选1知识点总结

海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 1 2013 选修选修 1 生物技术实践生物技术实践 一轮复习知识梳理一轮复习知识梳理 专题专题 1 传统发酵技术的应用传统发酵技术的应用 课题课题 1 果酒和果醋和制作果酒和果醋和制作 补充知识补充知识 发酵发酵 1 概念 利用微生物或其他生物的细胞在有氧或无氧条件下繁殖或积累其代谢产物的过程 2 传统发酵技术 都是采用自然发酵的工艺 如 传统的葡萄酒酿造 就是葡萄破碎入罐以后 不人为地添加任何菌种 靠葡萄本身携带的自然界的酵母菌 在葡萄浆或分离后的葡萄汁里自 发地繁殖 最终发酵成葡萄酒 3 类型 根据是否需要氧气分为 需氧发酵和厌氧发酵 根据产生的产物可分为 酒精发酵 乳酸发酵 醋酸发酵等 一 基础知识一 基础知识 一 果酒制作的原理 一 果酒制作的原理 果酒发酵的菌种 酵母菌 属于真核生物 酵母菌的代谢类型是 异养兼性厌氧型 有氧时 进行有氧呼吸 反应式为 C6H12O6 6H2O 6O2 6CO2 12H2O 能量 大量繁 殖 无氧时 能进行酒精发酵 反应式为 C6H12O6 2C2H5OH 2CO2 能量 酵母菌的生殖方式 出芽生殖 主要 分裂生殖 孢子生殖 酵母菌繁殖的最适温度 20 左右 酒精发酵一般控制在 18 25 传统发酵技术所使用的酵母菌的来源 主要是附着于葡萄皮上的野生型酵母菌 也可以在果汁中加入人工培养的酵母菌 注意 在发酵过程中 随着酒精浓度的提高 红葡萄皮的色素也进入发酵液 使葡萄酒呈现深红色 酒精发酵过程中 要保持缺氧 酸性环境 在缺氧 呈酸性的发酵液中 酵母菌可以生长繁殖 而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约 酒精发酵过程中 要 先通气后密封先通气后密封 通气 的目的是使酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖使酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖 密封 的目的是使酵母菌进行无氧呼吸产生酒精使酵母菌进行无氧呼吸产生酒精 二 果醋制作的原理 二 果醋制作的原理 菌种是醋酸菌 属于原核生物 醋酸菌的代谢类型为异养需氧型 有两条途径生成醋酸 直接氧化和以酒精为底物的氧化 当氧气 糖源都充足时 醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸 当缺少糖源时 醋酸菌将乙醇变为乙醛 再将乙醛变为醋酸 反应简式为 C2H5OH O2 CH3COOH H2O 醋酸菌的生殖方式 生殖方式为二分裂 醋酸菌最适生长温度为 30 35 菌种来源 到生产食醋的工厂或菌种保藏中心购买 或从食醋中分离醋酸菌 注意 醋酸菌对氧气的含量特别敏感 当进行深层发酵时 即使只是短时间中断通入氧气 也会引起醋酸菌 酶酶 酶酶 酶酶 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 2 死亡 只有在氧气充足时 才能进行旺盛的生命活动 变酸的酒表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面大 量繁殖形成的 醋酸菌最适生长温度为 30 35 控制好发酵温度 使发酵时间缩短 又减少杂菌污染的机会 二 实验设计二 实验设计 1 流程图 流程图 挑选葡萄 冲洗 榨汁 酒精发酵 醋酸发酵 果酒 果醋 充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的 使用该装置制酒时 应该关闭 充气口 制醋时 应将充气口连接气泵 输入氧气 排气口是在酒精发酵时用来排出 CO2的 排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶 身连接 其目的是防止空气中微生物的污染 其作用类似巴斯德的鹅颈瓶 出料口是用来取样的 2 制作实例 制作实例 实验材料实验材料 葡萄 榨汁机 纱布 醋酸菌 或醋曲 发酵瓶 如右图 气泵 体积分数为 70 的酒精等 实验步骤实验步骤 1 对发酵瓶 纱布 榨汁机等实验用具进行清洗并消毒 榨汁机要清洗干净 并晾干 发酵瓶 要清洗干净 用体积分数为 70 的酒精消毒 晾干待用 2 取葡萄 500g 新鲜的葡萄 3 用清水冲洗葡萄 1 2 遍除去污物 注意不要反复多次冲洗 榨汁前应该先冲洗 然后再除去枝梗 以避免除去枝梗时引起葡萄破损 增加被杂菌污 染的机会 4 用榨汁机榨取葡萄汁后 将其装入发酵瓶中 如果没有合适的发酵装置 可用 500mL 的塑料瓶替代 但注入的果汁量不要超过塑料瓶总体积的 2 3 要留出大约 1 3 的空间 装 入葡萄汁后 封闭充气口 5 将发酵瓶置于适宜的温度 18 25 下发酵 6 由于发酵旺盛期 CO2的产量非常多 因此需要及时排气 以防止发酵瓶爆裂 如果是简易发酵装置 每天拧松瓶盖 2 4 次 进行排气 7 10 天后 10 12d 左右 取样检验 例如 可以检验酒味 酒精的含量 进行酵母菌的镜检等工作 果汁发酵后是否有酒精产生 可以用重铬酸钾来检验 在酸性条件下 重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色 检测时 先在试管中加入发酵液 2mL 