治疗白癜风复方中药体外对蘑菇酪氨酸酶活性的作用.docx

网址 第 1 页 共 6 页 治疗白癜风复方中药体外对蘑菇酪氨酸酶活性的作用 治疗白癜风复方中药体外对蘑菇酪氨酸酶活性的作用 临床皮肤科杂志 2000 年第 3 期第 29 卷 临床及实验研究 作者 李洪武 朱文元 单位 南京医科大学第一附属医院皮肤科 210029 关键词 白癜风 复方中药 酪氨酸酶 摘要 为了研究复方中药对酪氨酸酶活性的影响 筛选有作用的中药方剂 为中药治疗白癜风提供实验依 据 通过计算机排序选定应用频次较高的治疗白癜风中药复方 5 首 应用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法体 外测定酪氨酸酶活性 结果白驳片 白癜风丸 柴胡疏肝汤 白蚀丸组酪氨酸酶活性增高 P 0 01 白癜 风丸组方中药补骨脂 当归 地肤子 刺蒺藜对酪氨酸酶活性均有激活作用 其中补骨脂较高 刺蒺藜次 之 当归 地肤子较弱 提示白驳片 白癜风丸 柴胡疏肝汤 白蚀丸可使酪氨酸酶活性增高 白癜风丸 组方中药补骨脂 当归 地肤子 刺蒺藜对酪氨酸酶活性有激活作用 Effects of traditional Chinese medicine compounds for treating vitiligo on mushroom tyrosinase activity in vitro Li Hongwu Zhu Wenyuan Department of Dermatology The First Affiliated Hospital Nanjing Medical University Nanjing 210029 Abstract In order to investigate the effect of traditional Chinese medicines TCMs on tyrosinase activity and provide experimental evidence for treating vitiligo tyrosinase activity was estimated by measuring the rate of oxidation of DL dopa The findings showed that the tyrosinase activity increased in determining Vitilito Wan Baibo Pian Chaihu Shugan Tang and Baishi Wan P 0 01 While Vitiligo Wan components were tested they all could activate the tyrosinase and in orderof tyrosinase activity level increased they were Psoralea corylifolia L 补 骨脂 Tribulus terrestris L 刺蒺藜 Angelica sinensis Oliv Diels 当归 and Kochia scoparia L Schrad 地肤子 These data revealed that the levelsof tyrosinase activity were induced by Baibo Pian Vitiligo Wan Chaihu Shugan Tang Baishi Wan and Vitiligo Wancomponents Key words Vitiligo Traditional Chinese medicines compound Tyrosinase 酪氨酸酶 Tyrosinase TYR 是皮肤黑素生物合成的主要限速酶 其化学结构为铜结合糖蛋白 在皮肤黑素生 物合成过程中 酪氨酸羟化生成多巴 多巴氧化生成多巴醌 二羟基吲哚转化生成吲哚醌 这些反应步骤 均需 TYR 参与 无 TYR 时 反应则变得非常缓慢 TYR 活性与黑素合成量呈正相关 TYR 活性改变可引起 色素障碍性皮肤病如白癜风 基因突变则可引起白化病 为了研究中药对酪氨酸酶活性的作用 我们选择 网址 第 2 页 共 6 页 100 册古籍专著和 50 种中医药杂志近 30 年文献 电脑统计选定古方中治疗白癜风应用频次较高的复方中 药 5 首 分别测定其水提液 