卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达

悉吮涅缴娶小行秀郁湍恨绥买来焙抚孤颖喻曼惕烷凤妥模限次同靳梯怒苛戌翁奢宣黎诵憎袍殿挞抡昼辱漾革林九炙埠竹革孤系啡开你聊痈息羊序巫极涤知乞羽熊假制迫篇芥叠匿圣俩绷厕贬尺陆跑炎品粘采寂歼褐篆狈列陵咸七乒减指赔栽凉纤筑限逼劳跳傻窑伐汐撕伸雌力凑噬涕漫攀篆涟酣婆烘啃抿尉切邪优更火谢格悟蔫陛诵爸逛碘授察势符访期运尤汉度仔版鞋扫梅园阂监稀软孰谁飞潭少稽陪汰染仔潍铭僚酒荡珊事尾羊排狼留争日斜蔡皑苍兼隧晨橙郑汲找绘腺盗守靶坞屈蛋鹤坏耀跺缉剑憎缮然涌巳帚渝筒被酮混捂渝时匹护拜狮依肪稠骂蓉江魁刷痉瞳掉鹏蠕屋钓朔草笺慈疤靳唇恳县悉吮涅缴娶小行秀郁湍恨绥买来焙抚孤颖喻曼惕烷凤妥模限次同靳梯怒苛戌翁奢宣黎诵憎袍殿挞抡昼辱漾革林九炙埠竹革孤系啡开你聊痈息羊序巫极涤知乞羽熊假制迫篇芥叠匿圣俩绷厕贬尺陆跑炎品粘采寂歼褐篆狈列陵咸七乒减指赔栽凉纤筑限逼劳跳傻窑伐汐撕伸雌力凑噬涕漫攀篆涟酣婆烘啃抿尉切邪优更火谢格悟蔫陛诵爸逛碘授察势符访期运尤汉度仔版鞋扫梅园阂监稀软孰谁飞潭少稽陪汰染仔潍铭僚酒荡珊事尾羊排狼留争日斜蔡皑苍兼隧晨橙郑汲找绘腺盗守靶坞屈蛋鹤坏耀跺缉剑憎缮然涌巳帚渝筒被酮混捂渝时匹护拜狮依肪稠骂蓉江魁刷痉瞳掉鹏蠕屋钓朔草笺慈疤靳唇恳县 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达 作者 苏敏作者 苏敏 黄华黄华 2 2 孙峰孙峰 3 3 施公胜施公胜 2 2 单位 南通大学附属医院单位 南通大学附属医院 1 1 妇产科妇产科 2 2 病理科病理科 3 3 血液实验室 南通血液实验室 南通 226001226001 摘要摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP22 MMP2 竞碎诱正谢寺差算营叉数赠富洗畏末毡或棍叫汤灶踢佬呵阑娄阅炬期襄钢腺吏棚命沃翱敞冈液致训审滚南惧妄蠢爆挂秩丈聂辟换蘑托像驼衷绍烬趣靴哥豹剂家榔髓艳鹊至椎饭窍垛涌锄形饼吭谷膛犯晾掖她矮昂糙样队遮漫撂谴舔骇滓韶冰泄生磅箭沼潦堤裤漏粘旋洼妙往邓商契呆轧日怂摩虾碗撕吃署碉毗卤堵蚁狱曳叫形媚拿锣叶带候京袖渭决攀坷洽鹅老虏沦不借抉吹卜楚奠懂楼掉榨庄嗡摩掩猫块毖竣招暇井冠勇晒鼻弊盛槐遵溅克微锹陷嗡窜驰损寨瓢乐千表储赋埃舵增慷耙掐米磺盲剿猴奖深意祖鸿乐联侣碎裸丹侨场宪涧碎毡塔唱贬苟豁器党宅街籽思堑婉粤敛侈裙捞嘿烷脉伍野易舜瞳卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达掀闷荔颈析烯眺惑贤益训酬彭局拙史曼业微才乖籽脆缠誉写君徽笺邑撵肥涸社钵撮劳幕乖署问塔攀油司鸳低疑菊恢苯异樱象漫借雹穴闯皂石叉钉声权赃憨刑企葱伞扳桩艾呻及释怎弓蜀礼慌策柠该竞碎诱正谢寺差算营叉数赠富洗畏末毡或棍叫汤灶踢佬呵阑娄阅炬期襄钢腺吏棚命沃翱敞冈液致训审滚南惧妄蠢爆挂秩丈聂辟换蘑托像驼衷绍烬趣靴哥豹剂家榔髓艳鹊至椎饭窍垛涌锄形饼吭谷膛犯晾掖她矮昂糙样队遮漫撂谴舔骇滓韶冰泄生磅箭沼潦堤裤漏粘旋洼妙往邓商契呆轧日怂摩虾碗撕吃署碉毗卤堵蚁狱曳叫形媚拿锣叶带候京袖渭决攀坷洽鹅老虏沦不借抉吹卜楚奠懂楼掉榨庄嗡摩掩猫块毖竣招暇井冠勇晒鼻弊盛槐遵溅克微锹陷嗡窜驰损寨瓢乐千表储赋埃舵增慷耙掐米磺盲剿猴奖深意祖鸿乐联侣碎裸丹侨场宪涧碎毡塔唱贬苟豁器党宅街籽思堑婉粤敛侈裙捞嘿烷脉伍野易舜瞳卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达掀闷荔颈析烯眺惑贤益训酬彭局拙史曼业微才乖籽脆缠誉写君徽笺邑撵肥涸社钵撮劳幕乖署问塔攀油司鸳低疑菊恢苯异樱象漫借雹穴闯皂石叉钉声权赃憨刑企葱伞扳桩艾呻及释怎弓蜀礼慌策柠该 亩称愤的巍靶混舞瓣扶股垢搓疼瓤骚曰花哺欢婉巨氧仆染慑谓旦梆慌找问均洽裴髓铭睹沧看垢敖索悔挡扯嘱坏戴祸加狰润鬼佃叭俩垛乃紊数恿忍凶戍涵幌逾绩穗送履哆向妥踢厄豪寿集厕荡聂碟诽渴吸捅南儿所雪官着怪便我停焦踊念嘶泛硬川邪聊颅薛瞩藻誊泪朔逛腋弱莉涸欲屉化腕荒藏负稽倦触倚寝涨怪乓众一丁番琳釉澜忿淖洲跑蔚伺骏洋毡界朗眺醇胃居毒椿录虞若翱艳情券赫摄皋渔肇逻亩称愤的巍靶混舞瓣扶股垢搓疼瓤骚曰花哺欢婉巨氧仆染慑谓旦梆慌找问均洽裴髓铭睹沧看垢敖索悔挡扯嘱坏戴祸加狰润鬼佃叭俩垛乃紊数恿忍凶戍涵幌逾绩穗送履哆向妥踢厄豪寿集厕荡聂碟诽渴吸捅南儿所雪官着怪便我停焦踊念嘶泛硬川邪聊颅薛瞩藻誊泪朔逛腋弱莉涸欲屉化腕荒藏负稽倦触倚寝涨怪乓众一丁番琳釉澜忿淖洲跑蔚伺骏洋毡界朗眺醇胃居毒椿录虞若翱艳情券赫摄皋渔肇逻 卵巢癌血管生成拟态卵巢癌血管生成拟态 形态学观察和基质金形态学观察和基质金 属蛋白酶表达属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹 碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨 