自来水中细菌总量的测定

微生物学实验论文微生物学实验论文 自来水中细菌总数的测定自来水中细菌总数的测定 自来水中细菌总数的测定 摘要摘要 水对于人类扮演者不可或缺的角色 同样水质的好坏对人们生活起着 至关重要的作用 而判断水质的标准 微生物在水中的数量 种类是必不可少 的 良好的饮用水细菌总数因500CFU mL 则不适宜饮用 我国 饮用水卫生标准 GB5749 85 规定每毫升水样细菌总数 37 培养 24h 不得大 于 100 个 每升水中总大肠杆菌群数小于 3 个 本实验采用普通牛肉膏蛋白胨 培养基 1 对水中细菌进行培养 通过平板菌落计数技术 2 从而来测定自来水是 否符合饮用水的微生物方面的卫生标准 关键词关键词 自来水 平板菌落计数技术 牛肉膏蛋白胨培养基 引言 引言 微生物学指标是评价饮用水生物性污染的重要指标 是水质在流行 病学上安全的保证 各种天然水中常含一定数量的微生物 水中微生物的主要 来源是 水中的水生性微生物 如光合藻类 来自土壤径流 降雨的外来菌群 和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等 自来水指通过水处理厂净化 消毒 后生产出来的符合国家饮用水标准的供人们生活 生产使用的水 我国饮水卫 生标准 GB5749 85 规定每毫升水样细菌总数 37 度培养 24 个小时不得大于 100 个 每升水中总大肠杆菌群数小于 3 个 微生物学指标是评价水中生物性 污染的重要指标 是水质在流行病学上安全的保证 近年来随着环境污染加重 我国水质不断下降 给居民饮水安全带来隐患 因此 我们想通过测定自来水 中的细菌总数 了解水质情况 呼吁人们保护水资源 测定水样是否符合饮用水的微生物方面的卫生标准 通常包括下列两个项 目 细菌总数测定和总大肠杆菌群的测定 本实验只包括一群能在营养琼脂上 发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数 通过此实验我们能够计算出水中的细菌 总数 从而判断自来水是否符合国家标准 是否受到污染 3 1 1 材料与方法材料与方法 1 1 材料 试剂与仪器 1 实验材料 自来水 2 实验试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 1mol LNaOH 1mol LHCl 蒸馏水 3 实验仪器 高压蒸气灭菌锅 培养皿 三角烧瓶 天平 牛角匙 pH 试纸 pH5 5 9 0 吸量管 麻绳 牛皮纸 量筒 玻璃棒 电炉 温度 计 1 2 实验方法 1 2 1 灭菌 1 首先将高压蒸气灭菌锅的内锅层取出 再向外锅内加入适量的水 使 水面与三角搁架相平为宜 2 放回内层锅 并加入用报纸包好的培养皿 三角烧瓶 3 加盖 并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内 再以两两对称的 方式同时旋紧相对的两个螺旋 使螺旋松紧一致 勿使漏气 4 用电炉加热 并同时打开排气阀 使水沸腾以排除锅内的冷气 待冷 空气完全排尽后 关上排气阀 让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升 当 锅内压力上升到所需压力时 控制热源 维持压力至所需时间 本实验用 0 1MPa 121 20min 灭菌 5 灭菌时间到后 切断电源 让灭菌锅内温度自然下降 当压力表的压 力降至 0 时打开排气阀 旋松螺旋 打开盖子 取出灭菌物品 1 2 2 水样的采取 对自来水龙头用火焰烧灼 3min 灭菌 放开水龙头使水流 5min 后 用已灭 菌的三角烧瓶接取水样 以待分析 1 2 3 制备培养基 1 称量 按 4 2g 100ml 营养琼脂粉称量 放在称量纸上 称量后直接放入水中 稍 微加热 2 溶化 在上述烧杯中加入所需的水后不断搅拌使营养琼脂粉溶解 1 2 4 细菌总数测定 1 灭菌吸管吸取 1mL 水样 注入其中一套灭菌的培养皿中 对照不加自 来水 2 取一空的灭菌培养皿 立即倾注溶化了的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 15mL 作空白对照 3 分别倾注约 15mL 已溶化并冷却到 45 左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基 并立即在桌上作平面旋摇 使自来水和培养基混匀 4 