第6章-芳香胺类药物的分析1.ppt

第六章芳香胺类药物的分析AnalyticalofAromaticamines 芳香胺 Aromaticamines 芳胺类芳烃胺类 1 2 例 benzocaine procainehydrochloride 例 paracetamol lidocainehydrochloride 例 adrenaline dopaminehydrochloride 1 2 例 oxprenolol carteololhydrochloride 第一节芳胺类药物的分析 结构 Structure 苯佐卡因 benzocaine 盐酸普鲁卡因 procainehydrochloride 盐酸丁卡因 tetracainehydrochloride 1 对氨基苯甲酸酯类 第一节芳胺类药物的分析 性质 Feature 1 芳伯氨基 重氮化 偶合反应 与芳醛缩合成Schiff碱 易氧化变色等 2 水解 受光线 热 碱的影响 3 弱碱性 叔胺氮原子 生物碱沉淀剂反应 非水溶剂滴定 4 溶解性 游离碱 油状液体或低熔点固体难溶于水 易溶于有机溶剂 盐酸盐白色结晶粉末 具一点的熔点 易溶于水和乙醇 难溶于有机溶剂 2 酰胺类 结构 Structure 对乙酰氨基酚 paracetamol 醋氨苯砜 acedapsone 盐酸利多卡因 lidocainehydrochloride 盐酸布比卡因 bupivacainehydrochloride 2 酰胺类 paracetamolacedapsone lidocainehydrochloride 1 水解2 醋酸乙醇 硫酸醋酸乙酯 3 对乙酰氨基酚 三氯化铁 4 弱碱性 叔胺氮原子 生物沉淀剂 沉淀 5 酰胺氮原子与金属离子络合显色 bupivacainehydrochloride 化学性质 Feature 共性 特性 芳伯氨基 苯佐卡因 盐酸普鲁卡因 盐酸普鲁卡因胺NaNO2 HCl碱性 萘酚有色偶氮染料 橙黄到猩红色 潜在芳伯氨基 对乙酰氨基酚 醋氯苯砜盐酸或硫酸加热水解NaNO2 HCl碱性 萘酚有色偶氮染料 一 重氮化 偶合反应 鉴别试验 Identification 红色 区别盐酸丁卡因 乳白色 鉴别试验 Identification 二 与三氯化铁反应 蓝紫色 鉴别试验 Identification 三 与金属离子反应与铜和钴离子反应 具有芳酰胺结构的 如盐酸利多卡因 硫酸铜 碳酸钠试液 蓝紫色配合物 氯化钴 酸性溶液 亮绿色细小钴盐沉淀 显黄色 溶于氯仿 2 羟肟酸铁盐反应 具有芳酰胺结构的 如盐酸普鲁卡因胺 浓过氧化氢 加热至沸羟肟酸三氯化铁羟肟酸铁 紫红色 3 与汞离子反应芳酰胺类 如盐酸利多卡因硝酸汞 硝酸 煮沸对氨基苯甲酸酯类 如苯佐卡因硝酸汞 硝酸 煮沸 黄色 红色或橙黄色 鉴别试验 Identification 四 水解产物反应盐酸普鲁卡因 10 氢氧化钠溶液 白色 加热变为油状物 继续加热蒸气 二乙氨基乙醇 能使润湿的红色石蕊试纸变为蓝色 加热至油状物消失放冷 加盐酸白色 能溶于过量的盐酸 2 苯佐卡因 氢氧化钠试液煮沸乙醇加入碘试液 加热黄色 碘仿臭气 鉴别试验 Identification 五 制备衍生物测熔点盐酸利多卡因三硝基苯酚三硝基苯酚利多卡因 mp 228 232 盐酸布比卡因三硝基苯酚布比卡因 mp 194 2 盐酸丁卡因25 硫氰酸铵溶液 5 醋酸溶液丁卡因硫氰酸盐 mp 131 鉴别试验 Identification 六 紫外特征吸收光谱 鉴别试验 Identification 七 红外吸收光谱 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因胺 波数cm 1波数cm 1 鉴别试验 Identification 酯羰基 C O1692 酯基 C O1271 1170 1115 二乙胺盐 N H25852645 略向高波数 1550 N H酰胺 带 1280 N H酰胺 带 一 对乙酰氨基酚中的特殊杂质 工艺 对乙酰氨基酚 有色氧化产物 乙醇溶液的澄清度与颜色 中间体对氨基酚的有色氧化产物在乙醇中显橙红色或棕色 比浊 比色 有关物质 中间体 副产物及分解产物 