SDS尿蛋白及本周氏电泳的意义

SDS尿蛋白电泳,王连升法国Sebia公司上海代表处,肾病的现状,肾单位的生理结构和各类生理蛋白,尿里的蛋白,尿蛋白含量增加的原因,间歇性的 生理因素 ：食高蛋白饮食后，精神激动、剧烈运动、长时间受 寒，站立过久, 病理性的：,溢出性蛋白尿,血浆中相对分子质量较小或阳性电荷蛋白异常增多经肾小球滤过，超过肾小管重吸收能力形成蛋白尿。肾小球滤过、肾小管重吸收均正常。,7,常见蛋白种类及疾病 游离轻链 见于多发性骨髓瘤 2微球蛋白 见于淋巴组织增生综合征 溶菌酶 见于部分急性粒细胞白血病 血红蛋白 溶血性疾病,血型不合输血 1酸性糖蛋白 见于支气管肺癌 肌红蛋白 挤压伤,心肌梗死,肾前性(溢出)蛋白尿,肾后性蛋白尿,来源于肾小管代谢产生的、组织破坏分解的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质，进入尿液而形成的蛋白尿。,肾性蛋白尿,肾小球性蛋白尿 肾小球滤过膜因炎症、免疫、代谢等因素损伤后滤过膜孔径增大、断裂和（或）静电屏障作用减弱。 根据滤过膜损伤程度及尿蛋白的组分，尿蛋白分为2类： （1）选择性蛋白尿（selective proteinuria）：相对分子质量中等的清蛋白为主 （2）非选择性蛋白尿（non-selective proteinuria）：以相对分子质量较大和中等的蛋白质同时存在为主。反映肾小球毛细管壁有严重断裂和损伤。肾小管性蛋白尿 肾小管在受到感染、中毒损伤或继发于肾小球疾病时，因重吸收能力降低或抑制，而出现的以相对分子质量较小的蛋白为主的蛋白尿。,肾小球过滤,大分子量蛋白（主要为67kDa）无法透过肾小球进入肾小管其他决定各种蛋白被过滤的因素 : 分析形状, 带电量, 血浆浓度.还有一些血液动力学因素可影响蛋白的过滤.,肾小球损伤,原因糖尿病感染性损伤 (细菌感染, 乙肝患者, 水痘, 梅毒, 单核白血球增多症 ,) 其他系统性疾病 (自动免疫系统, 癌症,)中毒现象 (重金属, 药物中毒,)此时, 我们可以在尿蛋白中发现白蛋白和其他大分子量蛋白 (大于 67kDa)。,肾小管的再次吸收功能,在肾小球中被过滤掉的小分子蛋白， 分子量小于67kDa, 将会在肾小管内被重新吸收 (内吞作用).99% 的在肾小球内被过滤的蛋白, 都将会被重新吸收利用. 例如, 18g/24-h 白蛋白将会被过滤掉; 30mg/24-h 白蛋白在人的尿液中被发现.,肾小管损伤,肾小管损伤将会改变其对小蛋白分子的重新吸收能力 (小于67kDa的蛋白)产生原因遗传原因 (Fanconi syndrome)代谢性疾病 (糖尿病, 草酸中毒) 免疫球蛋白单克隆扩增(myeloma, Waldenstrm)药物作用(氨基甙类抗生素 )中毒 (金属中毒,氨基甙类)白蛋白 ( 150 - 200 mg/L ):蛋白尿阳性变蓝，本周氏蛋白时会产生假阴性定量检测方法 - 比浊法（不建议使用）- 建议采用比色法（焦性没食子酚红，考马斯蓝）,尿中总蛋白的定量分析无法检测到低浓度的本周氏蛋白,特异蛋白测定,免疫法定量测定肾小球性标志蛋白:Albumin, IgG, Transferrin肾小管性标志蛋白:b 2 microglobulin, RBP, a1 microglobulin如果需要更多的特异蛋白信息，需要更多的测试,尿蛋白电泳提供更全面的蛋白信息,a2-巨球蛋白 (MW :900 kDa),注 : (Cystatin C),血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,5 PROTEINURIE,14.3 KDa,26.6 KDa,150 KDa,67 KDa,肾小球性蛋白尿,血清,Glomerular proteins ( 67kDa)肾小球性蛋白,肾小管性蛋白尿,Ser,Ser,Tubular proteins肾小管性蛋白 ( 67kDa),临床病例,2 : Light chain myeloma轻链性骨髓瘤4 : Macroscopic Hematuria肉眼血尿,MW,5: Overload Proteinuriawith polymerised BJ 本周氏蛋白多聚体,非浓缩尿蛋白电泳的优点,本周氏Bence-Jones蛋白检测,本周氏蛋白（Bence-Jones Proteins,BJP),Henry Bence Jones 于1844年在一个骨髓瘤患者尿中发现的一种具有特殊凝溶性质的蛋白该种蛋白4060发生沉淀，加热煮沸时溶解，冷却后又沉淀。后被证明是单克隆的免疫球蛋白轻链二聚体。大多数骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白,本周氏蛋白,浆细胞增生症,影响,血液中出现游离轻链,尿液中出现,起因,结果,骨髓瘤巨球蛋白血症CLL慢性白血病MGUS.,肾小管损伤淀粉样病变轻链沉淀病,本周氏蛋白阳性患者,多表现为肾脏损害极易误诊为慢性肾炎轻链有3种形式出现在血清或尿中正常的轻链过剩 慢性肝病、红斑狼疮等多克隆增殖性疾病伴随轻链单一轻链,本周氏蛋白免疫固定电泳方法,仪器： Sebia 琼脂糖凝胶电泳仪试剂：本周氏蛋白电泳试剂 方法： 点样，电泳，加抗体反应， 条带检测,ELP 泳道: 固定液GAM 泳道： 抗IgG .A.M重链抗血清K 泳道： 抗 轻链抗血清L 泳道： 抗 轻链抗血清Kfree 泳道： 抗游离 轻链抗血清L free 泳道： 抗 游离轻链抗血清,免疫球蛋白,免疫球蛋白是机体的正常生理成分多克隆分类重链：IgG、IgA、IgM 、 IgD、IgE轻链：、10种类型,抗复合轻链抗血清结合位置,抗游离轻链抗血清结合位置，不能与完整抗体的轻链结合,本周氏蛋白检测结果解析,游离kappa复合kappa,游离lambda,Lambda Bence Jones protein,(G, A or M) kappa kappa Bence Jones2 different levels of polymerization,Bence Jones suspectedNo Bence Jones suspectedBence Jones suspectedBences Jones suspected,BenceJones?,Bence Jones lambda (polymerized)No Bence Jones Bence