实验 MS培养基母液和常用试剂的配制.ppt

实验1胡萝卜愈伤组织的诱导培养 实验内容 1 1MS培养基母液和常用试剂的配制1 2胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制1 3胡萝卜愈伤组织的诱导1 4胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制1 5胡萝卜愈伤组织的继代培养 实验1 1MS培养基母液和常用试剂的配制 1实验目的通过本次实验 使学生能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂 巩固相关理论基础知识 2实验原理 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质 配制培养基时 为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差 以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果 预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液 待使用时稀释到要求的浓度 母液的浓度为培养基浓度的10倍 20倍 50倍 100倍等或更高 3主要实验用具和仪器 冰箱 普通天平 分析天平 各种型号的试剂瓶 棕色和白色 移液管 量筒 烧杯 容量瓶 搪瓷杯 药勺 称量纸 玻棒 标签纸 pH试纸 pH5 4 7 0 电磁炉等 4药品和试剂 硝酸铵 硝酸钾 氯化钙 硫酸镁 磷酸二氢钾 碘化钾 硫酸锰 硫酸锌 钼酸钠 硫酸铜 氯化钴 乙二胺四乙酸二钠 硫酸亚铁 甘氨酸 盐酸硫胺素 盐酸吡哆素 烟酸 肌醇 2 4 D 2 4 二氯苯氧乙酸 NAA 萘乙酸 6 BA 6 苄基腺嘌呤 KT 浓盐酸 氢氧化钠 浓硫酸 重铬酸钾 95 酒精 蒸馏水等 5MS培养基母液和常用试剂的配制流程 5 1培养基的成分目前 不论液体培养还是固体培养 大多数植物组织培养中所用的培养基都是由无机营养物 碳源 维生素 生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成 5 2培养基的配制方法 配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里 加上蔗糖 琼脂和其他必要的补加物 再加入蒸馏水使之达到最终的容积 最后调节pH值 高压灭菌 于是制成所需要的培养基 如果没有培养基干粉 则可采用以下两种方法来配制 一个是按照配方规定的数量分别称量出各种成分 分别使它们溶解于水 然后再将它们混合在一起 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液 母液 贮存在2 4 冰箱内 待配培养基时取出 按比例稀释配用 此法较为常用 5 3MS培养基母液的配制 母液的配制有两种方法 一种是配制成单一化合物母液 此法适合配制多种培养基都需要的同一种母液 另一种是配成几种不同化合物的混合母液 此法在大量配制同种培养基时省时省力 由于MS培养基较为常用 故配制MS培养基母液 配好的母液应放在试剂瓶中贮存 在配制MS培养基母液时 为减少工作量可以把几种药品 如培养基中的大量元素或微量元素 配在同一母液中 但应注意各种化合物的组合以及加入的先后顺序 以免发生沉淀 通常把每种试剂单独溶解后再与别的也已完全溶解的药品混合 或者待前一种化合物完全溶解后再加入后一种化合物 混合已溶解的各种矿质盐时还应注意先后顺序 力求把Ca2 与SO42 和PO43 错开 以免形成硫酸钙或磷酸钙的不溶物 同时 要慢慢地混合 边混合边搅拌 5 3 1大量元素母液的配制 MS培养基中的9种大量元素除C H O外 剩下的六种可由KNO3 NH4NO3 CaCl2 2H20 MgSO4 7H2O KH2PO4几种无机盐来供应 它们可配在同一母液中 具体配制见下表 配制的步骤为 确定母液的浓度和体积 计算各种化合物用量 称量 分别溶解 混合 定容 装瓶 贴标签 放入冰箱保存 注意 CaCl2 2H2O最后加入 5 3 2微量元素母液的配制 MS培养基中的微量元素可由MnSO4 4H2O ZnSO4 7H2O H3BO3 KI Na2MoO4 2H2O CuSO4 5H2O CoCl2 6H2O几种无机盐来供应 它们也可配在同一母液中 具体配制见下表 配制步骤同大量元素 混合时不要求先后顺序 5 3 3有机成分母液的配制 MS培养基中所需的维生素和氨基酸等有机成分母液应分别单独配制 具体配制见下表 配制的步骤为 确定母液的浓度和体积 计算各种化合物用量 称量 溶解 定容 装瓶 贴标签 放入冰箱保存 亦可配制成混合母液 不主张采用 5 3 4铁盐母液的配制 铁盐母液宜单独配制 其配制步骤为 确定母液的浓度和体积 计算各种化合物用量 称量 分别溶解 混合 煮沸数分钟 调节pH值至5 8 定容 装瓶 棕色 贴标签 放入冰箱保存 用时每配lL培养基取该溶液5ml 5 3 5植物生长调节物质母液的配制 对于植物生长调节物质 配制成母液时 通常用mg ml 1或ppm较为方便 一般配制成0 1 1mg ml 1的母液 这样的浓度便于计算也可避免冷藏时形成结晶 2 4 D NAA用少量95 酒精溶解 再加水定容 6 BA KT应先溶于少量1mol L 1的HCl中 再加水定容 具体配制见下表 5 3 6其它常用试剂的配制 盐酸 lmol L 1 用浓度36 5 密度1 19g cm3的浓盐酸配制氢氧化钠 lmol L 1 用固体氢氧化钠配制75 酒精 v v 用95 的酒精来配制稀铬酸洗涤液 重铬酸钾50g溶于1000ml蒸馏水中 冷却后缓慢加入工业用硫酸90ml 配制好的各种母液应分别贴上标签 写明母液名称 配制倍数 配制者 配制日期 母液最好在2 4 的冰箱中保存 尤其对生长调节物质与有机类物质要求较严 贮存时间不宜过长 如发现有霉菌和沉淀结晶产生 就不能再使用 注意事项 1 玻璃器皿的洗涤 2 天平的使用 3 配制大量元素母液时溶液的混合顺序 4 铁盐