再滴入物质的量的浓度为 3mol L 的 H2SO43 滴 振荡混匀 最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液 3 滴 振荡试管 观察颜色 8 当果酒制成以后 可在发酵液中加入醋酸菌 或醋曲 然后移至 30 35 条件下发酵 时间控制 在 7 8d 左右 适时用气泵向发酵液中充气 如果没有充气装置 可以将瓶盖打开 在瓶口上盖上纱布 以减少空气中尘土等的污染 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 3 注意 应该从发酵制作的过程进行全面的考虑防止发酵液被污染 如 榨汁机 发酵装置要清洗干净 每次 排气时只需拧松瓶盖 不要完全揭开瓶盖等 制葡萄酒时 温度控制在 18 25 发 温度是酵母菌生长和发酵的重要条件 20 左右最适合酵母菌 繁殖 因此需要将温度控制在其最适温度范围内 制葡萄醋时 要将温度控制在 30 35 醋酸菌是 嗜温菌 最适生长温度为 30 35 因此要将温度控制在 30 35 制葡萄醋时 醋酸菌是好氧菌 在将酒精变为醋酸时需要氧的参与 因此要适时向发酵液中充气 二 练习 二 练习 2 提示 大规模生产时需要进行更为全面周详的考虑 如原料的来源与选择 菌种的培育与选择 发酵的 设备 发酵条件的自动化控制 以及如何严格控制杂菌污染 等等 此外 无论是葡萄酒或葡萄醋 实 验时所检测的发酵液 并非商品意义上的产品 在实际生产中还需沉淀过滤 灭菌装瓶等获得成品酒或 醋 葡萄酒还需在一定设施和条件下 如橡木桶和地窖 进行后续发酵 以获得特定的风味和色泽 3 提示 需考虑厂房 设备投资 原材料采购 工人人数及工资 产品种类 生产周期 销售渠道 利润 等问题 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 4 课题课题 2 腐乳的制作腐乳的制作 一 基础知识一 基础知识 腐乳制作的原理腐乳制作的原理 腐乳的发酵有多种微生物 如青霉 酵母 曲霉 毛霉等 的协同作用 其中起主要作用的是毛霉 它是 一种真核生物 新陈代谢类型是异养需氧型 营腐生生活 毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸 脂肪酶可以将脂肪水解 成甘油和脂肪酸 与醇类作用生成酯 形成细腻 鲜香等豆腐乳特色 与醇类作用生成酯 形成细腻 鲜香等豆腐乳特色 生殖方式是孢子生殖 发酵的温度为发酵的温度为 15 18 菌种来源 传统腐乳的生产中 豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子 现代的腐乳生产是在严 格的无菌条件下 将优良毛霉菌种直接接种在豆腐上 这样可以避免其他菌种的污染 保证产品的质量 注意注意 优良菌种的选择 不产生毒素 生长繁殖快 且抗杂菌力强 生长的温度范围大 不受季节的限优良菌种的选择 不产生毒素 生长繁殖快 且抗杂菌力强 生长的温度范围大 不受季节的限 制 有蛋白酶 脂肪酶 肽酶等酶系 使产品气味正常良好 制 有蛋白酶 脂肪酶 肽酶等酶系 使产品气味正常良好 二 实验设计二 实验设计 1 实验流程 实验流程 让豆腐长出毛霉 加盐腌制 加乳汤装瓶 密封腌制 2 制作实例 制作实例 实验材料 实验材料 含水量 70 的豆腐 粽叶 盘子 盐 黄酒 米酒 糖 香辛料等 广口玻璃瓶 高压锅等 实验步骤实验步骤 1 将豆腐切成 3cm 3cm 1cm 若干块 所用豆腐的含水量为所用豆腐的含水量为 70 左右 左右 用含水量过高的豆腐制腐乳 不易成形 且影响毛霉有氧呼吸 用含水量过高的豆腐制腐乳 不易成形 且影响毛霉有氧呼吸 用含水量过少不利于毛霉生长 毛霉生长离不开水 用含水量过少不利于毛霉生长 毛霉生长离不开水 样品水分含量 计算公式如下 烘干前容器和样品质量 烘干后容器和样品质量 烘干前样品质量 2 将豆腐块平放在铺有干粽叶的盘内 粽叶可以提供菌种 并能起到保温的作用 每块豆腐等距 离排放 周围留一定的空隙 豆腐上面再铺上干净的粽叶 气候干燥时 将平盘用保鲜膜包裹 但不要 封严 以免湿度太高 不利于毛霉的生长 3 将平盘放在温度为 15 18 的地方 毛霉逐渐生长 大约 5d 后 豆腐上生长的白毛是毛霉的 白色菌丝 严格地说是直立菌丝 在豆腐中还有匍匐菌丝 4 当毛霉生长旺盛 并呈淡黄色时 去除保鲜膜及铺在上面的粽叶 使豆腐块的热量和水分能够迅 速散失 同时散去霉味 这一过程一般持续 36h 以上 5 豆腐凉透后 将豆腐间的连在一起的菌丝拉断 并整齐排在容器内 准备腌制 6 长满毛霉的豆腐块 以下称毛坯 分层摆放 分层加盐 并随层高而增加盐量 在接近瓶口表面 盐要铺厚一些 以防止杂菌污染 约腌制 8d 豆腐与盐质量分数比为 5 1 盐的作用盐的作用 抑制微生物的生长 避免腐败变质 析出水分 是豆腐变硬 在后期制作过程中不易酥烂 调味作用 给腐乳以必要的咸味 浸提毛酶菌丝上的蛋白酶 盐的浓度过低 不足以抑制微生物的生长 可能导致豆腐腐败 盐的浓度过高 会影响腐乳的口味 注意 先发酵后加盐注意 先发酵后加盐 7 将黄酒 米酒和糖 香辛料等混合制成卤汤 卤汤酒精含量控制在 12 左右为宜 卤汤直接关系 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 5 到腐乳的色 香 味 乳汤中酒的含量应控制在 12 左右 酒精含量过低 蛋白酶的活性高 