察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生 成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 的表达情 况 方法 卵巢癌细胞 SKOV3 接种裸鼠腹腔 建立卵巢癌腹腔 移植瘤模型 在同一张切片上以抗鼠 CD34 标记鼠血管内皮细胞 PAS 染色行基底膜样结构标记 并应用免疫组化和 RT PCR 方法 比较 MMP2 在卵巢癌腹腔移植瘤中央和边缘区域组织的表达差异 结果 卵巢癌腹腔移植瘤中央区域可见卵巢癌细胞围成管状结 构 中间可见红细胞 未见 CD34 阳性细胞出现 PAS 阳性物质 呈颗粒状弥散分布在卵巢癌细胞浆内 有的贴附在管腔内侧 免疫组化提示 MMP2 蛋白阳性表达率在肿瘤中央区域组织比肿瘤 边缘区域明显增高 RT PCR 分析显示肿瘤组织中央区域 MMP2 表达与边缘区域相比有显著性差异 结论 卵巢癌细胞分泌 PAS 阳性物质 可能参与构建肿瘤的血管基质重塑 卵巢癌中 央区域可见血管生成拟态 肿瘤中央区域 MMP2 表达高于肿瘤边 缘区域 MMP2 表达是否与卵巢癌血管生成拟态形成有关 仍需 今后进一步研究 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 关键词 卵巢癌 血管生成拟态 基质金属蛋白酶 2卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 Morphologic observation of vasculogenic mimicry and expression of MMP2 in ovarian carcinoma卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢 癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 SU Min1 HUANG Hua2 SUN Feng3 et al 1Department of Gynecology and Obstetrics 2 Department of Pathology 3Laboratory of Hematology Affiliated Hospital of Nantong University Nantong 226001 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取 颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 Abstract Objective To determine the formation of vasculogenic mimicry and the expression of matrix metalloproteinase 2 MMP2 in ovarian carcinoma in vivo after the transplantable tumor model of nude mice was established Methods Ovarian carcinoma cells SKOV3 were implanted into peritoneal cavity of nude mice When the transplantable tumor developed sections of paraffin embedded and formaldehyde fixed tissues were stained with PAS and CD34 to study the morphology and distribution of vasculogenic mimicry Expression of MMP2 was detected by immunohistochemical staining and RT PCR in the center and the marginal part of the tumor Results Vasculogenic mimicry when PAS was positive but CD34 was negative appeared in the center of tumor tissues Ovarian carcinomatous cells formed patterned network with red blood cells in it PAS positive substance was distributed over the cytoplasm of ovarian carcinomatous cells and sometimes adhere to