生物药学作业题

1 改造鼠源性改造鼠源性单单克隆抗体的首要目的是克隆抗体的首要目的是 C 降低免疫源性 2 能用于防治血栓的能用于防治血栓的酶类药酶类药物有物有 D 尿激酶 3 以下可用于菌种以下可用于菌种纯纯化的方法有化的方法有 B 平板划线 4 下列属于多下列属于多肽肽激素激素类类生物生物药药物的是物的是 D 降钙素 5 由于目的蛋白由于目的蛋白质质和和杂杂蛋白分子量差蛋白分子量差别较别较大 大 拟拟根据分子量大小分离根据分子量大小分离纯纯化并化并获获得目的蛋白得目的蛋白 质质 可采用 可采用 C 凝胶过滤 6 获获得目的基因最常用的方法是 得目的基因最常用的方法是 B PCR 技术 7 促促红细红细胞生胞生长长素 素 EPO 基因能在大 基因能在大肠肠杆菌中表达 但却不能用大杆菌中表达 但却不能用大肠肠杆菌的基因工程菌杆菌的基因工程菌 生生产产人的促人的促红细红细胞生胞生长长素 素 这这是因是因为为 D 大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化 8 以下能用重以下能用重组组 DNA 技技术术生生产产的的药药物物为为 B 生长素 9 以大以大肠肠杆菌杆菌为为目的基因的表达体系 下列正确的是 目的基因的表达体系 下列正确的是 C 容易培养 产物提纯简单 10 外源基因在外源基因在动动物物细细胞与大胞与大肠肠杆菌中表达杆菌中表达产产物的主要区物的主要区别别是 是 A 糖基化 11 筛选杂筛选杂交瘤交瘤细细胞 脾胞 脾 瘤融合瘤融合细细胞 胞 选选用的培养基是用的培养基是 B HAT 12 鼠源性鼠源性单单克隆抗体改造后得到小分子抗体 常用的是 克隆抗体改造后得到小分子抗体 常用的是 B 单链抗体 13 能能够实现够实现微生物菌种定向改造的方法是微生物菌种定向改造的方法是 D 基因工程 14 目前分离的目前分离的 1000 多种抗生素 多种抗生素 约约 2 3 产产自 自 B 放线菌 15 基因表达最常用的宿主菌是 基因表达最常用的宿主菌是 B 大肠杆菌 16 分离分离纯纯化早期 由于提取液中成分复化早期 由于提取液中成分复杂杂 目的物 目的物浓浓度稀 因而易采用 度稀 因而易采用 A 分 离量大分辨率低的方法 17 能能够够用沙土管保存的菌种是用沙土管保存的菌种是 C 青霉菌 18 人人类类第一个基因工程第一个基因工程药药物是 物是 A 人胰岛素 19 外源基因的高效表达会影响宿主外源基因的高效表达会影响宿主细细胞正常的生胞正常的生长长代代谢谢 A 20 抗体中抗体中结结合抗原的部位分布在恒定区合抗原的部位分布在恒定区 B 21 质质粒不具有自主复制能力 粒不具有自主复制能力 B 22 单单克隆抗体就是克隆抗体就是单链单链抗体抗体 B 23 单单克隆抗体只克隆抗体只识别识别一种表位一种表位 抗原决定簇抗原决定簇 的高的高纯纯度抗体 一般来自度抗体 一般来自单单个 淋巴个 淋巴细细胞的胞的 克隆或一个克隆或一个杂杂交瘤交瘤细细胞的克隆 胞的克隆 A 24 PCR 是聚合是聚合酶链酶链式反式反应应法的法的缩缩写写 A 25 生物生物药药物指包括生物制品在内的生物体的初物指包括生物制品在内的生物体的初级级和次极代和次极代谢产谢产物或生物体的某一物或生物体的某一组组成部成部 分 甚至整个生物体用作分 甚至整个生物体用作诊诊断和治断和治疗疗疾病的医疾病的医药药品 品 A 26 细细胞因子胞因子 由细胞分泌的能调节生物有机体生理功能 参与细胞的增殖 分化和凋亡的小分子 多肽物质 27 生物生物药药物物 利用生物体 生物组织或其成分 综合应用生物学 生物化学 微生物学 免疫学 