加快蛋白质的水解 而且不 足以抑制微生物生长 豆腐易腐败 难以成块 酒精含量过高 对蛋白酶的抑制作用也越大 腐乳成熟 的时间将会延长 酒的作用 防止杂菌污染以防腐 与有机酸结合形成酯 赋予腐乳风味 酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系 香辛料的作用 调味作用 不能增加营养 不能增加营养 杀菌防腐作用 参与并促进发酵过程 8 将广口玻璃瓶刷洗干净 用高压锅在 1000C 蒸汽灭菌 30min 将腐乳成坯摆入瓶中 装瓶时要迅速小 心 加入卤汤和辅料后 要用胶条将瓶口密封 封瓶时 最好将瓶口通过酒精灯的火焰 防止瓶口被污 染 在常温下 一般六个月即可以成熟 注意 酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵 前期发酵的主要作用 1 创造条件让毛霉生长 2 使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型 后期发酵主要是酶与微生物协同参与生化反应的过程 通过各种辅料与酶的缓解作用 生成腐乳的香气 注意 用来腌制腐乳的玻璃瓶 刷干净后要用沸水消毒 吃腐乳时 你会发现腐乳外部有一层致密的 皮 这层 皮 是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝 匍 匐菌丝 它能形成腐乳的 体 使腐乳成形 皮 对人体无害 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 6 课题 3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 一 泡菜制作原理一 泡菜制作原理 1 1 菌种菌种 乳酸菌 常见种类 乳酸链球菌和乳酸杆菌 代谢类型 异养厌氧型 在 无氧条件 情况下 将葡萄糖分解成乳酸 反应式为 C6H12O62C3H6O3 能量 酶 生殖方式分裂方式 二分裂 培养温度 常温常温 分布 分布广泛 空气空气 土壤 植物 土壤 植物体表体表 人或动物的肠道 人或动物的肠道 应用 常用于生产 酸奶 注意 含抗生素牛奶不能生产酸奶的原因是抗生素能杀死乳酸菌 2 腌制条件腌制条件 时间时间 温度温度 食盐的用量食盐的用量 水和盐为水和盐为 4 14 1 温度过高过高 食盐用量不足 1010 腌制时间过短过短 容易造成细菌大量繁殖 亚硝酸盐亚硝酸盐含量增加 3 3 亚硝酸盐亚硝酸盐 物理性质 白色 粉末 易溶于水 应用 在食品生产中常用作食品 添加剂 分布 自然界中分布广泛 据统计 亚硝酸盐在蔬菜中的平均含量约为 4mg kg4mg kg 咸菜中平均含量在 7mg k7mg k 以上 而豆粉中的平均含量可达 10mg kg10mg kg 对人体的影响 膳食中的亚硝酸盐一般不危害人体健康 当人体摄入总量达 0 30 3 0 5g0 5g 时 会引起中 毒 当摄入总量达 3g3g 时 会引起死亡 我国卫生标准 国家规定肉制品中不超过 30mg kg 酱腌菜中不超过 20mg kg 婴儿奶粉中不超过 2mg kg 绝大多数亚硝酸盐随尿液 排出 但在特定条件下 即适宜的 pH 温度 和一定的微生物 作用 会 转变成致癌物质亚硝胺 4 测定亚硝酸盐含量的原理测定亚硝酸盐含量的原理 1 在盐酸酸化 条件下 亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后 与 N 1 萘基乙二胺盐酸盐结 合形成玫瑰红 色染料 2 将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液目测进行比较 可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含 量 二 二 实验设计实验设计 原料加工原料加工 修整 洗涤 晾晒 切分成条状或修整 洗涤 晾晒 切分成条状或 片状片状 加调味料装坛加调味料装坛 加盐加盐 盐水冷盐水冷 却却 泡菜盐水泡菜盐水 发酵发酵 成品成品 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 7 三 泡菜腌制过程三 泡菜腌制过程 1 泡菜坛的选择 1 应选用火候好 无裂纹无裂纹 无砂眼 坛沿深 盖子吻合盖子吻合好的泡菜坛 2 检查时可将坛口向上压入水中 看坛内有无渗水 现象 2 腌制 1 过程 将新鲜蔬菜预先处理成条状或片状 将新鲜蔬菜预先处理成条状或片状 泡菜盐水按清水和盐为泡菜盐水按清水和盐为 4 14 1 质量比配制煮沸冷却备用 质量比配制煮沸冷却备用 预处理的新鲜蔬菜装至预处理的新鲜蔬菜装至半坛半坛 时放入时放入 蒜瓣 生姜 香辛料蒜瓣 生姜 香辛料 等佐料 等佐料 如果希望发酵快些 可将蔬菜在开水中浸如果希望发酵快些 可将蔬菜在开水中浸 1 1 分钟后入坛 再加上一些白酒 分钟后入坛 再加上一些白酒 并继续装至八成满 并继续装至八成满 倒入配制好的盐水 使盐水倒入配制好的盐水 使盐水 没过没过全部菜料全部菜料 盖上泡菜坛盖子 并用盖上泡菜坛盖子 并用水水密封发酵 以保证坛内为密封发酵 以保证坛内为无氧无氧环境 环境 发酵时间受到发酵时间受到 温度温度 影响 影响 注意 注意 水封闭坛口起着使坛内与坛外空气隔绝的作用 空气中水封闭坛口起着使坛内与坛外空气隔绝的作用 空气中 2121 是氧气 