反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸

分分 析析 化化 学学 实实 验验 报报 告告 实 验 名 称 反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸 专 业 化学教育 班 级 11 化学班 姓 名 指 导 教 师 郭老师 日 期 2013 9 7 一 实验目的一 实验目的 1 学习高效液相色谱仪的操作 2 了解高效液相色谱法测定苯甲酸的基本原理 3 掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法 一 实验原理实验原理 苯甲酸为具有苯或甲醛的气味的鳞片状或针状结晶 具有苯或甲醛的臭味 熔点 122 13 沸点 249 相对密度 1 2659 15 4 在 100 时迅速升华 它的蒸气有很 强的刺激性 吸入后易引起咳嗽 微溶于水 易溶于乙醇 乙醚等有机溶剂 苯甲酸是 弱酸 比脂肪酸强 苯甲酸是重要的酸型食品防腐剂 在酸性条件下 对霉菌 酵母和 细菌均有抑制作用 但对产酸菌作用较弱 抑菌的最适 pH 值为 2 5 4 0 一般以低于 pH 值 4 5 5 0 为宜 在食品工业用塑料桶装浓缩果蔬汁 最大使用量不得超过 2 0g kg 在 果酱 不包括罐头 果汁 味 型饮料 酱油 食醋中最大使用量 1 0g kg 在软糖 葡萄 酒 果酒中最大使用量 0 8g kg 在低盐酱菜 酱类 蜜饯 最大使用量 0 5g kg 在碳酸 饮料中最大使用量 0 2g kg 用高效液相色谱法将饮料中的苯甲酸与其它组分 如 柠檬酸 钠 蔗糖等 分离后 将已配制的浓度不同的苯甲酸标准溶液进入色谱系统 如流动相流速和泵的压力在整个实 验过程中是恒定的 测定它们在色谱图上的保留时间 tR和峰面积 A 后 可直接用 tR定性 用峰面积 A 作为定量测定的参数 采用工作曲线法 即外标法 测定饮料中的苯甲酸含量 三 仪器和试剂三 仪器和试剂 1 Agilent 1220 高效液相色谱仪 2 色谱柱 Kromasil C18 5 150 4 6mm 3 流动相 75 甲醇 色谱纯 25 PH 3 3 的磷酸缓冲溶液 过三次 4 苯甲酸标准贮备溶液 准确称取 0 0109g 含量 99 5 苯甲酸 用过三次的蒸馏水 溶解 定量至 50mL 容量瓶中 并稀释至刻度 标样浓度 217 g mL 1 4 测饮料试液 雪碧 四 四 实验内容实验内容 1 将标准贮备液分别稀释为 0 434 0 868 2 17 4 34 8 68 21 7 43 4 g mL 1的 标准系列溶液 并贴上标签 稀释为 50mL 2 谱仪器条件 泵的流速 1 0mL min 检测波长 254nm 进样量 20 L 柱温 室温 3 仪器基线稳定后 进苯甲酸标准样 浓度由低到高 4 品处理如下 1 将约 100mL 雪碧置于一 100mL 洁净 干燥的烧杯中 用超声 波脱气 10min 以赶尽雪碧中二氧化碳 取 5mL 雪碧样品转移至 50mL 容量瓶中 用甲 醇定容至刻度 5 将雪碧样品注入 2mL 样品瓶中备用 6 Agilent 1220 高效液相色谱仪操作规程 分析饮料试液 5 结果处理 1 C 43 4 时的谱图为下图 1 图 1 2 样品谱图为下图 2 图 2 3 各浓度及数据 浓度 名称 进样量 uL保留时间峰面积峰面积 峰高峰高率 0 434202 4931 45246304 3 0 868202 4973 4311975 85 2 17202 4972 75546628 93 4 34202 4978 0315 38 8 68202 49313 0426 76 21 7202 49722 3346 57 43 4202 50037 5864 26 样品202 50732 0043 42 五 计算苯甲酸的含量五 计算苯甲酸的含量 由标准曲线可得 C A A 为样品峰面积 A 算得 C 21 725ug mL 1mL 雪碧里含苯甲酸的量为 21 725ug mL 50mL 5mL 217 25ug mL 217 25ug mL 500mL 雪碧里含苯甲酸的量为 217 25ug mL 500mL ug 0 107g 所以苯甲酸含量为 0 107g 500mL 0 107g 500g 0 214g kg 注意注意 1 若出峰时间短