物理化学 生物技术和现代药学的原理和方法 进行加工 制造而成的一大类用于预防 治疗和诊 断疾病的制品 28 发发酵工程制酵工程制药药 采用现代工程技术手段 利用微生物的某些特定功能 为人类生产有用的药 品 或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术 29 诱变诱变育种育种 诱变育种是指有意识地将生物体暴露于物理的 化学的或生物的一种或多种诱变因 子下 促使生物体发生突变 进而从突变体中筛选具有优良性状的突变株的过程 30 基因表达基因表达 基因表达是指结构基因在生物体中的转录 翻译以及所有加工过程 31 抗体抗体药药物物 用于治疗的单克隆抗体 抗体片段 基因工程改造的抗体 免疫偶联物以及融合蛋 白均可统称为抗体药物 32 亚单亚单位疫苗位疫苗 不含病原体核酸 选用能诱发宿主产生中和抗体的微生物蛋白或表面抗原而制成 的疫苗 33 人人 鼠嵌合抗体鼠嵌合抗体 嵌合抗体是最早制备成功的基因工程抗体 它是由鼠源性抗体的 V 区基因与 人抗体的 C 区基因拼接为嵌合基因 然后插入载体 转染骨髓瘤组织表达的抗体分子 因其减少了 鼠源成分 从而降低了鼠源性抗体引起的不良反应 并有助于提高疗效 34 基因工程基因工程药药物物 利用 DNA 重组技术生产出来的药物被称为基因工程药物 35 疫苗疫苗 用于人工主动免疫的生物制品 36 多多肽药肽药物物 多肽和蛋白质类药物指用于预防 治疗和诊断的多肽和蛋白质类物质生物药物 37 生物技生物技术术制制药药 生物技术制药是指运用微生物学 生物学 医学 生物化学等的研究成果 从生物体 生物组织 细胞 体液等 综合利用微生物学 化学 生物化学 生物技术 药学等科 学的原理和方法进行药物制造的技术 38 原生原生质质体融合体融合 用脱壁酶处理将微生物细胞壁去除 制成原生质 再用聚乙二醇 PEG 促进 原生质体发生融合 从而获得融合子的技术 39 治治疗疗性性酶酶 传统的药物分子作为受体激动剂或抑制剂也能起到酶治疗的部分效果 但是它们没 有催化功能 不能介导级联反应 酶的应用包括溶解血栓以促进灌注水平和加强对癌细胞的毒性 40 核酸核酸药药物物 具有药理活性的天然结构的核酸类物质和人工合成合成的核酸类物质 41 杂杂交育种交育种 杂交育种一般指将两个基因型不同的菌株通过接合使遗传物质重新组合 再从中分 离和筛选出具有新性状的菌株 杂交后的杂种不仅能克服原有菌种活力衰退的趋势 而且 杂交育 种使得遗传物质重新组合 扩大了变异范围 改善了产品的质量和产量 42 单单克隆抗体克隆抗体 利用杂交瘤技术制备的单克隆抗体及其衍生物 由一个识别一种抗原表位的 B 细胞克隆产生的同源抗体 43 发酵工程产品开发的关键是筛选到高效菌株 一般优良菌种的选育方法主要有 自然选育 诱 变育种 和 原生质体融合 自然选育 诱变育种 原生质体融合 44 基因工程基因工程药药物制造的主要步物制造的主要步骤骤是 是 基因工程药物制造的主要步骤是 目的基因的获得 构建 DNA 重组体 构建工程菌 目的 基因的表达 产物的分离纯化 产品的检验 45 根据真核基因在原核根据真核基因在原核细细胞中表达的特点 表达胞中表达的特点 表达载载体必体必须须具具备备那些条件 那些条件 表达载体必须具备下列条件 1 能够独立的复制 2 具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记 以利于外源基因的克隆 鉴定和筛选 3 应具有很强的启动子 能为大肠杆菌的 RAN 聚合酶所识别 4 应具有阻遏子 5 应具有很强的终止子 6 所产生的 