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无菌检查 2018 07 02 一 无菌检查 环境保证 培养基保证 有效的方法 SOP操作 有效的结果 无菌性检查 灵敏度检查 方法确认 可靠的结论 结果判断 二 检测标准 中华人民共和国药典 2015版四部1101无菌检查法GB T14233 2 2005医用输液 输血 注射器具检验方法第2部分 生物学试验方法ISO11737 22009医疗设备的灭菌 微生物学方法第二部分 灭菌过程中无菌测试的定义 验证及维护 三 检测环境 2015版药典要求1101无菌检查 无菌检查应在无菌条件下进行 试验环境必须达到无菌检查的要求 9203药品微生物实验室质量管理指导原则 无菌检査应在B级背景下的A级单向流洁净区域或隔离系统中进行 单向流空气 工作台面及环境应定期按医药工业洁净室 区 悬浮粒子 浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认 隔离系统应定期按相关的要求进行验证 其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求 GB T14233 2 2005 无菌室操作台或超净工作台局部应符合洁净度100级单向流空气区域要求 四 菌种的选择 注 菌株传代次数不得超过5次 五 实验材料准备 1 实验所需的培养基及稀释液 2015版药典 胰酪大豆胨液体培养基 用于真菌和需氧菌的培养 流乙醇酸盐流体培养基 用于厌氧菌的培养 也可用于需氧菌培养 胰酪大豆胨琼脂培养基 用于细菌的计数 沙氏葡萄糖琼脂培养基 用于霉菌的计数 五 实验材料准备 2 培养基配制 直接购买配制好的干粉培养基 按照培养基包装上的说明 取规定量的干粉培养基及纯化水进行配制 按121 15min进行灭菌 灭菌后冷却至室温备用 药典规定 配制好的培养基应保存在2 25 非密闭容器 一般三周以内使用 五 实验材料准备 3 培养基适用性检查 无菌性检查 排出培养基本身的污染 避免无菌试验过程中由培养基引起的假阳性 灵敏度检查 确保培养基营养性良好 对微生物具有生长促进作用 排出无菌试验过程中由培养基引起的假阴性注 用于无菌检查的培养基必须经过培养基适用性检查 五 实验材料准备 3 培养基适用性检查 五 实验材料准备 4 其他实验材料 带滤芯枪头 量筒 100ml 剪刀 镊子 无尘布以上物品可采样湿热灭菌121 30min 六 实验设备 1 电子天平 用于培养基干粉的称量2 压力蒸汽灭菌器 用以培养基及实验物品的灭菌3 生化培养箱 用于细菌的培养4 霉菌培养箱 用于霉菌及酵母菌的培养5 生物安全柜 用于实验环境的提供 七 菌液的制备 菌株的准备 取1瓶复溶液和1瓶定量菌株 平衡至室温 在生物安全柜内 撕开菌株瓶的铝塑组合盖 在无菌操作下 取镊子过火焰灭菌后 待其冷却 用镊子打开菌株瓶的冻干塞 打开复溶液的螺旋盖并把菌株冻干粉倒入复溶液中 重新旋紧螺旋盖并漩涡震荡至少10秒确保菌株完全溶解 即得所需菌悬液 每0 1mL的菌悬液即含10 99cfu 八 验证方法 目的 确认无菌试验的产品是否具有抑菌性 如果有 如何去除 并被证实 无菌检查方法有直接培养法和薄膜过滤法两种 医疗器械最常使用的方法为直接培养法 薄膜过滤法适用于液体类产品或供试品已转化为供试液的产品 本公司的产品制备成供试液后仍有颗粒杂质无法过滤 故选用直接培养法 八 验证方法 直接培养法 八 验证方法 薄膜过滤法 八 验证方法 结果判断 与对照管比较 如含供试品各容器中的试验菌均生长良好 则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计 照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检査 如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱 缓慢或不生长 则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用 应消除供试品的抑菌作用 并重新进行方法适用性试验 九 产品有抑菌性的措施 1 增加冲洗量2 增加培养基的用量 3 使用中和剂或灭菌剂4 更换滤膜品种注 消除供试品的抑菌作用 并重新进行方法适用性试验日常无菌检查阳性对照菌的选择 无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主的供试品 选择金黄色葡萄球菌为对照菌 十 日常无菌检查 无菌检查室供试品接入培养基FTM 供 2管TSB 供 1管阴性 各1管 FTM TSB 准备间培养基 供试品 灭菌物品的准备 阳性对照室取其中一管FTM 供 加入1 100cfu金黄色葡萄球菌 准备间FTM 阴 30 35