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动物实验基本操作技术 河北大学基础医学实验教学中心 主要内容 实验动物的选择 抓取与固定实验动物的麻醉实验动物的手术实施实验动物的处死 一 实验动物的选择 抓取与固定 一 实验动物的选择 抓取与固定1 实验动物的选择 实验动物的选择直接关系到实验的成败和其可行性 科学性等 1 常用的实验动物 犬 家兔 猫 大鼠 豚鼠 小鼠 鸡 蛙 蟾蜍等 2 动物的选择依据 种属选择 豚鼠易致敏 家兔体温变化灵敏 品系选择 近交系 突变系 杂交一代 封闭群 非纯系 无菌动物 指定菌动物 SPF动物 带菌动物 个体选择 根据年龄 性别 及健康状况 1 小鼠 捉拿时先用右手将鼠尾抓住提起 放在较粗糙的台面或鼠笼上 在其向前爬行时 右手向后拉尾 用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和头颈部皮肤 拉直四肢并用左手无名指压紧尾和后肢 右手即可作注射或其他实验操作 取尾血及尾静脉注射时 可将小鼠固定在金属或木制的固定器上 2 实验动物的抓取与固定 2 大鼠 大鼠凶猛 实验者应戴帆布手套 用右手将大鼠尾抓住提起 放在较粗糙的台面或鼠笼上 抓住鼠尾向后轻拉 左手抓紧两耳和头颈部皮肤 余下三指紧捏鼠背部皮肤 如果大鼠后肢挣扎厉害 可将鼠尾放在小指和无名指之间夹住 将整个鼠固定在左手中 右手进行操作 也可借助专用布袋或鼠盒进行操作 3 豚鼠 豚鼠具有胆小易惊的特性 因此抓取时要求快 稳 准 一般方法是 先用右手掌迅速 轻轻地扣住豚鼠背部 抓住其肩脚上方 以拇指和示指环握颈部 对于体型较大或怀孕的豚鼠 可用另一只手托住其臀部 4 蛙和蟾蜍 用左手将动物贴紧在手掌中 并以左手中指 无名指 小指压住其左腹侧和后肢 拇指和食指分别压住左 右前肢 右手进行操作 根据实验需要 可用图钉 采取俯卧位或仰卧位固定在蛙板上 抓取蟾蜍时 禁忌挤压两侧耳部毒腺 以免毒液射入眼中 5 家兔 一手抓住兔颈部的被毛与皮肤 另一手托其臀部或腹部 使其躯干的重量大部分集中在手上 然后称重 家兔麻醉后固定方式分仰卧位和俯卧位 仰卧位固定时 四肢用粗棉线固定 头用家兔头固定夹固定或用棉线钩住家兔门齿后再固定在家兔台头端铁柱上 进行头颅部手术时 多采用仰卧位固定配合马蹄形固定器进行固定 二 实验动物的麻醉 1 不同的动物 选择不同的麻醉药物 实施不同的麻醉方法 2 麻醉药物应用原则 依据动物体重计算麻醉药物的剂量 依据动物生命体征的变化控制给药的速度 掌握宁少勿多 分阶段给药的方式 一 麻醉剂种类 应用范围 适用于各种实验动物的全身麻醉作用机制 抑制中枢神经系统 使肌肉松弛作用特点 麻醉安全系数较大 麻醉深度易于掌握等优点 性状 无色透明 极易挥发 具刺激气味的特性缺点 对上呼吸道粘膜有较强的刺激作用 使分泌物增加 易发生呼吸道阻塞 其他药物 三氟乙烷 氯仿等 在教学实验中应用较少 1 非吸入性麻醉剂戊巴比妥钠氯胺酮氨基甲酸乙酯 乌拉坦 水合氯醛等 2 吸入性麻醉剂 乙醚 常用 二 麻醉剂用量 1 全身麻醉 1 静脉注射麻醉 戊巴比妥钠 3 1ml kg乌拉坦 25 4ml kg 2 腹腔注射 戊巴比妥钠 0 5 0 1ml 10g 3 吸入麻醉 乙醚2 局部麻醉 1 普鲁卡因颈部2 3ml 股部1 2ml 三 麻醉给药途径 1 