mRNA 必须具有翻译的起始信号 46 列列举举两种两种亚单亚单位疫苗位疫苗 白喉类毒素 破伤风类毒素 流感嗜血杆菌荚膜多糖 脑膜炎球菌荚膜多糖 流感病毒血凝素和神 经氨酸酶 乙型肝炎 HBsAg 基因工程疫苗 人乳头瘤病毒 47 简简述生物述生物药药物的物的药药理学特性理学特性 答 答 1 活性强 体内存在的天然活性物质 2 治疗针对 性强 基于生理生化机制 3 毒副作用一般较少 营养价值高 4 可能具免疫原性或产生过敏反 应 48 简简述述发发酵工程制酵工程制药药的基本的基本过过程程 答 答 1 菌种的选育 2 培养基的配置 3 灭菌 4 扩大培 养和接种 5 发酵过程 6 分离提纯 49 基因工程制基因工程制药过药过程中阳性克隆的程中阳性克隆的筛选筛选方法有哪些方法有哪些 答 答 1 根据重组子遗传重组表型改变的筛选法 包括利用抗生素抗性基因进行筛选 通过 互补使菌产生颜色来筛选 利用报告基因筛选克隆子 2 根据重组子结构特征的筛选法 包 括琼脂糖凝胶电泳比较重组 DNA 的大小 限制性内切酶分析 印迹杂交方法 PCR 法和 DNA 的序列 分析 根据表达产物采用免疫化学方法筛选 50 简简述抗体述抗体药药物的研物的研发历发历史史答 答 第一阶段以 1890 年 Behring 发现白喉抗毒素为代表 其特点是用抗原免疫动物来获得多克隆抗体 第二阶段以 1975 年 Kohler 创建杂交瘤技术制备单克隆抗体为代表 1986 年 美国 FDA 批准了世界上第一个单抗治疗性药物 抗 CD3 单抗 OKT3 进入市场 用于器官 移植时的抗排斥反应 此时单克隆抗体的研制和应用达到了顶点 第三阶段以 1994 年 Winter 以基因工程方法制备人源化抗体为代表 51 简简述基因工程述基因工程药药物的物的质质量控制要点量控制要点 答 答 1 蛋白质含量的测定 2 蛋白质纯度检测 3 蛋白 质 Mr 测定 4 蛋白质等电点测定 5 蛋白质序列分析 6 内毒素分析 宿主蛋白液和酸残留分析 52 简简述生物述生物药药物的用途物的用途 答 答 1 作为治疗药物 作为治疗药物 2 作为预防药物作为预防药物 3 作为诊断药物 作为诊断药物 4 用作其他生物医药用品 用作其他生物医药用品 53 简简述述单单克隆抗体克隆抗体经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌单一抗原表位的特异性抗体 是 单克隆抗体 单抗的制作过程大体分为抗原的制备 动物的免疫 b 细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂 交瘤细胞 筛选杂交瘤细胞 筛选能产生某种特异性单抗的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞的克隆化 体 外大规模培养或动物腹腔培养特异性杂交瘤细胞克隆 单抗的纯化及鉴定 54 简简述基因工程制述基因工程制药药的主要步的主要步骤骤 基因工程药物制造的主要步骤是 目的基因的获得 构建 DNA 重组体 构建工程菌 目的基因的表达 产物的分离纯化 产品的检验 55 比比较较蛋白和多蛋白和多肽药肽药物的差异 并分物的差异 并分别别列列举举三个多三个多肽肽和蛋白和蛋白质药质药物的名称和功能物的名称和功能 相对大分子蛋白或抗体类 多肽在常温下却更稳定 用量更少 单位活性也更高 与大分子蛋白相 比 多肽化学合成技术成熟 多肽容易与杂质或副产品分离 重组蛋白的质量 纯度和产量都难以 保证 重组蛋白也不能引人非天 然氨基酸 不能在末端酰胺化 同时生产周期长 成本高 多肽一 