醇提液对酪氨酸酶活性的影响 1 材料和方法 1 1 仪器 722 分光光度计 上海第三分析仪器厂生产 1 2 试剂 蘑菇酪氨酸酶 tyrosinase EC 1 14 18 DL 多巴 DL 3 4 dopa 均购自美国 Sigma 公司 其它试剂均 为分析纯 1 3 药物 1 3 1 药物来源 治疗白癜风中药复方白驳片 白癜风丸 柴胡疏肝汤 通窍活血汤 白蚀丸由南京中医 药大学门诊部提供 经南京中医药大学中药鉴定教研室王春根教授鉴定 符合 中华人民共和国药典 规 定 1 3 2 方药组成 白驳片 紫草 降香 重楼 白药子 白薇 苍术 海螵蛸 红花 桃仁 生首乌 龙 胆草 白蒺藜 甘草 白癜风丸 补骨脂 当归 地肤子 刺蒺藜 通窍活血汤 赤芍 川芎 桃仁 红 花 鲜姜 老葱白 红枣 麝香 柴胡疏肝汤 川芎 当归 赤芍 生地 柴胡 黄芩 山栀子 天花粉 防风 牛蒂子 连翘 甘草 白蚀丸 红花 丹皮 紫草 苍术 白蒺藜 龙胆草 甘草 补骨脂 首乌 丹参 灵芝 1 3 3 中药制备方法 1 醇提液 中药粉碎后用 90 乙醇溶液浸泡 3h 后回流过滤 再将残渣提取 2 次 合并提取液 置沸水浴中挥尽乙醇浓缩至膏稠状 然后溶于含 2 DMSO0 05mol LpH6 5 磷酸缓冲液中 制 成每 mL 相当于 0 1g 原生药的溶液 2 水提液 取中药置玻璃烧杯内 加相当于药材量 5 7 倍的蒸馏水 浸泡 1 2h 煮沸 30min 过滤 药渣加 3 5 倍量水继续煎煮 煮沸 20min 过滤 合并两次滤液 于水浴 上浓缩成每 mL 相当于原药材 0 1g 的药液 若处方中有需先煎 后下 包煎 另煎和烊化等药材 则按常 规处理 1 4 实验方法 1 4 1 酪氨酸酶活性测定方法 采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法检测酪氨酸酶活性 反应混合物 2mL 0 1mol LpH6 5PBS1 8mL 药物 0 1mL 浓度 0 1g mL 蘑菇酪氨酸酶 0 1mL 80U 37 孵育 10min 加 0 15 DL 多巴 1mL 2 3 4 5 6min 时 用分光光度计 475nm 处测定吸光度 A 值 A475 以每分钟 A475 增加 0 001 定为 1 个酶活力单位 醇提物用 DMSO 助溶 以 PBS 液为空白 水提液以不加药物的反应 组为对照 醇提液以不加药物含 2 DMSO 的反应组为对照 分别测定酪氨酸酶活性 1 4 2 数据处理及统计方法 上述每一实验重复 3 次 所测实验数据以 s 表示 采用成组 t 检验 使 用 Office97 excel 软件作数据处理及分析 网址 第 3 页 共 6 页 2 结果 2 1 治疗白癜风中药复方对酪氨酸酶活性的影响 治疗白癜风中药复方中 白癜风丸 柴胡疏肝汤 白驳 片 白蚀丸组酪氨酸酶活性增高 P 0 01 其中 白癜风丸对酪氨酸酶活性的激活作用最强 柴胡疏肝汤 白驳片次之 白蚀丸较弱 结果见表 1 表 1 白癜风中药复方对蘑菇酪氨酸酶活性 吸光度 A475 的作用 s 组别 水提物 醇提物 对照组 0 1676 0 068759 0 1438 0 049706 白驳片 0 3130 0 008124 0 3232 0 077196 白癜风丸 0 5178 0 011454 0 6272 0 093369 通窍活血汤 0 1156 0 005413 0 1296 0 010922 柴胡疏肝汤 0 3314 0 017111 0 5232 0 001304 网址 第 4 页 共 6 页 白蚀丸 0 2522 0 009985 0 2336 0 013740 n 18 与对照组相比 P 0 01 P 0 05 P 0 05 2 2 白癜风丸组方中药对蘑菇酪氨酸酶活性的影响 白癜风丸组方中药补骨脂 当归 地肤子 刺蒺藜对 酪氨酸酶活性均有激活作用 其中补骨脂较高 刺蒺藜次之 当归 地肤子较弱 结果见表 2 表 2 白癜风丸组方中药对蘑菇酪氨酸酶活性 吸光度 A475 的作用 s 组别 水提物 醇提物 对照组 0 1688 0 046761 0 1476 0 035460 补骨脂 0 4342 0 052101 0 4762 0 036218 当归 0 1838 0 048610 0 1868 0 030485 地肤子 0 1814 0 041205 0 2286 0 035376 刺蒺藜 网址 第 