急性经口毒性实验ppt课件.ppt

急性经口毒性实验 AcuteOralToxicityTest 一 实验目的 一 通过本次实验掌握经口灌胃技术 半数致死剂量的意义 二 通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定 二 测定方法 本实验以灌胃方式测定敌敌畏DDV 80g 100ml 的半数致死量 LD50 一 实验动物与分组 首选健康成年小鼠 18g 25g 和大鼠 180g 220g 实验前动物要在实验环境中适应3 5d时间 以了解其正常活动情况和健康状况 并淘汰不健康或体重不符合要求的动物 本次实验取体重18 25g的小鼠 实验时 将小鼠称体重 编号 按随机分组原则 将实验动物分成5组 每组8只 二 剂量选择 首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似的化学物的LD50 以此值作为受试化学物的预期毒性中值 即中间剂量组 再上下各推1 2个剂量组 进行预实验 各剂量组的间距可根据LD50计算方法要求按等比级数或等差级数安排 本实验用机率单位法计算LD50 要求按等比级数排列 常用1 0 8 如敌敌畏的最高剂量为125mg kg 其次剂量组为125mg kg 0 8 100mg kg 依次类推为80 64和51 2mg kg五个剂量组 三 受试化学物配制与稀释 1 溶剂 水溶性受试化学物以蒸馏水为溶剂配制成溶液 脂溶性受试化学物以吐温 80 二甲基亚砜 植物油等配制 三 受试化学物配制与稀释 2 受试物的稀释等容量稀释法 各个剂量组的动物均给予相同单位体重体积的受试化学物 按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同的浓度的受试物溶液 例如本次实验五个剂量组 各剂量组动物给予相同单位体重体积受试物均为10ml kg 等容量稀释法 D 设计的染毒剂量 mg kgV 动物给药量 相同单位体重体积 均为10ml kgX 各组需配制的受试物溶液的浓度 mg ml 如 第一组染毒剂量D 51 2mg kg 动物按V 10ml kg体重给药 配制的受试物浓度为X 51 2mg 10ml 依次类推 五个组所需配制的受试物浓度分别为第一组 51 2mg 10ml第二组 64mg 10ml第三组 80mg 10ml第四组 100mg 10ml第五组 125mg 10ml各剂量组小鼠灌胃容量计算 小鼠灌胃容量Vml 体重 g 10ml 1000g各剂量组小鼠染毒剂量 小鼠染毒剂量 Vml 各组的受试物浓度 mg 10ml 四 灌胃方法 小鼠灌胃法 左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤 无名指或小指将尾部紧压在手上 使小鼠腹部向上 尽量使其体位垂直 注意使动物的上消化道固定成一直线 右手持连着灌胃导针的注射器 将灌胃针由动物口腔侧插入 避牙齿 沿咽后壁缓缓滑人食管 若遇阻力 可轻轻上下滑动探索 一旦感觉阻力消失 即深人至胃部 一般进针深度小鼠2 5 4cm 随后将受试物溶液注入 如遇动物挣扎 应停止进针或将针拔出 千万不能强行插入 以免穿破食管 甚至误入气管 导致动物立即死亡 小鼠一次灌胃体积为10 20ml kg 五 中毒体征和死亡情况观察 染毒后观察和记录中毒体征及出现的时间 死亡数量和时间及死亡前的特征 高剂量组动物的死亡常很快发生 染毒后应即刻密切观察 根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官 观察的项目包括 1 中枢神经系统和神经肌肉系统 体位异常 叫声异常 不安 呆滞 痉挛 抽搐麻痹 运动失调 对外反应过敏或迟钝 2 植物神经系统 瞳孔扩大或缩小 流涎或流泪 3 呼吸系统 鼻孔流液 鼻翼煽动 血性分泌物 呼吸深缓 呼吸过速 仰头呼吸 4 泌尿生殖系统 会阴部污秽 有分泌物 阴道或乳房肿胀 5 皮肤和毛 皮肤充血 紫绀 被毛蓬松 污秽 6 眼 眼球突出 结膜充血 角膜浑浊 血性分泌物 7 消化系统 腹泻 厌食 三 LD50计算 可采用多种方法测定LD50 有机率单位法 霍恩氏法 寇氏法等 机率单位法能计算出任何反应率水平的剂量 且实验2 5组均可 机率单位法遵守的要求 1 剂量按等比级数排列 相邻两剂量组间的比值常用1 0 82 各实验组动物数相等 机率单位法计算LD50公式 用五个剂量组时 X3 为第三个组的剂量对数 X3 log80 80mg kg i 为相邻两组剂量比值 以高剂量组为分子 的对数 i log 125 100 y 为死亡率相应的机率单位 查附表 为五个剂量组的死亡率相应的机率单位的均数 1 2 3 4 5 为小剂量组到大剂量组的顺序 5 0 为死亡率是50 时所相当的反应率的机率单位 LD50的95 可信限 log 1 X 1 96SX 四 结果评价 根据实验动物中毒体征 死亡时间 根据得出的LD50及受试物的种类 按相应的国家标准或技术规范中的急性经口毒性分级标准 课本215页 农药的急性毒性分级 对受试物进行毒性定级 判断受试物的毒性大小 五 注意事项 1 灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管2 正确捉拿动物 防止被咬伤且避免动物损伤3 灌入量计算和操作要准确 否则影响结果4 防止操作者中毒 注意通风 不要把药品撒到手 脸部皮肤及身体其他部位 操作过程中要小心 六 实验报告应包括以下内容 1 实验动物的种属 2 实验动物体重和随机分组情况 3 受试物的名称 性状等情