般比蛋白抗体类药物成本低 但比很多小分子药 物的合成成本高 多肽药物 格拉替雷 用于治疗多发性硬化症 兰瑞肽 伐普肽 巾白瑞肽 somatoprim 和司 格列肽等 用于治疗胃肠胰内分泌肿瘤 肢端肥大症等多种相关疾病 蛋白药物 重组人胰岛素 用于治疗糖尿病 重组人促红细胞生成素 用于治疗贫血 重组人甲状 旁腺激素 用于治疗骨质疏松症 56 如何控制基因工程如何控制基因工程药药物物质质量 量 基因工程药物的质量控制要点如下 1 蛋白质含量的测定 2 蛋白质纯度检测 3 蛋白质 Mr 测定 4 蛋白质等电点测定 5 蛋白质序列分析 6 内毒素分析 宿主蛋白液和酸残留分析 57 什么是什么是单单克隆抗体 克隆抗体 简简述制述制备过备过程 程 答 答 经筛选和克隆化的杂交瘤细胞仅能合成及分泌单 一抗原表位的特异性抗体 是单克隆抗体 单抗的制作过程大体分为抗原的制备 动物的免疫 b 细胞与骨髓瘤细胞 融合形成杂交瘤细胞 筛选杂交瘤细胞 筛选能产生某种特异性单抗的杂交瘤细 胞 杂交瘤细胞的克隆化 体外大规模培养或动物腹腔培养特异性杂交瘤细胞克隆 单抗的纯化及 鉴定 58 比比较较基因工程疫苗和基因工程疫苗和传统传统疫苗 疫苗 答 答 基因工程疫苗 1 免疫原性良好 效果持久及交叉 免疫防护 2 可精细设计 便于操作 制备简便 3 能制备联合疫苗 4 能重复利用 5 可用于免疫治疗 虽然基因工程疫苗拥有传统疫苗所没有的优越性 但是目前还存在一 下不足与缺点 1 安全性尚不稳定 2 免疫效果有待提高 3 抗核酸免疫反应 59 基因工程制基因工程制药过药过程中阳性克隆的程中阳性克隆的筛选筛选方法有哪些 方法有哪些 1 根据重组子遗传重组表型改变的筛 选法 包括利用抗生素抗性基因进行筛选 通过 互补使菌产生颜色来筛选 利用报告基因筛选克隆子 2 根据重组子结构特征的筛选法 包 括琼脂糖凝胶电泳比较重组 DNA 的大小 限制性内切酶分析 印迹杂交方法 PCR 法和 DNA 的序列 分析 根据表达产物采用免疫化学方法筛选 60 何何谓谓治治疗疗性疫苗 比性疫苗 比较较治治疗疗性疫苗和性疫苗和预预防性疫苗的区防性疫苗的区别别 治疗性疫苗是指在已感染病原微 生物或已患有某些疾病的机体中 通过诱导特异性的免疫应答 达到治疗或防止疾病恶化的天然 人工合成或用基因重组技术 表达的产品或制品 治疗性疫苗与预防性疫苗的主要区别是 一 预防 性疫苗主要作用于未感染机体 而治疗性疫苗的作用对象作为曾经感染的病原体 二 治疗性 疫苗 能打破机体的免疫耐受状态 预防性疫苗可通过实验室进行监测 结果可靠 而预防性疫苗可能有 一定的不良反应伴有不同程度免疫损伤较为复杂且其准确性尚 有争议激发免疫应答的类型不同 61 综综合分析合分析生物生物药药物和化学物和化学药药物的差异物的差异 以及 以及这这些差异些差异对药对药物的治物的治疗领疗领域和域和给药类给药类型的型的 影响影响 小分子化学药通常是化学合成的 而大分子生物药则通常是生物合成的 源头的不同就直接造成两 者在结构 成分 生产方法和设备 知识产权 配方 保存方法 剂量 监管方式以及销售方式均 有不同 与合成的小分子化学药相比 生物药在分子大小上要大一百至上千倍 比如抗体药分子量高达 15 万 道尔顿 而化学药通常不到 1000 道尔顿 有报道将小分子化学药的大小比作一辆自行车 而生物 药的个头则相当于一架飞机 其实两者的区别不仅仅是分子大小的差别 更重要的是 生物药的分 子结构要远比化学药复杂 相似还是仿制 由于生物药具有更大的分子量和复杂的结构 生物药的表征面临很大挑战 但由于上述特点 即使 目前全世界最先进的仪器设备全用上 