5 页 共 6 页 0 2544 0 070718 0 3054 0 060724 n 18 与对照组相比 P 0 01 P 0 05 3 讨论 业已证实上调酪氨酸酶活性加速黑素生成的药物可提高白癜风治疗效果 但其机制不清 Cui 等认为毛囊 外根鞘部存在无功能黑素细胞 MC 以毛囊中下部居多 白癜风表皮内 MC 完全消失 毛囊球部和漏斗部 有色素 MC 被破坏 但毛囊外根鞘内无功能 MC 存在 其数量和分布与正常相近 白癜风恢复时 表皮内 出现新生有功能 MC 毛囊外根鞘内无功能 MC 较正常和白癜风时明显增多 而且出现了有功能 MC 恢复 过程首先开始于毛囊中下部 药物可能刺激外根鞘内无功能 MC 使其分裂增殖 并沿毛囊外根鞘表面向 上移行 进入表皮 在其移行过程中 MC 功能和形态逐渐成熟 多巴反应由弱到强 分支增多延长 进 入表皮后 MC 以毛囊孔为中心继续向周围扩展 形成临床上所见的毛囊孔性色素小岛 中药复方是中医临床防病治病的主要形式 是中医扶正祛邪 辨证论治的集中体现和中医治法治则在组方 用药上的具体应用 我们选取白癜风治疗中使用频次较高的复方中药 5 首 分别测定其水提液 醇提液对 酪氨酸酶活性的影响 结果显示白癜风丸 柴胡疏肝汤 白驳片 白蚀丸组酪氨酸酶活性增高 P 0 01 提示白癜风丸等治疗白癜风中药复方对酪氨酸酶活性有显著激活作用 白癜风丸行血活血 散风解毒 祛 风除斑 可使酪氨酸酶活性显著增高 是中医治疗白癜风主要复方 实验中发现 其组方中药补骨脂 当 归 地肤子 刺蒺藜均上调酪氨酸酶活性且能发挥协同作用 从中医组方原则来看 当归补血活血 调经 止痛 润燥滑肠 刺蒺藜平肝舒郁 祛风活血 疏肝理气 地肤子清热利湿祛风 补骨脂滋肝补骨助阳 诸药配伍 补中有通 益中有泄 共奏调和气血 荣肤祛白之功效 司在和等应用白癜风丸治疗白癜风患者 每日 2 次 每次 6 9g 疗程 9 个月 共 100 例 痊愈 38 例 显 效 25 例 有效 18 例 无效 19 例 冯所安等应用白蚀丸口服 每日 3 次 每次 10 粒 疗程 3 月 共治疗 458 例白癜风患者 显效 61 例 有效 264 例 无效 133 例 总有效率 70 90 王专勤等应用白驳片治疗 白癜风患者 79 例 痊愈 37 例 显效 17 例 有效 12 例 无效 13 例 白癜风丸 白驳片 白蚀丸等主要 由滋补 性温 活血 化淤的中药组成 组方中补骨脂 刺蒺藜 降香 丹皮 丹参等均可使酪氨酸酶活 性增高 我们的实验结果提示白癜风丸 白驳片等中药复方对酪氨酸酶有显著激活作用 因此 在治疗白 癜风可优先考虑选用 南京中医药大学中药鉴定教研室王春根教授给予中药鉴定 特此致谢 国家自然科学基金资助课题 No 39570658 参 考 文 献 1 Prota G Progress in the chemistry of melanin and related metabolites Med Res Rev 1988 8 4 525 556 2 Iwata M Corn TIwata S et al The relationship between tyrosinase activity and skin color in human foreskins J Invest Dermatol 1990 95 1 9 15 网址 第 6 页 共 6 页 3 Chinatamaneni CD Halaban R Kobayashi Y et al A single base insertin in the putative transmembrae domain of the tyrosinase gene as a cause for tyrosinase negative oculocutaneous albinism Proc Natl Acad Sci USA 1991 88 12 5272 5276 4 Tomita Y Tyrosinase gene mutations causing oculocutaneous albinism J Invest Dermatol 1993 100 2 186 190 5 李洪武 赵健 朱文元 部分复方中药对酪氨酸酶活性影响的实验研究 江苏中医 1999 20 11 46 47 6 Cui J Shen L Wang G Role of hair follicles in the re