例 对氨基酚 对氯乙酰苯胺 O 乙酰基对乙酰氨基酚 偶氮苯 氧化偶氮苯 苯醌等 药典规定 以对氯乙酰苯胺为对照品 TLC限度检查 对氨基酚的检查 特殊杂质检查 Detectionofspecificimpurities 对氨基酚乙酰化不完全或贮藏不当引起水解 毒性较大并有色泽 检查方法 取本品1 0g 加甲醇溶液 1 2 20ml溶解后 加碱性亚硝基铁氰化钠试液1ml 摇匀 放置30min 如显色 与对乙酰氨基酚对照品1 0g加对氨基酚50 g用同一方法制成的对照液比较 不得更深 0 005 注 对氨基酚对照溶液不稳定 应临用前新鲜配制 特殊杂质检查 Detectionofspecificimpurities 二 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查 限度 水解产物对氨基苯甲酸 不得超过1 2 检查方法 TLC法 对氨基苯甲酸对照品对照 对二甲氨基苯甲醛溶液显色 黄色 特殊杂质检查 Detectionofspecificimpurities 容量分析方法 色谱法 分光光度法 亚硝酸钠滴定法 非水溶液滴定法 含量测定 Assay spectrometry sodiumnitritemethod non aqueoustitrimetry volumetricanalysis chrometography 亚硝酸钠滴定法sodiumnitritemethod 原理 条件 1 加入适量溴化钾加快反应2 加入过量盐酸1 2 5 63 室温10 30 4 滴定管尖端插入液面下滴定 第一步反应速度比较慢 而后两步反应速度则比较快 反应速度与药物结构的关系 重氮化反应机制 a 当苯环上特别是氨基邻位或对位上有吸电基时 如 吸电基通过诱导效应使氨基上电子云密度降低 从而碱性降低 游离芳伯胺浓度增大 所以反应速度就快 等可使氨基的碱性降低 重氮化反应速度加快 b 当在苯环上有供电基时 则使反应速度降低 如等 供电基能使氨基碱性增强 这样氨基成盐的机会就增大 游离芳伯胺的浓度就减小 所以反应速度就慢 反应速度与酸及酸度的关系a 酸的种类重氮化反应在HBr HCl H2SO4中反应速度是HBr HCl H2SO4 K1比K2大300倍 用HBr时 生成NOBr量大 反应速度快 但HBr价格贵 用盐酸代替 为加快反应速度 需加入KBr 催化剂 产生HBr与HNO2反应 可生成大量NOBr 加快反应速度 NO 的浓度大 反应速度快 加入KBr 可增大被测溶液中NO 的浓度 所以能加快重氮化反应速度 b 盐酸的用量理论上 芳胺 盐酸 1 1mol实际上 芳胺 盐酸 1 2 5 6mol 原因 强酸性可加速反应 重氮盐在酸性下稳定 酸性下避免副反应发生 如盐酸量增加 则反应向左进行 如盐酸浓度太大 反到会使游离芳伯氨的量减小 成盐 而影响重氮化反应速度 使反应速度减慢 如酸度不足则没反应的芳胺与生成的重氮盐产生偶氮氨基化合物 而影响测定结果 反应速度与滴定时温度的关系一般 温度升高反应速度加快 但重氮化反应所生成的重氮盐不稳定 温度升高重氮盐分解速度也加快 另外 温度高时 滴定液亚硝酸钠也容易分解逸失 而影响测定结果 所以 重氮化反应应在低温条件下进行 中国药典规定 在30 C以下 把滴定管尖端插入液面下处进行滴定 在滴定时一边搅拌一边加入大部分标准溶液 到近终点时把滴定管提出液面 用水冲洗后再继续滴定至终点 标准溶液在液面下加入 可避免NaNO2挥发 反应速度与滴定速度的关系重氮化反应属分子反应 反应速度比较慢 滴定速度不能过快 尤其是近终点时 更要慢慢地滴定 近终点时 游离芳伯胺浓度非常低 反应速度就更慢了 所以 每加一滴标准液后 要搅拌1 5分钟后再判断终点 指示终点的方法重氮化滴定法指示终点的方法有 永停法电位法外指示剂法内指示剂法 我国药典主要采用永停滴定法指示终点 永停法原理 在被测溶液中插入两个相同铂电极 在两个电极间加10 200mV电压 并且在回路中串联一个灵敏的检流计 10A 9 格 当用NaNO2滴定时 在终点前回路中没有电流 电流计指针指零 当到达滴定终点时 由于溶液中有微过量的NaNO2 使得在两个电极上发生氧化还原反应 阳极 