物浓度测定两大类型 酶活性的测定方法包括终点法和连续监测法 一 酶活性的测定方法 按照对酶促反应时间的选择不同 连续监测法 固定时间法 一 固定时间法 分类 终点法 在反应进行到预定时间后要终止反应 两点法 该方法反应时间的预定是从t1 t2 定义 测定酶促反应开始后一段时间内底物的减少量或产物的增加量 特点 优点是简单 缺点是难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期 注意 固定时间法时间段的预定不宜太长 一般以30 60分钟为宜 二 连续监测法 2 原理 1 定义 测定底物或产物随时间的变化量 又称为速率法 该方法每隔一定时间 10s 60s 测定一次底物或产物的变化量 连续测定多点 然后将测定结果对时间作图 绘制反应速度曲线 3 特点 在方法设计上 选择紫外吸收法或色原显色法 缺点 要求高 要求能够精确地控制温度 pH值和底物浓度等反应条件 要求仪器具有恒温装置及自动监测功能 半自动及自动生化分析仪都能达到这些要求 优点 能动态观测酶促反应进程 可以明显地找到反应的线性期 结果准确可靠 标本和试剂用量少 可在较短时间内完成测定 4 连续监测法的种类 1 直接连续监测法要求底物或产物能够直接测定2 间接连续监测法间接法又分为一步间接法和酶偶联法 酶偶联法指在原来的反应体系中再加入一些酶试剂 使加入的酶促反应和被测酶的酶促反应偶联起来 最后的反应产物可直接监测 进而推测出第一个酶的活性浓度 5 酶活性浓度的计算 摩尔消光系数 的定义为在特定条件下 光径为1 00cm时 通过所含吸光物质的浓度为1 00mol L时的吸光度 如用连续监测法测定在线性范围内每分钟吸光度的变化 A min 以U L表示酶活性浓度时 则按下式进行计算 式中 V 反应体系体积 ml 摩尔消光系数 cm2 mol 1 v 样本量 ml L 比色杯光径 cm A 吸光度变化106为换算系数
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