也不可能将生物药的结构等特性完全表征清楚 这些特点也 注定生物仿制药不可能完全和原研药一模一样 即使是同一家公司生产的同一种生物药 不同批次 也会有差异 即使是同一批次 在储存 流通的过程中 生物药 尤其是蛋白类药物 的结构和活 性也不可避免地会有所变化 对于生物仿制药生产商而言 由于知识产权保护等多种原因 原研药公司所采用的生产工艺甚至是 所采用的细胞系都会不清楚 这就更导致生物仿制药与原研药不会一样 另外 对于生物药而言 其生产及流通过程更加复杂 要求也更高 有许多步骤 细胞培养的条件 温度和营养 产品的 加工 纯化 储存和包装等各个环节都会影响产品的生产 整个过程中的微小差别都可能会对最终 产品的质量 纯度 生物特性以及临床效果产生较大影响 正由于上述种种原因 虽然化学仿制药的英文是 generic drug 但是生物仿制药并非是 biogeneric 而是 biosimilar 因为生物仿制药只可能与原研药 相似 similar 绝不可 能一样 正是由于这个原因 中国有业内人士认为 biosimilar 应该被译为生物相似药 而非生物 仿制药 而对于传统的小分子化学药而言 一般都有非常确定而且稳定的化学结构 现有的分析方法 比如 红外 核磁共振 X 射线衍射 质谱等 足以将其化学结构完全搞清楚 总的来说 生物药的生产 对于其生产条件的要求远比化学药苛刻 当然生产成本也更高 而且生物药的临床前和临床阶段的 研发成本也更高 监管差别 基于此 监管机构 尤其在欧美 要求生物仿制药生产商提供足够的临床数据 这也导致生物仿制 药在获批上市前的仿制成本往往比化学药高上百倍 也正是由于生物仿制药高昂的仿制成本和生产 成本 一般生物仿制药和原研药相比 只能降价 10 30 而化学仿制药则可高达 80 甚至更高 所以 化学原研药一旦专利过期 就会受到仿制药的猛烈冲击 而化学仿制药也会很快抢占市场 生物原研药则在专利过期后 其销量受仿制药的影响较小 生物药和化学药的另外一个重要区别是 它们的免疫原性 几乎所有的治疗性蛋白都会在人体内产生抗体 它们会通过中和内源性因子而降 低活力甚至诱发严重的副作用 上市后的监管同样有区别 化学仿制药由于和原研药结构相同 且结构简单 欧美监管机构允许自 动替换政策 即药剂师可以自主用化学仿制药替换原研药 无须通知开处方的医生 而对于生物 仿制药 欧盟法规明确要求不允许自动替换 尽管美国目前还没有明确要求 但是目前看 以后的 政策有可能向欧盟靠近 这对于有志于进军生物仿制药的企业而言 也是一个潜在的风险 所以 相较于化学药 更加复杂并且通常也更加昂贵的生物药推向市场也面临更大的挑战 尤其是 对于低收入水平的发展中国家而言 尽管目前在我国 本土生物药 如干扰素 生长因子等 在总 的药物市场所占比例较小 而在欧美获批的创新生物药数量近几年基本占获批新药总量的三成以上 由于生物药价格一般更高 生物药的市场份额在全球不断快速上升 2011 年约占 16 62 阐阐述述鼠源性鼠源性单单克隆抗体改造后的小分子抗体克隆抗体改造后的小分子抗体类类型和型和应应用用 1 人 鼠嵌合抗体 将鼠 MAb 的可变区和人抗体的恒定区组成嵌合抗体由于这两部分在空间结构 上相对独 立 其独特的抗体亲和力保持得很好 但因鼠单抗可变区的存在 应用时仍有 较强的排斥反应 2 改形抗体 在嵌合抗体的基础上进一步将鼠 MAb 可变区中相对 保守的 FR 替换成人的 FR 保留与抗原结合的 CDR 部位 3 Fab 抗体 Fab 段由重链 V 区及 CH1 功能区与整个轻链以二硫键形式连接而成 主要发挥抗体的抗原结合功能 Fab 抗体只有完整 IgG 的 