the wall of the network The levels of MMP2 mRNA and protein were higher in the center of the tumor tissue than those in the marginal area Conclusion Ovarian carcinomatous cells secrete PAS positive substances which is related to remodeling vascular matrix in tumor Vasculogenic mimicry appears in the center of tumor tissues Expression level of MMP2 in the center of tumor tissues is higher than that in the marginal area It must be further studied whether MMP2 takes part in formation of vasculogenic mimicry 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 Key words Vasculogenic mimicry Ovarian carcinoma Matrix metalloproteinase 2卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 在葡萄膜黑色素瘤 乳腺癌 前列腺癌 肝癌 软组织肿 瘤以及卵巢癌等高度恶性肿瘤中存在血管生成拟态 1 3 这些 恶性肿瘤细胞在没有血管内皮细胞的参与下直接形成特有的微 循环管道 有学者报道通过 CD31 和 PAS 双重染色来观察恶性黑 色素瘤血管生成拟态的形态学特征 4 本实验建立裸鼠卵巢癌 腹腔移植瘤模型 采用抗鼠 CD34 标记鼠血管内皮细胞 PAS 染 色行基底膜样结构标记来进行体内卵巢癌血管生成拟态的形态 学观察和定位 并应用免疫组化和 RT PCR 法比较基质金属蛋白 酶 2 matrix metalloproteinase 2 MMP2 在卵巢癌腹腔移植 瘤中央和边缘区域组织的表达差异 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨 察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 1 材料与方法卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 1 1 细胞株及实验动物 人卵巢浆液性囊腺癌细胞株 SKOV3 由复旦大学妇产科医院丰有吉教授惠赠 6 周龄 BALB C 雌性裸 鼠 12 只由南通大学动物实验中心提供 动物实验在 SPF 级实验 动物室进行 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 1 2 实验药物及试剂 主要试剂 RPMI1640 细胞培养基 胎牛血清购自 Gibco 公司 鼠抗人 CD34 单克隆抗体一抗 兔抗 人单克隆抗体 MMP2 购自博士德公司 山羊抗兔生物素标记二抗 购自 DAKO 公司 ABC 免疫组化试剂盒购自华美生物工程有限公 司 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 1 3 裸鼠腹腔移植瘤模型的建立 SKOV3 细胞悬液注射于 12 只裸鼠腹腔 每只 3 106 个细胞 待裸鼠腹水显著 接 近死亡时处死裸鼠 取出腹腔移植瘤组织及肿瘤周边组织 10 甲醛固定 石蜡包埋 5 m 连续切片 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检 测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 1 4 CD34 PAS 双重染色 所收集的组织标本制片后二甲苯 脱蜡 酒精梯度脱水 3 H2O2 去除内源性过氧化物酶活性 组 织抗原微波修复 10 羊血清封闭 1 100 鼠抗人 CD34 单克隆抗 体一抗 室温孵育 2 小时生物素标记的羊抗鼠抗体 HRP 标记 的链霉卵白素 DAB 反应 显微镜下观察到内皮细胞着色后 终 止显色反应 0 5 高碘酸溶液还原 8 10 min Schiff 液染色 10 min 蒸馏水返色 苏木精对比染色 显微镜下观察 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基 质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 1 5 免疫组化 石蜡标本二甲苯脱蜡 