这是最简易的造成无氧环境的 是氧气 这是最简易的造成无氧环境的 方法 这样 坛内可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌进行乳酸发酵 如不封闭 则会有许多需氧菌生长 方法 这样 坛内可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌进行乳酸发酵 如不封闭 则会有许多需氧菌生长 蔬菜会腐烂 蔬菜会腐烂 泡菜发酵分为 泡菜发酵分为 发酵前期 蔬菜刚入坛时 表面带入的微生物 主要是以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌等较为活跃 它们发酵前期 蔬菜刚入坛时 表面带入的微生物 主要是以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌等较为活跃 它们 进行异型乳酸发酵和微弱的酒精发酵产生较多的乳酸 酒精 醋酸和二氧化碳等 二氧化碳以气泡从水进行异型乳酸发酵和微弱的酒精发酵产生较多的乳酸 酒精 醋酸和二氧化碳等 二氧化碳以气泡从水 槽内放出 逐渐使坛内形成嫌气状态 发酵产物中除乳酸外 还有其他 如乙醇 槽内放出 逐渐使坛内形成嫌气状态 发酵产物中除乳酸外 还有其他 如乙醇 CO2CO2 等称异型乳酸发酵 等称异型乳酸发酵 泡菜坛内有时会长一层白膜 形成白膜是由于产膜酵母的繁殖 泡菜坛内有时会长一层白膜 形成白膜是由于产膜酵母的繁殖 酵母菌是兼性厌氧微生物 泡菜发酵液营养丰富 其表面氧气含量也很丰富 适合酵母菌的繁殖 酵母菌是兼性厌氧微生物 泡菜发酵液营养丰富 其表面氧气含量也很丰富 适合酵母菌的繁殖 发酵中期 由于前期乳酸的积累 发酵中期 由于前期乳酸的积累 pHpH 下降 嫌气状态的形成 乳酸杆菌活跃进行活跃的同型乳酸发酵 下降 嫌气状态的形成 乳酸杆菌活跃进行活跃的同型乳酸发酵 乳酸积累乳酸积累 pHpH 达达 3 5 3 8 3 5 3 8 大肠杆菌 酵母菌 霉菌等的活动受到抑制 这一期为完全成熟阶段大肠杆菌 酵母菌 霉菌等的活动受到抑制 这一期为完全成熟阶段 发酵产 发酵产 物中只有乳酸 称为同型乳酸发酵 物中只有乳酸 称为同型乳酸发酵 发酵后期 继续进行乳酸发酵 乳酸积累达发酵后期 继续进行乳酸发酵 乳酸积累达 1 21 2 以上时 乳酸杆菌的活性受到抑制 发酵速度逐渐变缓 以上时 乳酸杆菌的活性受到抑制 发酵速度逐渐变缓 甚至停止 甚至停止 腌制腌制 1 1 周左右即可开坛食用 周左右即可开坛食用 也可随时加入新鲜蔬菜 不断取用也可随时加入新鲜蔬菜 不断取用 如果加入一些已经腌制过的泡菜汁更 如果加入一些已经腌制过的泡菜汁更 好 这相当于接种已经扩增的发酵菌 可减少腌制时间 好 这相当于接种已经扩增的发酵菌 可减少腌制时间 一般在腌制 10 天后亚硝酸盐含量开始降低 故在 10 天之后食用最好 四 亚硝酸盐的测定四 亚硝酸盐的测定 测定步骤 配制溶液 制备标准显色液制备标准显色液 制备样品处理液 比色比色 1 配制溶液 对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液 N 1N 1 萘基乙二胺盐酸盐溶液 萘基乙二胺盐酸盐溶液 亚硝酸钠溶液亚硝酸钠溶液 提取剂提取剂 氯化镉 氯化钡 氯化镉 氯化钡 作用 增大亚硝酸钠的溶解度 作用 增大亚硝酸钠的溶解度 氢氧化铝乳液 作用 作吸附剂 充分使滤液脱色 氢氧化铝乳液 作用 作吸附剂 充分使滤液脱色 2 5mol l2 5mol l 的氢氧化钠溶液 中和过多盐酸 营造碱性环境 的氢氧化钠溶液 中和过多盐酸 营造碱性环境 2 2 制备标准显色液制备标准显色液 用移液管吸取用移液管吸取 0 20ml0 20ml 0 40ml0 40ml 0 60ml0 60ml 0 80ml0 80ml 1 00ml1 00ml 1 50ml1 50ml 亚硝酸钠溶液 分别置于亚硝酸钠溶液 分别置于 50ml50ml 比比 色管中 再取色管中 再取 1 1 支比色管作为空白对照 并分别加入支比色管作为空白对照 并分别加入 2 0ml2 0ml 对氨基苯磺酸溶液 混匀 静置对氨基苯磺酸溶液 混匀 静置 3 3 5 5 分钟后 分钟后 再分别加入再分别加入 1 0ml1 0ml N 1N 1 萘基乙二胺盐酸盐溶液 加蒸馏水至 萘基乙二胺盐酸盐溶液 加蒸馏水至 50ml50ml 混匀 观察亚硝酸钠溶液颜色的梯 混匀 观察亚硝酸钠溶液颜色的梯 度变化 度变化 测亚硝酸盐含量测亚硝酸盐含量 亚硝酸钠亚硝酸钠 溶液溶液对氨基苯磺酸溶液对氨基苯磺酸溶液 静置静置 3 5分钟分钟 N 1 萘基乙二胺盐酸盐萘基乙二胺盐酸盐 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 8 亚 硝 酸 盐 含 量 发酵时间 d 3 制备样品处理液的步骤是制备样品处理液的步骤是 称取称取 0 40 4 kgkg 泡菜 粉碎榨汁 过滤得约泡菜 粉碎榨汁 过滤得约 200mL200mL 汁液 汁液 取取 100mL100mL 汁液倒入汁液倒入 500mL500mL 容量瓶 添加容量瓶 添加 200mL200mL 蒸馏水蒸馏水 和和 100mL100mL 提取剂提取剂 摇床振荡 摇床振荡 1h1h 再加 再加 40mL40mL 氢氢 氧化钠溶液氧化钠溶液 最后用 最后用 蒸馏水蒸馏水 定容到定容到 500mL500mL 