导致在两电极间有电子流动 从而回路中有电流产生 使得电流计指针发生偏转并且不再返回零点 阴极 电位法在被测溶液中插入甘汞 铂电极 到达滴定终点时 溶液中稍过量的NaNO2使电位产生突跃 从而指示终点 USP采用这个方法指示终点 外指示剂法淀粉 KI糊剂或试纸 原理 当达到滴定终点时 溶液中稍过量的NaNO2在酸性条件下氧化KI析出I2 I2遇淀粉显蓝色 使用方法 滴定时 把淀粉 KI试液滴在白磁板上 用玻璃棒蘸取少量被滴定的溶液 在白磁板上划 如果立即出现蓝色即已到滴定终点 外指示剂法的缺点 由于滴定的溶液是强酸性 KI遇光能被空气氧化析出碘 所以 在没有达到终点时 就有可能呈现蓝色 而造成误判 由于经常蘸取溶液进行试验 可造成滴定液的损失而带来误差 方法难掌握 内指示剂法内指示剂法指示终点 操作简便 但生成重氮盐一般都带有颜色 干扰指示剂颜色变化的观察 尤其是颜色很深时 更是这样 在重氮化滴定法中 内指示剂法应用不是很广泛 原理 本类药物的盐酸丁卡因 盐酸利多卡因 盐酸妥卡尼和盐酸布比卡因的分子结构含有弱碱性氮原子 可用非水溶液滴定法测定含量 方法 溶剂 冰醋酸 滴定液 高氯酸 0 1mol L 指示剂 结晶紫 盐酸丁卡因 盐酸利多卡因 盐酸妥卡尼 萘酚苯甲醇 盐酸布比卡因 非水溶液滴定法non aqueoustitrimetry HClO4 盐酸丁卡因 加醋酐以突出终点 例 盐酸利多卡因的非水滴定反应过程 分光光度法 spectrometry 对乙酰氨基酚在257nm波长处有最大吸收 中国药典2010版采用百分吸收系数 法 测定对乙酰氨基酚的含量 含量测定 取本品约40mg 精密称定 置250ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液50ml溶解后 加水至刻度 摇匀 精密量取5ml 至100ml量瓶中 加0 4 氢氧化钠溶液10ml 加水至刻度 摇匀 照紫外 可见分光光度法 药典Chp2010版附录 A 在257nm的波长处测定吸光度 按C8H9NO2的吸收系数 为715计算 即得 例 对乙酰氨基酚 片剂 咀嚼片 注射液 栓剂 胶囊 颗粒剂 比色法 芳伯氨基的重氮化 偶合反应生成有色偶氮染料 专属性差盐酸普鲁卡因与1 2 萘醌 4 磺酸钠溶液反应生成棕红色化合物 适用于盐酸普鲁卡因及其制剂的常规分析 快速荧光测定 盐酸普鲁卡因胺结构中的芳伯氨基与荧胺反应 生成荧光物 可在 400nm 485nm波长处测定荧光强度 较重氮化法灵敏 简便 适用于普鲁卡因胺制剂的测定 以苯甲酸为内标 可以同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的普鲁卡因及其降解产物对氨基苯甲酸 PABA 不需分离提取 准确简便 色谱条件 色谱柱 流动相 检测器 测定方法 供试品溶液 对照品溶液的制备 进样量 计算方法 高效液相色谱法 HPLC 体内药物分析 应用示例 对乙酰氨基酚急性中毒的血药浓度测定 色谱条件 Nova PackC18柱 4 m 150mm 3 9mm Nova PackC18预柱柱温 25 流动相为甲醇 水 50 50 流速 0 8ml min二极管阵列检测器 检测波长254nm血浆样品制备 取静脉血3 4ml 置含肝素抗凝剂的离心管中 离心分离5min 3000rpm 上清液为待测血浆 吸取上述血浆1ml 加饱和硫酸锌溶液1ml 沉淀蛋白后 加入乙醚5ml涡旋混合1min 离心20min 3000rpm 精密吸取乙醚液3 0ml于50 氮气流吹干 冷至室温 以蒸馏水500 l溶解残渣 取10 l进样 对照品溶液的制备 配制对乙酰氨基酚甲醇溶液 10mg ml 并用甲醇逐级稀释成浓度为0 01mg ml 5mg ml的对照品溶液 4 冰箱存放备用 意义 准确 快速有效帮助临床医生确诊 提高医疗质量 盐酸普鲁卡因胺常用的鉴别反应有 A 重氮化 偶合反应B 羟肟酸铁盐反应C 氧化反应D 磺化反应E 碘化反应 自测题 采用亚硝酸钠法测定含量的药物有 A 苯巴比妥B 盐酸丁卡因C 苯佐卡因D 对乙酰氨基酚E 盐酸去氧肾上腺素 下列药物中不能用亚硝酸钠滴定法测定含量者 A 乙酰水杨酸B 对氨基水杨酸