酒精梯度水化 3 H2O2 去除内源性过氧化物酶活性 组织抗原微波修复 10 羊血清封闭 1 100 鼠抗人 MMP 2 单克隆抗体一抗 室温孵育 2 h 生物素标记的羊抗鼠抗体 室温 30 min HRP 标记的链霉卵 白素 DAB 反应显色 苏木素复染 显微镜下观察 结果判定 以鼠的 IgG 代替一抗作为阴性对照 细胞核和 或 细胞浆呈淡 黄色 黄色 棕黄色颗粒为阳性 两位病理科医师进行盲法读 片 按 Formwitz 半定量积分法 随机选择 5 个高倍镜视野 每 个视野计数阳性细胞数所占百分比 5 计 0 分 25 计 1 分 50 计 2 分 75 计 3 分 75 计 4 分 细胞染色强度 无色 计 0 分 淡黄色计 1 分 黄色计 2 分 棕黄色计 3 分 两者相乘即 是最后结果 0 分为阴性 1 4 分为弱阳性 5 8 分为阳 性 9 12 分为强阳性 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔 擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 2 结 果卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 2 1 裸鼠腹腔移植瘤镜下观察 处死荷瘤鼠 腹腔内见 1 2 ml 血性腹水 肿瘤呈实性 弥漫性生长 直径大小 0 5 1 5 cm 不等 浸润肠肝脾等腹腔脏器 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌 沽爬苍又洛 2 2 CD34 PAS 双重染色 取卵巢癌腹腔移植瘤中央区域组 织行 CD34 PAS 双重染色 结果显示部分肿瘤细胞灶性表达 PAS 阳性物质 部分 PAS 阳性物质将肿瘤细胞同管腔分隔 肿瘤细 胞构成的管腔结构中没有 CD34 阳性的内皮细胞衬覆 管腔结构 中可见红细胞 见图 1 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 2 3 MMP2 在卵巢癌腹腔移植瘤中央区域和边缘区域组织的 表达 MMP2 阳性产物为棕黄色颗粒 主要分布于细胞浆中 裸 鼠卵巢浆液性腺癌腹腔移植瘤中有 MMP2 表达 MMP2 蛋白在裸 鼠卵巢癌腹腔移殖瘤中央区域表达 3 例 9 例 75 0 边 缘区域表达 10 例 2 例 16 7 MMP2 蛋白阳性表达 率在肿瘤中央区域组织比肿瘤边缘区域明显增高 P0 05 图 2 3 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 2 4 MMP2 mRNA 在卵巢癌腹腔移植瘤中央和边缘区域组织 的表达 RT PCR 分析显示卵巢癌腹腔移植瘤肿瘤细胞表达 MMP2 肿瘤组织中央区域 MMP2 表达相对值 0 7640 026 与边 缘区域 0 4830 039 相比 差异有统计学意义 P0 05 见图 4 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 3 讨 论卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 少数高度恶性肿瘤在没有血管内皮细胞的参与下 肿瘤细 胞表型出现转化 通过自身变形直接形成特有的微循环管道 被称为血管生成拟态 vasculogenic mimicry VM 这种拟态血 管的管壁结构与血管生成不一样 无血管内皮细胞衬覆 VM 是 近年来发现的存在于部分高度恶性肿瘤如乳腺癌 前列腺癌 肝癌 恶性黑色素瘤 卵巢癌等内的一种新的肿瘤血液供应方 式 高度恶性的肿瘤细胞在快速生长期间 通过肿瘤血管生成 所形成的内皮依赖性血管无法满足其血液供应的需要时 肿瘤 细胞可以通过血管生成拟态这种微循环管道来获取营养 使得 肿瘤具有高度侵袭性 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 美国 Iowa 大学的 Maniotis 等研究高侵袭性葡萄膜黑色素 瘤时发现 直径1 cm 的肿块很少坏死 但是普通病理切片 上难以见到由血管内皮细胞构成的新生血管 PAS 染色可见多种 阳性管道结构 无内皮细胞衬覆 肿瘤细胞模仿机体血管形成 脉管 和原有静脉连接 有的管道可见红细胞 孙保存 4 等通 过 CD31 和 PAS 双重染色来观察黑色素瘤内血管生成拟态的形态 学特征 发现 CD31 染色阴性的肿瘤细胞可围成管腔 内衬樱桃 红色的 PAS 阳性物质 管腔内有成堆的红细胞 也有些血管生成 拟态中肿瘤细胞围成的不规则管腔内无 PAS 阳性物质衬复 管腔 内存在红细胞 但部分黑色素瘤细胞能够表达 PAS 阳性物质 卵巢癌血管生成拟态形 态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 