并立刻并立刻 过滤过滤 获得滤液 获得滤液 将滤液将滤液 60mL60mL 移入移入 100mL100mL 容量瓶 用容量瓶 用 氢氧化铝乳液氢氧化铝乳液 吸附脱色 定容后过滤 获得 吸附脱色 定容后过滤 获得 无色透明无色透明 的滤液 的滤液 4 比色 将将 40mL40mL 滤液移入滤液移入 50mL50mL 比色管中 并编号 比色管中 并编号 分别依次加入分别依次加入 2 0mL2 0mL 的对氨基苯磺酸溶液的对氨基苯磺酸溶液 和和 1 0mL1 0mL 的的 N 1 N 1 萘基乙二胺盐酸溶液萘基乙二胺盐酸溶液 并定容到 并定容到 50mL50mL 混 混 匀静置匀静置 15min15min 观察颜色变化 并与观察颜色变化 并与 标准显色液标准显色液 比较 记录亚硝酸盐含量 比较 记录亚硝酸盐含量 1 1 亚硝酸盐含量在第 亚硝酸盐含量在第 6 6 天达到最高峰 天达到最高峰 2 2 亚硝酸盐含量升高的原因是由于泡菜在开始腌制时 坛内环境有利于某 亚硝酸盐含量升高的原因是由于泡菜在开始腌制时 坛内环境有利于某 些细菌的繁殖 包括一些硝酸盐还原菌 些细菌的繁殖 包括一些硝酸盐还原菌 这些细菌可以促进硝酸盐还原为亚 这些细菌可以促进硝酸盐还原为亚 硝酸盐 硝酸盐 3 3 亚硝酸盐含量降低的原因 随着腌制时间的延长 乳酸细菌也大量 亚硝酸盐含量降低的原因 随着腌制时间的延长 乳酸细菌也大量 繁殖 对硝酸盐还原菌产生一定的抑制作用 使其生长繁殖受到繁殖 对硝酸盐还原菌产生一定的抑制作用 使其生长繁殖受到 影响 影响 同时形成的亚硝酸盐又被分解 同时形成的亚硝酸盐又被分解 造成泡菜中亚硝酸造成泡菜中亚硝酸 盐的含量又有所下降 盐的含量又有所下降 计算样品滤液 计算样品滤液 40mL40mL 中亚硝酸盐含量 中亚硝酸盐含量 计算公式是 计算公式是 取泡菜取泡菜榨汁榨汁过滤过滤 汁液汁液 蒸馏水蒸馏水加加 氢氧化钠定容氢氧化钠定容 氢氧化铝乳液氢氧化铝乳液定容定容 样品中亚硝酸盐含量 样品中亚硝酸盐含量 mgmg 取样量 取样量 40mL40mL滤液的质量 滤液的质量 KgKg 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 9 专题专题 2 2 微生物的培养与应用微生物的培养与应用 课题 1 微生物的实验室培养 一 基础知识一 基础知识 1 培养基 培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求 配制出供其生长繁殖的营养基质 是进行微生物培养 的物质基础 1 培养基分类 按照物理性质物理性质可分为 液体培养基液体培养基 应用于工业或生活生产 半固体培养基半固体培养基 主要用于鉴定微生物运动力 主要用于鉴定微生物运动力 固体培养基固体培养基 应用于微生物的分离 计数 计数和鉴定 注意 在液体培养基中加入凝固剂琼脂琼脂 是从红藻中提取的一种多糖 在配制培养基中用作凝固剂 后 制成琼脂固体培养基 微生物在固体培养基表面生长 可以形成肉眼可见的菌落 根据菌落的特征可以 判断是哪一种菌 按照成分成分培养基可分为 人工合成培养基人工合成培养基 用成分已知的化学物质配制而成 其中成分的种类比例明确 常用于微生物 的分离鉴定 天然培养基天然培养基 是用化学成分不明的天然物质配制而成 常用于实际工业生产 按照培养基的用途用途 可将培养基分为 选择培养基选择培养基 是指在培养基中加入某种化学物质 以抑制不需要的微生物生长 促进所需要的 微生物的生长 如 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌 加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞分离导入了目的基因的受体细胞 鉴定培养基鉴定培养基 是根据微生物的特点 在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的 用以鉴 别不同类别的微生物 伊红和美蓝培养基可鉴别大肠杆菌 伊红和美蓝培养基可鉴别大肠杆菌 2 培养基的化学成分一般都含有水水 无机盐无机盐 碳源碳源 氮源氮源 四类营养成分 碳源 能为微生物的代谢提供碳元素的物质 如 CO2 NaHCO3等无机碳源 糖类 最常用的碳源 尤其 最常用的碳源 尤其 是葡萄糖 是葡萄糖 石油 花生粉饼等有机碳源 异养微生物只能利用有机碳源 单质碳不能作为碳源单质碳不能作为碳源 氮源 能为微生物的代谢提供氮元素的物质 如 N2 NH3 NO3 NH4 无机氮源 蛋白质 氨基酸 尿 素 牛肉膏 蛋白胨 有机氮源 等 只有固氮微生物才能利用只有固氮微生物才能利用 N N2 氮源主要用于合成蛋白质 核酸以氮源主要用于合成蛋白质 核酸以 及及 有的碳源只能是碳源有的碳源只能是碳源 如如 CO2 有的碳源可同时是有的碳源可同时是氮源 如 NH4HCO3 有的碳源可同时是有的碳源可同时是能源 如葡萄糖葡萄糖 有的碳源同时是有的碳源同时是氮源 也是是能源 如蛋白胨 含氮的代谢产物含氮的代谢产物 在提供上述几种主要营养物质的基础上 培养基还需要满足微生物生长对 PH 特殊营养物质 生长因 子 以及氧气等的要求 例如 培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素维生素 培养霉菌时需要将培养基 的 PH 调至酸性酸性 培养细菌时需要将培养基的 PH 