1 3 4 单链抗体 单链抗体 Single chain Fv scFv 是由一段弹性连接肽 Linker 把抗体可变区重链 VH 与轻链 VL 相连而成 是具有亲代 抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位 5 单域抗体 只含 V 区基因片段的小 分子抗体 即只有 VH 或 VL 一个功能结构域 也能保持原单克隆抗体的特异性 这种小分 子的抗体片段就称为单域或单区抗体 其分子量仅为整个 Ig 分子的 1 12 6 分子 识别单位 只含有一个 CDR 多肽的抗体 63 治疗性酶的临床使用范围 治疗性酶的临床使用范围 1 助消化的治疗酶类 2 消化酶可以用于补充内源消化酶的不足 促进食物中蛋白质 脂肪 糖类的消化吸收 治 疗消化器官疾病和由其他各种原因所致的食欲不振 消化不良 3 2 心血管疾病治疗酶类 4 心血管疾病治疗酶类是能够作用于血液循环系统的酶 临床上具有独特的抗凝 止血 扩展血管等功能 弹性蛋白酶能够降低血脂 用于防治动脉粥样硬化 5 3 抗肿痛治疗酶类 6 抗肿瘤的治疗酶类 如 L 门冬酰胺酶 是从大肠杆菌发酵液中提取的 是世界上第一个 治疗癌症的酶 是令人瞩目的抗白血病药物 临床上用于治疗淋巴白血病和急性粒细 胞白血病 7 4 其他治疗酶类 8 超氧化物歧化酶 SOD 用于治疗类风湿性关节炎和放射病 PEG 腺苷脱氨酶 PEG Adenase Bovine 用于治疗严重的联合免疫缺陷症 DNA 酶和 RNA 酶可以降低痰液 的黏度 用于治疗慢性支气管炎 细胞色素 C 用于组织缺氧急救 透明质酸酶用于药 物扩散剂 青霉素酶可以用于治疗青霉素过敏 64 简述生物技术药物质量控制特点简述生物技术药物质量控制特点 1 结构确认的不完全性 生物技术药物多数为蛋白质或多肽及其修饰物 具有分子量相对较大 结构复杂多样性和可变 性等特点 通过现有的理化方法和手段不能完全确认其化学结构特征 如产品的空间构象等 2 质量控制的过程性 生物技术药物的结构特性容易受到各种理化因素的影响 且分离提纯工艺复杂 因此其质量控 制体系是针对生产全过程 采用化学 物理和生物学等手段而进行的全程 实时的质量控制 生产过程中每一环节或制备条件的改变均可能影响其非临床安全性评价的合理性 3 生物活性检测的重要性 生物技术药物的生物活性与其药效和毒性有一定或较好的相关性 因此药效学和安全性研究应 关注生物活性的测定 鉴于生物技术药物结构确认的不完全性 生物活性检测成为反映生物技 术药物天然结构是否遭受破坏 生产各阶段工艺合理性和评价终产品质量控制的重要内容 也 成为非临床药理毒理 药代等试验方案中剂量确定的依据 65 基因工程中的载体应满足什么条件基因工程中的载体应满足什么条件 1 能自我复制并能带动插入的外源基因一起复制 2 载体分子的合适位置上必须有外 源 DNA 插入的位点 即克隆位点 这些位点也就是限制性内切酶的切点 在载体上单一的限制 性内切酶位点越多越好 这样可以将不同限制性内切酶切割后的外源 DNA 方便的插入载体 3 具有合适的筛选标记 如抗药性基因等 以便进行重组体筛选和鉴定 4 在细胞 内稳定性高且多拷贝 这样可以保证重组体稳定且高效传代而不易丢失 66 单克隆抗体的优点单克隆抗体的优点 与常规抗体相比 单克隆抗体具有以下优点 McAb 为高纯度单一抗体 在氨基酸序列以及 特异性方面均为一致 检测灵敏度极高 可以通过杂交瘤细胞的大规模培养进行生产 杂 交瘤细胞可以用液氮深冻法进行长期保存 可在分子水平上解析存在于病毒表面的抗原或受 体 可以用不纯的抗原制备纯的 McAb 