选择给药途径的原则 可腹腔注射的药物不必通过静脉给药 可肌肉注射的药物也应避免腹腔注射 给药途径应按肌肉 腹腔 静脉的顺序 2 给药途径 1 肌肉注射 主要用于注射不溶于水的药物 注射部位 肌肉发达 血管丰富的部位 如大鼠 小鼠和豚鼠的大腿外侧缘 家兔 猫 犬 猴的臀部或股部 注射时固定动物 剪去注射部被毛 与肌肉层组织接触面呈60度角刺入注射器针头 回抽无回血后注入药液 小动物可免回抽针栓 注射完毕后用手轻轻按摩注射部位 促进药液吸收 2 腹腔注射 啮齿类动物注射部位 是左下腹部 进入腹腔有落空感 回抽无血液或尿液时即表示未伤及肝脏和膀胱 3 静脉注射 注射部位 根据动物的种类选择注射部位 犬多选用后肢小隐静脉 豚鼠和兔多选用耳缘静脉 大鼠和小鼠可从尾静脉注射 兔耳缘静脉注射 将动物同定于实验台上 剪去耳缘部位的被毛 用乙醇轻轻擦拭 耳缘静脉即清晰可见 用左手食指和中指夹住静脉近心端 拇指和小指夹住耳缘部分 以左手无名指和小指放在耳下作垫 待静脉充盈后 有手持注射器使针头尽量由静脉远心端刺入 顺血管方向平行 向心端刺入 注射完毕抽出针头 用棉球压迫注射部位数分钟 以免出血 尾静脉注射 鼠尾静脉有3根 两侧及背侧各1根 左 右两侧尾静脉较易固定 应优先选择 注射时 先将鼠固定在鼠筒内或扣在烧杯中 露出尾部组织 用45 50 温水浸泡鼠尾l 2min或用75 乙醇溶液反复擦拭 以达到消毒 扩张血管和软化表皮角质的目的 注意药液推入静脉时是否通畅 若阻力较大 注射部位皮下发白 表示针头未刺入静脉内 应换部位重新注射 若推入药液顺利无阻 则表明已刺入静脉内 应把针头和鼠尾固定好 不要晃动 缓缓将药液推入 注射完毕 用棉球在注射部位轻轻揉压 使血液及药液不致回流而漏出 四 动物麻醉技巧与效果的判断 1 动物麻醉技巧 1 静脉注射麻醉药物时 开始给药的速度可略为快些 即先给予总量的1 3 以求动物能顺利 快速地渡过兴奋期 给后2 3剂量的速度宜慢 边注射 边注意观察动物的生命体征变化 心跳 呼吸 肌肉松弛情况等 当确定已达到麻醉效果时 即可停止给药 不必急于将剩余的麻醉药物全部推入 2 若麻醉剂量已给足 动物仍有挣扎 兴奋等表现时 应观察一段时间 确认动物是否已渡过兴奋期 切不可盲目追加麻醉药物 避免因麻醉过深 抑制心跳呼吸中枢而导致动物死亡 2 动物麻醉效果的判断 动物达到麻醉时的基本状态 1 肢体肌肉松弛 2 呼吸平稳 3 角膜反射迟钝 五 麻醉注意事项 1 乙醚是挥发性很强的液体 易燃易爆 使用时应远离火源 平时应装在棕色玻璃瓶中 储存于阴凉于燥处 不宜放在冰箱内 以免遇到电火花时引起爆炸 2 动物麻醉后可使体温下降 要注意保温 在寒冷季节 注射前应将麻醉剂加热至与动物体温相一致的水平 3 犬 猫或灵长类动物 手术前8 12h应禁食 避免麻醉或手术过程中发生呕吐 家兔或啮齿类动物无呕吐反射 术前无需禁食 4 静脉麻醉时 应注意给药速度 密切观察动物生命体征的变化 出现呼吸节律不整和心动过缓时 应立即停止给药 六 固定动物 当麻醉效应趋于平稳时 即可固定动物 固定动物的体位主要有仰卧位 俯卧位 侧卧位等 也可用特制的盒及相应的工具进行特殊的固定 但要注意的问题是 随着麻醉药物的失效 动物可能因挣扎 躁动等而发生失去控制的情况 三 实验动物的手术实施 1 确立手术方案 明手术中需特别注意的问题 2 按技术要求进行操作3 手术过程中注意的问