细菌总数测定(精).doc

菌落总数测定（一）实验材料1.仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。2.培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、平板计数琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.00.2 3.待检样：利乐包装鲜牛奶250mL（二）实验方法与步骤1.检验程序菌落总数检验程序：检样做成几个适当倍数的稀释液选择3个适宜稀释度各以1mL之量分别入灭菌平皿内每皿内加入4615-20mL营养琼脂置361恒温箱内培养（482）h取出 菌落数报告2.检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25mL鲜牛奶，放于含有225mL灭菌生理盐水的500mL灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1:10的均匀稀释液。（2）用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1:100的稀释液。（3）另取1mL的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、101、102，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46营养琼脂培养基注入平皿15mL20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将平板计数琼脂培养基倾入加有1mL稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置361恒温箱内培养（482）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。 （三）检样中细菌菌落总数的计算与报告1.菌落计算方法（1）菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。（2）菌落计数的报告平板菌落数的选择选取菌落数在30300 CFU之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，稀释度的选择应选择平均菌落数在30300 CFU之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30300之间， 按以下公式计算：式中：N = 样品中菌落数C = 含适宜范围CFU的平板菌落数之和n1 = 第一稀释度（低稀释度）平板个数n2 = 第二稀释度（高稀释度）平板个数d = 稀释因子（第一稀释度） 若所有稀释度的平均菌落数均大于300 CFU，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之，若所有稀释度的平均菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告若所有稀释度及样品原液均无菌落生长，则以小于l乘以最低稀释倍数报告之，若所有稀释度的平均菌落数均不在30300 CFU之间，其中一部分大于300 CFU或小于30 CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。菌落数的报告菌落数小于100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。菌落数大于或等于100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。（四）实验报告平皿菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板的平均菌落总数。将各