但 McAb 也存在一些缺点 McAb 特异性太强 有 时不能检出微生物突变株 有时不能产生与抗原交联的功能 易受 pH 温度及盐浓度的影 响 或亲和力较低 半衰期短 McAb 制备程序复杂 工作量大 因此 可以采用常规抗体 解决的问题就无须制备 McAb 67 临床前安全性评价的一般原则临床前安全性评价的一般原则 1 常规研究的适用性 鉴于生物技术药物结构和生物学性质的专一性和多样性 包括种属特异性 免疫原性和无法预 料的多种组织亲和性等 常规的药物毒性试验的研究思路 包括研究步骤 考察项目等 可能 不一定完全适合生物技术药物 2 具体品种具体分析 应根据具体生物技术药物的立题设计 包括药物设计思路 作用机制 分子结构特点 创新性 程度和特点等 质量控制 非临床安全性和临床特点 临床适应症的性质和用药人群 临床 拟用药剂量 是否已有较多人用经验 预期重要临床不良反应等 和注册法规中治疗用生物技 术药物注册分类及申报资料项目要求 其它相关技术指导原则等来对上述内容进行具体问题具 体分析 对于那些在结构和药理作用上与已有大量临床经验的产品类似的生物技术药物 可酌 情减少毒性试验 3 良好的试验管理规范 GLP 毒性试验条件应符合 GLP 要求 若不符合 GLP 条件 应阐明其对于总体安全性评价的影响 68 多肽蛋白药物的优势和缺点多肽蛋白药物的优势和缺点 肽类药物多数源于内源性肽或其他天然肽 因此 其结构清楚 作用机制明确 与多数一般有 机小分子药物相比 肽类药物具有活性高 用药剂量小 毒副作用低 代谢终产物为氨基酸等 突出特点 与蛋白类相比 较小的肽几乎没有免疫原性 可化学合成 产品纯度高 质量可控 其缺点在于 易降解 半衰期较短 生物利用度差 大多不能口服 一般为注射剂 需要研发 适当的给药方式 大规模合成 分离纯化难度大 大肽具有免疫原性 69 生物技术药物质量标准的研究内容主要包括生物技术药物质量标准的研究内容主要包括 1 研究生物技术药物产品的均一性 2 研究建立生物技术药物产品生物学活性或者免疫学活性测定方法 3 研究建立生物技术药物产品的国家标准品或参考品 4 建立生物技术药物目标产品生产相关杂质限量分析方法和标准 5 在以上研究的基础上制定出保证上述生物技术药物产品安全有效并与 WHO 标准相一致的 质量控制标准和药物分析方法 70 单克隆抗体原理单克隆抗体原理 体内不同克隆的 B 淋巴细胞可合成不同特异性的免疫球蛋白 当机体受到抗原剌激后 抗原表 面的抗原决定簇被携带有相应 BCR 的 B 细胞克隆识别 在 Th 细胞的辅助下 该 B 细胞活化 增殖 分化为浆细胞 分泌针对同一抗原决定族的 抗体 由于这一抗体是由来源于同一 B 细 胞克隆产生的 只能识别单一抗原决定 簇 因此称为单克隆抗体 两个或两个以上不同特性的细胞借助物理或化学手段融合在一起 形成杂交细胞 杂交细胞同 时具有两种亲本细胞的基因和特性 经抗原免疫的小鼠脾细胞 含有大量 B 细胞 能分泌特定 抗体 但在体外不能长期存活 而小鼠骨髓瘤细胞在体外可无限增殖 但不能分泌抗体 用一 个骨髓瘤细胞和一个具有分泌抗体能 力的 B 淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞 这种杂交瘤细胞 既具有骨髓瘤细胞无限 增殖的特性 又具有免疫 B 细胞合成和分泌抗体的能力 由杂交瘤细 胞无性繁殖 形成的细胞系分泌的单克隆抗体分子在结构 活性 亲和力等方面均相同 具有高 度的均一性 71 基因工程小鼠制备人全抗体的优缺点基因工程小鼠制备人全抗体的优缺点 转基因小鼠 将人抗体生产基因转入小鼠 以替换小鼠的抗体生成基因 