待培养基凝固后 倒置于 37 温箱中 培养 24h 进行菌落计数 两 个平板的平均菌落数即为 1mL 自来水的细菌总数 4 1 3 菌落计数方法 1 计算相同稀释度的平均菌落数 若其中一个平板有较大片状菌苔生 长时 则不应采用 而应以为片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数 若片状菌苔的大小不到平板的一半 而其余的一半菌落分布又很均匀时 则可 将此一半的菌落数乘 2 以代表全平板的菌落数 然后再计算该稀释度的平均菌 落数 2 首先选择平均菌落数在 30 300 之间的 则只有一个稀释度的平均 菌落数符合此范围时 则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的菌落总数 3 若有两个稀释度的平均菌落数均 30 300 之间 则按两者菌落总数 之比值来决定 若其比值小于 2 应采取两者的平均数 若大于 2 则取其中较 小的菌落总数 4 若所有稀释度的平均菌落数均大于 300 则应按稀释度最高的平均 菌落数乘以稀释倍数 5 若所有稀释度的平均菌落数均小于 30 则应按稀释度最低的平均 菌落数乘以稀释倍数 6 若所有稀释度的平均菌落数均不在 30 300 之间 则以最近 300 或 30 的平均菌落数乘以稀释倍数 2 2 结果与分析结果与分析 表 自来水中菌落数表实验数据 平板菌落数1ml 自来水中细菌总数 1 2 对照组 90 102 48 90 102 2 48 48 1 对照组中的菌数应为 0 个 但实验测得数据为 48 个 这主要是因 为有杂菌混入 杂菌来源可能 培养皿灭菌不充分 灭菌后在空气中放置又落 入杂菌 培养基倾入培养皿后没有立即加盖 配置培养基时反复升降温 没有 立即转移使培养基凝固 使一些杂菌产生抗性 做实验时灭菌后对着培养基呼 气也可能造成细菌污染 以及在对照组加培养基时第二次加入培养基 引入细菌 更多 所以在以后的试验中必须注意实验操作的严密性 2 根据我国饮用水卫生标准规定 每毫升细菌总数 37 培养 24 h 不 得大于 100 个 正常应该在 60 90 个 ml 而本实验中测得结果是 48 个 mL 菌 落数相对较少 可能是倒入培养基时温度过高 烫死部分自来水中的细菌 而 且 培养基中有小部分呈片状 这是培养基和自来水没有混匀的原因 3 由于培养基是倒置的 所以可以观察到绝大多数的细菌着生在培养 基表面 这是由于菌种在固体培养基上借助重力作用而形成的 有利于菌落计 数 2 2 实验注意事项 1 倒置培养基时应降温至 45 左右 否则温度过高会烫死部分细菌 实验结果受影响 如观察结果中菌落过分稀少就可能是这一因素引起的 若温 度过低培养基提前凝固 无法倒入培养皿 2 倾注培养基后要将培养皿在桌面上做匀速旋转 将培养基和自来水 样摇匀 在培养基中观察时可见一些菌苔就是没有摇匀的结果 3 培养基不能反复升降温 倾入培养皿后应立即加盖 且灭菌后不应 在空气中放置 以免杂菌混入 4 在实验操作过程中操作者尽量避免对着培养基呼气 人类呼出气体 中含大量细菌 可能会影响实验结果 致使菌落数过多 先将培养皿 吸量管 三角烧瓶放入高压蒸汽灭菌锅内 0 1MPa 121 20min 灭菌 3 3 讨论讨论 在本实验中的空白对照培养基上长了细菌菌落 说明此培养基被污染了 主要原因是本小组在倒入培养基时未一次性倒入 在第二次加培养基时已有较 多菌落 导致对照菌落数较多 实验组整体较好 菌落生长正常 通过此实验 我们可知平板菌落技术法是测定水样中细菌个数比较方便的 方法 但它也存在不准确的因素比如在数菌落时 菌落太小且又处于培养基内 部这样就不能观察到菌落从而影响结果 又如在培养过程中由于细菌之间的相 互抑制也会使计数菌落减少 因此 在制作培养基及培养的过程中要严格杀菌 并严格按照实验步骤认真操作 从而使得结果更加精确 5 虽然水中存在大量的细菌且种类繁多 但由于牛肉膏蛋白胨所提供的生长 条件的限制 培养基中所得的细菌群落大部分为大肠杆菌 呈圆片状 4 4 结论结论 根据国家饮水卫生标准 GB5749 85 规定 每毫升水样细菌总数 37 培 养 24 个小时不得大于 100 个 此实验自来水中的细菌个数为 48 个 符合国家 标准 故该自来水水质合格 6 参考文献 参考文献 1 沈萍 陈向东 微生物学实验 M 4 版 北京 2 高等教育出版社 2007 2 陈声明 刘丽丽 微生物学实验研究方法 北京 人民教