调至中性或微碱性中性或微碱性 培养厌氧微生物时需要提供无氧的 条件 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 10 2 无菌技术 1 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵 避免杂菌污染的方法主要包括以下四个内容 对实验操作的空间 操作者的衣着和手 进行清洁和消毒 将用于微生物培养的器皿 接种用具和培养基等器具进行灭菌 为避免周围环境中微生物的污染 实验操作应在酒精灯火焰附近进行 实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外 还有什么目的 答 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染 消毒是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物 不包括芽 孢和孢子 灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物 包括芽孢和孢子 消毒和灭菌的比较 比较项理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭 消毒较为温和部分生活状态的微生物不能 灭菌强烈全部微生物能 2 实验室常用的消毒方法是煮沸消毒法煮沸消毒法 巴氏消毒法巴氏消毒法 对于一些不耐高温的液体 此外 人们也 常使用化学药剂进行消毒 如用 酒精 氯气 等 常用的灭菌方法有灼烧灭菌灼烧灭菌 干热灭菌干热灭菌 高压蒸汽高压蒸汽 灭菌灭菌 此外 实验室里还用紫外线 或 化学药物 石碳酸或煤酚皂 进行消毒 灭菌方法 接种环 接种针 试管口等使用灼烧灭菌法 玻璃器皿 金属用具等使用干热灭菌法 所用器械是干热灭菌箱 培养基 无菌水等使用高压蒸汽灭菌法 所用器械是高压蒸汽灭菌锅 表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法 所用器械是紫外灯 注意 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外 还 能有效避免操作者自身被微 生物感染 二 实验操作二 实验操作 1 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 注意 培养基灭菌后 需要冷却到 50 左右时 才能用来倒平板 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时 就可以进行倒平板了 2 倒平板的过程 将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 右手拿装有培养基的锥形瓶 左手拔出棉塞 右手拿锥形瓶 将瓶口迅速通过火焰 通过灼烧灭菌 防止瓶口的微生物污染培养基 用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙 右手将锥形瓶中的培养基 约 10 20mL 倒入培养皿 左手立即盖上培养皿的皿盖 等待平板冷却凝固 大约需 5 10min 然后 将平板倒过来放置 使培养皿盖在下 皿底在上 平板冷凝后 皿盖上会凝结水珠 凝固后的培养基表面的湿度也比较高 将平板倒置 既可以使 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 11 培养基表面的水分更好地挥发 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 注意 在倒平板的过程中 如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 这个平板就不能用来培 养微生物了 国为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 因此最好不要用这个平板培 养微生物 如果未接种的培养基在恒温箱中保温 1 2 天后无菌落生长 说明培养基的制备是成功的 否则 需要重新制备 2 纯化大肠杆菌 1 微生物接种的方法中最常用的是平板划线法平板划线法和稀释涂布平板法稀释涂布平板法 平板划线法是指通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作 将聚集的菌种逐步稀释逐步稀释分散到培养 基的表面 在数次划线后培养 可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体 这就是菌落 稀释涂布平板法是指将菌液进行一系列的梯度稀释 然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养 基的表面 进行培养 分为系列稀释操作稀释操作和涂布平板操作涂布平板操作两步 注意 用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的目的是 使聚集在一起的微生物分散成单个细胞 从而能 在培养基表面形成单个的菌落 以便于纯化菌种 2 平板划线的操作步骤如下 将接种环放在火焰上灼烧 直到接种环烧红 在火焰旁冷却接种环 并打开棉塞 将试管口通过火焰 将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 