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临床生化干扰试验批准指南介绍 EP7 A 前言 NCCLS 美国 国家临床实验室标准化委员会 Nationalcommitteeforclinicallaboratory NCCLS是一个国际性的 各学科间的 非盈利性的标准制定组织 NCCLS已经得到全球广泛的认可 NCCLS现已更名为CLSI 临床实验室标准化协会 ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute 前言 NCCLS文件以标准 指南或委员会报告的形式发表 标准 通过一致化过程形成的文件 并对材料 方法 或实践以不能修改方式明确规定其特定的基本要求 指南 通过一致化过程形成的文件 描述某个一般性操作惯例 程序或材料的标准 供用户自愿使用 使用指南时 可由用户根据其特定需要草拟或进行修改 报告 未经过一致化审定过程的文件 由理事会发布 迄今为止 NCCLS为临床实验室已提供超过160份标准和指南 涉及到当今检验医学发展的方方面面 干扰物是临床实验室检测误差的一个很重要的来源 它们在某种程度上对病人来说是一种危害 常规工作中精密度通过室内质控监控 准确性通过与参考物质作比较进行验证 但实验室不能很容易的检测干扰物质引起的误差 因此 IVD厂商在试验设计阶段就应考虑到潜在的干扰物 目的 为临床生化检验结果中研究 鉴别和确定干扰物质效应提供背景信息 指导和实验程序 专门为厂商和临床实验室制订 作用 对厂商来说 通过EP7程序可以筛选潜在干扰物质 量化干扰效应 证实病人样本中的干扰 确认分析方法对干扰物质的敏感性 评估潜在的风险 并将有意义的干扰声明提供给用户 对于临床实验室来说 通过EP7的调查策略 规定数据收集和分析要求 确认干扰声明 研究明确的干扰物质带来的结果差异 确保分析方法符合临床要求 主要内容 适用范围干扰的影响及机理干扰实验的判断标准干扰分析前的质量保证干扰的评估用病人标本评价干扰建立 确认和验证干扰声明调查分析与临床不一致的病人结果总结 适用范围 1 分析方法任何分析方法 不论定性或是定量 都受干扰物的影响 本指南适用大部分分析方法和仪器 特殊方法可能需要必要的调整 如分离技术和免疫学分析方法在附录A中讨论 2 样本类型血清 血浆 全血 脑脊液 尿和其它大多数体液等标本类型都可用本指南评估 3 干扰物质潜在的干扰物质可能由内在或外在的引起 病理情况下的代谢物 如胆红素 脂肪 蛋白质 血红蛋白等 病人治疗期间引入的物质 如药物 肠外营养 血浆代用品 抗凝剂等 病人吸收的物质 如药品滥用 营养补充等 标本准备引入的物质 如抗凝剂 防腐剂等 标本处理过程中引入的污染物 如手霜 滑石粉 促凝剂等 标本自身的基质效应 其理化性质跟理想的新鲜标本不同 适用范围 干扰对不准确度的影响不准确度 总分析误差 包括不精密度 方法特异性偏倚和样本特异性偏倚 干扰 方法评估常常只评估前两种 干扰物质的敏感性可以引起系统误差和随机误差 在统计学上这两者都被看作是不准确度的组成成分 总分析误差 对于给定的病人群体 干扰物在样本中的平均浓度可能引起系统偏倚 这个偏倚将会被包括在估计的方法偏倚之内 对于个别病人 干扰物引起的偏倚取决于病人样本中的干扰物浓度 当干扰物浓度改变这个偏倚也随着改变 例如 由于干扰物质在体内的清除和代谢 结果的改变可能会被认为病人情况的改变 干扰的机理1 物理作用干扰物具有的物理性质 使它和分析物一样被检测和测定出来 如它的颜色 光散射 光吸收 洗脱位置 电极响应等 干扰物可能会改变标本的物理特性 如表面张力 粘度 浊度 离子强度等 干扰检测结果 2 化学作用干扰物可能会影响酶活力 例如 阻止金属激活剂结合到活性中心上去 氧化必须的巯基等 干扰物也可破坏或阻止反应 例如 破坏试剂或抑止指示反应 干扰物也可改变分析物的形式 例如 形成复合物或沉淀 干扰的机理3 非特异性干扰物可能和分析物以同样的方式参与反应 例如 苦味酸肌酐方法中酮酸干扰 重氮胆红素方法中吲哚酚硫酸盐的干扰 在免疫化学方法中干扰物可能和抗体发生交叉反应 例如 茶碱方法中咖啡因的干扰 干扰物可能催化某一反应 反应结果中和了底物 例如 腺苷激酶可在CK反应中消耗底物ADP 4 基质效应干扰物可改变样品基质的物理特性 如粘度 表面张力 浊度或离子强度等 从而改变被测量浓度 干扰的机理5 水取代作用非水物质 蛋白 脂质 由于取代了血浆中部分水体积 影响了一些分析物的测定 这些作用考虑或不考虑为干扰作用 取决于要求的结果是以总体积的浓度表示 还是以血浆水的浓度来表示 临床要求较之分析原理更重要 须确定是否考虑取代作用是一个干扰 例如 用火焰光度法或间接电位法作Na 测定时 高脂血症被考虑为是一种干扰 因为Na 在血浆水中的浓度在临床上有重要意义 6 酶抑制作用干扰物可与金属激活因子形成螯合物 与催化位点结合 氧化必需巯基基团而改变被测量或试剂中酶的活性 干扰实验的判断标准 为保证客观性 