转基因小鼠制备人抗 体的优点是 其功效优于其它生产抗人体蛋白单抗技术 不足之处 1 转基因通常有体细胞 突变和其它独特的序列 导致不十分完全的人序列 2 由于抗体是在小鼠体内装配 因而产 生的单抗具有鼠糖基化模式 所以这些单抗最终并不是全人的 3 转基因小鼠表达的人 Ig 多 样性较少 而且在同一小鼠中不能够产生 IgG 各亚类 72 简述发酵工程中的菌种选育简述发酵工程中的菌种选育 菌种选育是按照生产的要求 以微生物遗传变异理论为依据 采用人工方法使菌种发生变异 再用各种筛选方法筛选出符合要求的目的菌种 菌种选育的目的包括改善菌种的基本特性 以 提高产量 改进质量 降低成本 改进工艺等 选育菌种的基本方法包括自然选育 诱变选育 代谢工程育种 基因定向育种 基因组改组等一系列方法 73 生物药物质量控制中的安全性检测项目包括生物药物质量控制中的安全性检测项目包括 1 无菌试验 按照中国药典进行 注射用制品无菌试验有平皿法和滤膜法 口服和外用制剂检查项目还包括 需氧菌 厌氧菌 霉菌和支原体 2 热原试验 热原试验一般采用家兔法 每只家兔耳沿静脉注射人用最大量的 3 倍量药物 判断标准为每只 家兔体温升高不得超过 0 6 3 只总和不超过 1 6 对生物活性比较高的细胞因子产品可 以考虑用内毒素检测替代家兔热原试验 3 异常毒性试验 主要检查生产工艺中是否含有目标产品以外的有毒物质 具体方法参考中国药典 常用动物为 小鼠和豚鼠 注射剂量分别是小鼠 1ml 和豚鼠 5ml 由于大多数重组产品本身有很强的生物活 性 注射量过大会导致药物本身的生物活性引起毒性反应 因此不同重组产品 剂量选择和注 射途径要根据各自的生物学活性来确定 1 无菌试验 按照中国药典进行 注射用制品无菌试验有平皿法和滤膜法 口服和外用制剂检查项目还包括 需氧菌 厌氧菌 霉菌和支原体 2 热原试验 热原试验一般采用家兔法 每只家兔耳沿静脉注射人用最大量的 3 倍量药物 判断标准为每只 家兔体温升高不得超过 0 6 3 只总和不超过 1 6 对生物活性比较高的细胞因子产品可 以考虑用内毒素检测替代家兔热原试验 3 异常毒性试验 主要检查生产工艺中是否含有目标产品以外的有毒物质 具体方法参考中国药典 常用动物为 小鼠和豚鼠 注射剂量分别是小鼠 1ml 和豚鼠 5ml 由于大多数重组产品本身有很强的生物活 性 注射量过大会导致药物本身的生物活性引起毒性反应 因此不同重组产品 剂量选择和注 射途径要根据各自的生物学活性来确定 74 目前主要用来制备人源单克隆抗体的两种方法目前主要用来制备人源单克隆抗体的两种方法 一 噬菌体抗体库 噬菌体抗体库技术是噬菌体表面展示技术在基因工程抗体应用上的一个成功范例 它可以模拟 体内 B 淋巴细胞受到刺激后分化 成熟直至分泌抗体的过程 通过噬菌体表面展示技术 可将 目的蛋白或多肽的编码基因与编码 M13 噬菌体颗粒末端蛋白的基因 构建成融合基因 将含有 融合基因的重组 M13 噬菌体转染大肠杆菌 可以在噬菌体颗粒表面展示目的蛋白 通过基因重 组技术 将全套人抗体重链和轻链的 V 区基因与 M13 噬菌休基因 构建成融合基因 在噬菌体 表面以抗体 Fv 片段 末端蛋白融合蛋白的形式表达 表达这些融合蛋内的噬菌体群体就构成了 噬菌体抗体库 phage antibody library 通过免疫法筛选 可从中得到针对某一抗原 的人抗体 Fv 编码基因 利用噬菌休抗体库 不需要杂交瘤细胞就可得到目的单克降抗休的编 码基因 而且是人源性的 从理论上讲 噬菌体抗体库具有 B 细胞所编码的全部抗体信息 从 抗体库中可筛选到任何一种抗体 出于该抗体