将试管通过火焰 并塞上棉塞 左手将皿盖打开一条缝隙 右手将沾有菌种的接种环迅速伸入 平板内 划三至五条平行线 盖上皿盖 注意不要划破培养皿 灼烧接种环 待其冷却后 以免接种 环温度太高 杀死菌种 从第 一区域划线的末端开始往第二区域内划线 重复以上操作 在三 四 五区域内划线 注意不要将最 后一区的划线与第一区相连 将平板倒置放入培养箱中培养 注意 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧接 种环是为了杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种 使下一次划线时 接种环上的菌种直接来源于 上次划线的末端 从而通过划线次数的增加 使每次划线时菌种的数目逐渐减少 以便得到菌落 划线 结束后灼烧接种环 能及时杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 2 系列稀释操作步骤 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 12 3 涂布平板操作步骤 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 取少量菌液 滴加到培养基表面 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃 待酒精燃尽后 冷却 8 10s 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面 注意 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行 如第 2 步 进行无菌操作 应从操作的各个细节保证 无菌 例如 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管头不要接触任何其他物体 吸管要在酒精灯火焰周围 等等 3 菌种的保存 1 对于频繁使用的菌种 可以采用临时保藏临时保藏的方法 临时保藏方法 将菌种接种到试管的固体斜面培养基上 在合适的温度下培养 当菌落长成后 将试管放入 4 4 的冰 箱中保藏 以后每 3 6 个月 都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上 缺点缺点 这种方法保存的时间不长 菌种容易被污染或产生变异 2 对于需要长期保存的菌种 可以采用甘油管藏甘油管藏的方法 在 3mL 的甘油瓶中 装入 1mL 甘油后灭菌 将 1mL 培养的菌液转移到甘油瓶中 与甘油充分混匀后 放在 20 20 的冷冻箱中保存 附 生物的营养 营养物质是指维持机体生命活动 保证发育 生殖所需的外源物质 在人及动物 营养物质包括水 无机盐 糖类 脂质 蛋白质 维生素六类 在植物 营养物质包 括矿质元素 水 二氧化碳等三类 在微生物 则有水 无机盐 碳源 氮源及特殊营养物质五类 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 13 课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一 实验原理一 实验原理 1 尿素是由碳 氮 氧和氢组成的有机化合物 外观是白色晶体或粉末 由碳 氮 氧和氢组成的有机化合物 外观是白色晶体或粉末 一种重要的农业氮肥 尿素并 不能直接被农作物吸收 只有被土壤中的细菌将尿素分解成氨之后 才能被植物吸收利用 土壤中的细 菌之所以能分解尿素 是因为他们能合成脲酶 尿素最初是从人的尿液中发现的 2 实验室中微生物的筛选应用的原理是 人为提供有利于目的菌株生长的条件 包括 营养 温度 pH 等 同时抑制或阻止其他微生物生长 3 选择培养基是指 在微生物学中 将允许特定种类的微生物生长 同时抑制或阻止其他种类微生物生 长的培养基 目的是从众多微生物中分离所需要的微生物 配制选择培养基的依据 根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的 例如 培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物 培养基中不加入氮元素 可以选择培养能固氮的微生物 因为非固氮微生物不能在此培养基上生存 石油是唯一碳源时 可以抑制不能利用石油的微生物的生长 使能够利用石油的微生物生存 达到分离 能消除石油污染的微生物的目的 加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等 加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌 加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌 这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的 将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物 4 4 对分离的菌种作进一步的鉴定对分离的菌种作进一步的鉴定 原理 细菌分解尿素时产生氨 氨使培养基的碱性增强 因此 可通过检测培养基原理 细菌分解尿素时产生氨 氨使培养基的碱性增强 