可接受标准必须在评价实验操作之前就确定 建立可接受标准时 必须考虑临床意义和统计学意义两者之间的差别 1 临床可接受标准基于生理变异的标准源于临床经验的标准基于被分析物变异的标准2 统计学意义和检验效能在确定一个物质是否存在干扰前 首先确定所得到的结果是否有统计学意义 3 分析物检测浓度干扰应该在两种医学决定浓度被评估 如果在一种浓度上进行测试 要注意有可能漏过在其他分析物浓度水平上有临床意义的干扰 干扰实验的判断标准 4 干扰物检测浓度决定一种物质在 最坏情况 的条件下是否会产生干扰 干扰筛选应该在实验室期望观察到的最高浓度水平的病人样本中进行 5 潜在的干扰物质基于分析方法的预期用途 考虑可能出现在患者标本中的潜在干扰物质 干扰实验的判断标准 干扰分析前的质量保证 在进行一个干扰实验之前 必须进行 熟悉仪器设备和测量程序精密度确认 EP5 临床生化设备性能的精密度评价 准确度确认 EP9 利用病人样本进行方法学比较和偏倚评估 携带污染评价质量控制 C24 内部质量控制实验 原理和定义 标准化防范 M29 实验室工作人员避免职业感染 安全性和废物处置 参照厂商的标签和材料安全数据表 MSDS 干扰的评估 两种评估干扰物质的基本方法 1 加样回收法 评价潜在的干扰物添加到样本后的干扰效应 干扰筛选 2 真实标本法 评价个别有代表性的病人结果与高特异性的比较方法的结果偏倚 用病人标本评价干扰 干扰筛选 把一个潜在的干扰物质添加到样本中 然后评价相对于未加干扰物的对照样本部分的偏差 即为 双份差异性试验 相对高浓度的潜在干扰物可以引起 最大的浓度偏差 这种评价多种干扰物质的方法称为干扰筛选 如果引起的偏差没有临床意义 即便干扰物质引起的偏差存在 也不用进行更进一步的实验 能引起有临床意义的偏差的物质叫做干扰物 这些物质需要进一步评价 目的是测定干扰物浓度和干扰程度两者之间的关系 干扰筛选的局限性 1 在临床标本中的真实干扰物可能不是原来的药物 而是代谢产物 2 测试样本的基质可能不能代表典型的病理学标本 可能引起基质效应3 由于蛋白结合 金属络合 沉淀或分析物异质化 添加进入的干扰物与临床标本中的干扰物不相同4 干扰可能出现在分析物或干扰物的其他浓度 而不是测试时的浓度 用病人样本评价干扰 由于干扰筛查存在明显的局限性 不管筛查实验如何广泛 在病人的标本中可能遇到意想不到的干扰 为了最大程度的减少这种情况的发生 应该分析来自病人的真实标本以评价内在的不同血清标本间的变异性 如果某个标本中出现一个可重复的 离群值 则说明该标本中有未知的干扰物质存在 实验设计 实验以分析两组病人样本为基础 例如一个测试组和一个对照组 用两种方法 被评价的方法和参考方法或是其他被认定合格的方法 测试组和对照组结果有偏差显示有干扰的存在 测试标本 选择原则 疾病 例如 来自心脏病 肝病或肾病病人的标本 药物 例如 使用过某种想了解的药物的病人标本 其他不正常组分 例如 具有不正常胆红素 脂质 血红蛋白或蛋白的标本 对照标本 选择原则 没有使用目标药物 潜在干扰物质在正常浓度范围内 相同或者相似诊断 分析物分布状态与测试标本相似 实验程序 1 计算测试标本和对照标本数 取决于 两种方法精密度 干扰效应的大小 规定的假设检验水准 2 挑选测试组和对照组标本 3 选择合适的参考方法或者效果较好的比较方法 4 在尽可能短的时间内 通常在两个小时内 用两种方法重复测定每个样本 5 如果观察到偏倚存在 测定样本中药物或者其他潜在的干扰物质的浓度 如果可能的话 确定偏倚和干扰物浓度两者之间的关系 用病人样本评价干扰的局限性 主要是缺乏对测试变量的控制 对结果作明确的解释也需要选择特异性较高的比较方法 1 如果标本不新鲜 将会失去某些易变组分 例如 乙酰乙酸 CO2等 2 住院病人通常服用多种药物 可能导致内源性代谢物浓度的增高3 按照疾病和治疗药物进行预期分组可能无法完成4 干扰物可能不存在于该批病人的测试样本中 用病人样本评价干扰的局限性 5 很少有公认的参考方法 有的参考方法难以在常规实验室中使用 另外 参考方法可能也同样的被干扰 无论怎样 第二种方法对证实干扰物是有用的 这也是唯一的可检出药物代谢物干扰作用的方法 也是可以肯定在真实标本中有干扰的方法 建立 确认和验证干扰声明 EP7 A可被厂商用于验证和确认特异性 建立干扰声明 临床实验室也可用它检验厂商的声明以及确认方法的特异性是否满足医学要求 干扰声明 对于商业方法来说 已知的干扰物质应在使用明书中阐述 实验证明没有干扰的物质也应该阐述 以便实验室能够验证某种方法对它所服务的病人群体的适应性 临床实验室需要知道来自厂商的以下信息 1 分析物和干扰物的浓度2 潜在干扰物的名称3 用于判定有临床意义的干扰标准4 某种物质产生干扰的上限浓度或者不产生干扰的下限等 调查与临床不一致的病人结果 每个实验室偶尔会遇到与临床不一致的结果 该结果可能被临床医生认为与诊断不相符或者与以前结果不一致 或者在实验室内两种方法检测的结果有差异 如果实验室对一个特定病人的结果的差异可被重