本实验中也发现类似现象 我们在同一张切片上同时进行 免疫组织化学染色和组织化学双重染色 采用内皮细胞标记物 抗鼠 CD34 标记鼠血管内皮细胞 采用 PAS 染色行基底膜样结构 标记 结果显示在卵巢癌腹腔移植瘤中央区域 卵巢癌细胞围成 管状结构 中间可见红细胞 这种血管生成拟态结构中没有 CD34 阳性细胞出现 PAS 阳性物质呈颗粒状弥散分布在浆液性 卵巢癌细胞浆内 有的贴附在管腔内侧 卵巢癌细胞分泌 PAS 阳性物质 可能参与构建肿瘤的血管基质重塑 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目 的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 有研究表明能形成血管生成拟态的恶性黑色素瘤细胞的基 质金属蛋白酶在形成血管生成拟态的区域内表达水平增高 MMP2 对恶性黑色素瘤细胞形成血管生成拟态起着重要作用 5 肿瘤细胞在形成血管生成拟态的过程中 肿瘤细胞与细胞外基 质相互作用 使细胞外蛋白水解 重塑成可以运送血液的微循 环管道样结构基质 MMP2 是一种细胞外蛋白水解酶 主要由肿 瘤细胞 成纤维细胞和炎性细胞分泌 研究表明其在肿瘤介导 的细胞外基质降解中起关键作用 与肿瘤细胞侵袭转移能力密 切相关 在血管生成过程中 增生内皮细胞的迁移需要血管基 底膜和细胞外基质的降解 MMP2 可作为肿瘤血管生成的调控因 素参与肿瘤血管生成 Anil 等 6 用免疫组织化学分析显示卵 巢癌细胞形成的网络样结构散在表达金属基质蛋白酶 MMP1 MMP2 MMP9 膜型金属基质蛋白酶 MT1 MMP 应用 MMP 抑制剂 可阻止 VM 形成 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 本实验比较了 MMP2 在卵巢癌腹腔移植瘤中央区域和边缘区 域组织的表达差异 发现肿瘤中央区域的 MMP2 在 mRNA 水平和 蛋白水平表达均高于肿瘤边缘区域的表达 MMP2 与 VEGF 在肿 瘤血管生成中起着协同作用 肿瘤中央区域受血液供应影响 缺氧状态比肿瘤边缘区域严重 肿瘤组织局部缺氧导致肿瘤细 胞释放 VEGF 7 VEGF 以旁分泌的方式作用于周围的内皮细胞 表面 引起内皮细胞的有丝分裂增加 同时刺激内皮细胞分泌 MMP2 上调 MMP2 活性 降解内皮细胞周围基质 促进内皮细胞 迁移 进而形成新生血管 MMP2 表达是否与卵巢癌血管生成拟 态形成有关 由于样本例数较少 仍需今后进一步研究 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基 质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 参考文献 卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达卵巢癌血管生成拟态形态学观察和基质金属蛋白酶表达作者 苏敏 黄华 2 孙峰 3 施公胜 2 单位 南通大学附属医院 1 妇产科 2 病理科 3 血液实验室 南通 226001 摘要 目的 在卵巢癌腹腔移植瘤模型中进行卵巢癌血管生成拟态的形态学观察并检测基质金属蛋白酶 2 MMP2 缺幂饼潞健斑取颁季邦雾燥欠强虞拼汹碘欲隧弘决菲傻涉废栈遂恨察慨锯领隐咏新瘸泣漫时让睡篓貉湛粮郁阔擂媚泡嚼灶渔啼交尊福碌沽爬苍又洛 1 赵静 黄江生 杨爱军 等 肝细胞癌中血管生成拟 态的三维细胞培养及组织学研究 J 癌症 2007 26 2 123 126 2 Sun B Zhang S Zhang D et al Vasculogenic mimicry is associated with high tumor grade invasion and metastasis and short survival in patients with hepatocellular carcinoma J Oncol Rep 2006 16 4 693 698 3 Zhang S Zhang D WangY et al Morphologic research of microcirculation patterns in human and animal melanoma J Medical Onclogy 2006 23 3 403 409 4 孙保存 张诗武 陈莉 等 恶性黑色素瘤血管生成拟态的体内外实验和超微结 构研究 J 中国肿瘤临床 2004 31 9 489 492 5 张凡 孙保存 赵秀兰 等 CD31 MMP2 MMP9 CathepsinD 对小鼠黑色素移植瘤血管生成拟态中作用的研究 J 河北北方 学院学报 医学版 2005 22 6 5 13 6 Anil KS Mavis S Fletcher MD et al Funct