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文档简介

设计性试验牛血清蛋白的提取与鉴定 实验目的 1 掌握血清蛋白的提取与鉴定方法 2 掌握电泳法 盐析法 透析法以及正确的点样方法 3 了解设计性试验的基本构架 方便今后创新性实验的进行 实验原理 会用到的几种试验方法 1 利用蛋白质的显色反应 对牛血清蛋白进行定性染色 从而对分离的物质进行鉴定 2 盐析 盐析一般是指溶液中加入无机盐类 本次试验就采用 饱和的硫酸铵 而使溶解的物质 本次试验提取的是 牛血清蛋白 析出的过程 3 透析 穿过膜的选择性扩散过程 可用于分离分子量大小不同的溶质 低于膜所截留阈值分子量的物质可扩散穿过膜 高于膜截留阈值分子量的物质则被保留在半透膜的另一侧 4 电泳 带电物质或细胞在电场中的泳动 根据大分子或颗粒的电荷 大小和形状不同 使其在通过电场中的凝胶或介质时发生分离的方法 实验试剂与器材 牛血清 PBS缓冲液 饱和硫酸铵 离心机 试管 小烧杯 离心管 天平 电泳所需的物件等 操作流程 取小牛血清0 5毫升 PBS液0 5毫升 饱和硫酸铵2 3毫升充分混匀 静止20分钟 2500转 分离心10分钟 取玻璃纸一张 折成袋形 将离心后的上清液倒入袋内 用线扎紧上口 注意要留有空隙 放入装有自来水的小烧杯中透析 要不断振动 每隔2分钟换一次水 共换水15次 用两支毛细管分别将标准液及测定液点在同一张醋酸纤维素薄膜的无光泽面上 划好点样线并作好标记 标准液点一次 测定液点三次 盐析 透析 点样 将点样后的膜条置于电泳槽架上 放置时无光泽面向下 点样端置于阴极 平衡5分钟 开电源160伏60分钟 关闭电源后用镊子将膜条取出 将膜条直接浸于盛有氨基黑10B 萘酚蓝黑 的染料中 染2分钟取出 立即浸于漂洗液中 分别在漂洗液 中各漂洗5分钟 直至背景漂洗干净为止 电泳 染色 附 PBS 磷酸盐缓冲液 是磷酸二氢钠和磷酸氢二钠组成 其中磷酸二氢钠酸性较强 如果血液中的ph值过高的话 多余的碱就会与酸磷酸二氢钠结合生成磷酸氢二钠 反之 过酸时就会与磷酸氢二钠反应产生磷酸二氢钠 这样ph
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