药学专业本科答辩

姜黄素类似物H8对糖尿病肾病小鼠的治疗作用,Therapeutic effects of curcumin analogue H8 on diabetic nephropathy in mice,答 辩 人：年级 专业：,目录,1,2,3,4,1.研究背景,1.糖尿病肾病,2.炎症因子,3.姜黄素及其类似物,1.糖尿病肾病糖尿病肾病是最常见的慢性糖尿病特发性全身微血管病变并发症，它不仅是致使糖尿病患者死亡的主要原因之一，也是导终末期肾衰竭的主要原因。目前，国际上关于DN的治疗，尚无有效的治疗手段，寻找有效防治DN的新方法对糖尿病患者具有重要的临床意义。,2.炎症因子与糖尿病肾病关系的研究进展,TNF,IL-6,IL-17,TNF-可介导免疫调节，生长调节，炎症等多方面效应，,IL-17，促进局部炎症的加重和扩大化。,IL-6可致使胰岛B细胞凋亡，在促进糖尿病的发生发展中有着重要作用。,炎症因子与DN的发生发展密切相关，在DN发生机制中具有重要的作用。,3.姜黄素及其类似物,姜黄素（curcumin）是从姜科黄属的干燥根茎中提取的一种天然的酚性化合物。研究显示姜黄素对由DN产生的异常变化，如肾小球增大、基底膜节段性的增厚等有明显的改善，可减轻肾脏高滤过的状态，降低尿液白蛋白，有一定的肾脏保护作用。此外，姜黄素还具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用，但姜黄素生物利用度较低，这使其临床的广泛应用受到了局限。姜黄素类似物为改善姜黄素的稳定性和生物利用度，我们课题组发明了姜黄素类似物H8-以姜黄素为母体去掉其二酮基团，设计了稳定的，分子量更小的戊-1,4二烯-3-酮类似物（H1-H9），在随后的实验中，我们证实了H8通过抑制炎症因子对糖尿病肾病小鼠产生治疗作用，减轻DN的发生发展。,3.实验部分,7,建模分组,糖尿病肾病模型组（DN),6只,姜黄素治疗组（Cur）6只,姜黄素类似物H8治疗组（H8）6只,空白对照组（Con）6只,8周龄SPF级db/db小鼠18只,8周龄SPF级db/m小鼠6只,标本收集与处理,禁食12 h，用小鼠代谢笼收集尿样本，用自动生化分析仪检测尿液中微量白蛋白尿（ MAU）和尿N-乙酰-D氨基葡萄糖甙酶（NAG）。乙醚麻醉猝死小鼠，眼球取血，解剖后取小鼠两侧新鲜肾脏，分别称重，称重后用生理盐水冲洗，小心解剖，留取肾脏标本，送红旗医院进行石蜡组织包埋。,MAU与NAG的检测,微量白蛋白(microscale albuminuria，MAU) 反映肾脏异常渗漏的蛋白质，是糖尿病影响肾脏的早期象征,NAG是一种细胞内溶酶体酶，主要用于早期肾损伤,和肾纤维化的监测和病情观察,免疫组化检测,4.实验结果,结果表明，与对正常照组相比，DN模型小鼠的血糖明显升高，姜黄素治疗组几乎不影响血糖变化，H8治疗组能明显降低血糖。所以说明姜黄素类似物H8有降低血糖的作用。,图1姜黄素及类似物对糖尿病肾病小鼠血糖的影响,（一）对血糖的影响,（二）对尿液中MAU(mg/l)和NAG(U/L)的影响,姜黄素及类似物对糖尿病肾病小鼠尿液中微量白蛋白的影响,实验结果表明DN模型组小鼠的MAU值和NAG值与正常对照组相比有明显的升高，姜黄素治疗组和H8治疗组的MAU值和NAG值与DN模型组相比有明显降低，且H8治疗组的作用效果略强于姜黄素治疗组。,P0.01 VS Con, *P0.05 *P0.01 vs DN,（三）对糖尿病小鼠肾脏组织中炎症因子IL-17表达的影响,图2 小鼠肾脏IL-17免疫组化检测结果(200倍显微镜）,DN模型组小鼠肾脏中炎症因子IL-17的表达量明显高于正常对照组小鼠，H8治疗组与DN模型组小鼠相比，肾脏中炎症因子IL-17的表达量明显减少。,（四）对糖尿病小鼠肾脏组织中炎症因子IL-6表达的影响,图3小鼠肾脏IL-6免疫组化检测结果,炎症因子IL-6在DN模型组小鼠肾脏中的表达量明显高于正常对照组，姜黄素及其类似物H8治疗组小鼠炎症因子IL-6的表达量较DN模型组明显降低。,(200倍显微镜）,（五）对糖尿病小鼠肾脏组织中肿瘤坏死因子TNF表达的影响,图4小鼠肾脏TNF免疫组化检测结果,DN模型组小鼠肾脏中肿瘤坏死因子TNF的表达量明显高于正常对照组小鼠。姜黄素和H8治疗组小鼠肾脏中TNF的表达量较DN模型组有较明显得减少, 且H8对TNF表达的抑制程度强于姜黄素,(200倍显微镜）,（六）结论,本研究证实了姜