因此 可通过检测培养基 PHPH 变化来鉴定该种变化来鉴定该种 细菌能否分解尿素细菌能否分解尿素 方法 在选择培养基中加酚红指示剂方法 在选择培养基中加酚红指示剂 培养细菌 观察指示剂是否变红 菌落周围出现红色圆环培养细菌 观察指示剂是否变红 菌落周围出现红色圆环 5 统计菌落数目统计菌落数目 常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法稀释涂布平板法 另外 显微镜直接计数显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法 二 实验设计 菌落计数菌落计数 配制土壤溶液配制土壤溶液 系列稀释系列稀释 涂布平板与培养涂布平板与培养 配制培养基配制培养基灭菌灭菌 倒平板倒平板 三三 实验的具体操作流程实验的具体操作流程 1 土壤取样 同其他生物环境相比 土壤中的微生物 数量最大 种类最多 在富含有机质的土壤表 层 有更多的微生物生长 从富含有机物 潮湿 pH 7 的土壤中取样 铲去表层土 在距地表约 3 3 8cm8cm 的土壤层取样 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌 应在火焰旁称取土壤 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌 应在火焰旁称取土壤 在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中 塞好棉塞 在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中 塞好棉塞 2 样品的稀释 样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目 在实际操作中 通常选用一定稀 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 14 释范围的样品液进行培养 以保证获得菌落数在 30 300 之间 适于计数的平板 测定土壤中细菌的数量 一般选用 104 105 106 测定放线菌的数量 一般选用 103 104 105 测定真菌的数量 一般选用 102 103 104 3 微生物的培养与观察 不同种类的微生物 往往需要不同的培养温度和培养时间 细菌 30 37 1 2 天 放线菌 25 28 5 7 天 霉菌 25 28 3 4 天 每隔 24 小时统计一次菌落数目 选取菌落数目稳定时的记录作为结果 这样可以防止因培养时间不足而 导致遗漏菌落的数目 一般来说 在一定的培养条件下 相同的培养基 唯独及培养时间 同种微生物 表现出稳定的菌落特征 形状 大小 隆起程度 颜色 设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响 提高实验结果的可信度 对照实验 是指除了被测试的条件以外 其他条件都相同的实验 其作用是比照试验组 排除任何其他可能原因的 干扰 证明确实是所测试的条件引起相应的结果 4 统计菌落数目统计菌落数目 常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法稀释涂布平板法 理论依据 理论依据 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活一个活 菌菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有多少活菌 为了保证结果准确 一般选择菌 落数在 3 5 的平板进行计数 一般来说 选择菌落数在 30 300 的平板进行计数 并取平均值取平均值 统计的菌落数往往比活菌的实际数目 低 这是因为两个或多个细胞连在一起时 平板上观察到的只是一个菌落 因此 统计结果一般用菌落 数而不是活菌数来表示 计算出平板菌落数平均值 然后按 公式进行计算 每克样品中的菌落数 C V M 其中 C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V 代表涂布平 板时所用的稀释液的体积 ml M 代表稀释倍数 采用此方法的注意事项 1 为了防止菌落蔓延 影响计数 可在培养基中加入 TTC 2 本法仅限于形成菌落的微生物 另外 显微镜直接计数显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法 不能区分死菌与活菌不适于对运动细菌的计数不能区分死菌与活菌不适于对运动细菌的计数 需要相对高的细菌浓度个体小的细菌在显微镜下难以观察 需要相对高的细菌浓度个体小的细菌在显微镜下难以观察 计算公式计算公式 每毫升原液所含细菌数每毫升原液所含细菌数 每小格平均细菌数每小格平均细菌数 X400X10000XX400X10000X 稀释倍数稀释倍数 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 15 课题 3 分解纤维素的微生物的分离 一 基础知识 一 纤维素和纤维素酶 1 纤维素 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物 植物每年产生的纤维素能被土壤中的某些微生 物分解利用 是因为它们能产生纤维素酶 对这些微生物的研究与利用 使人们能够利用秸秆等废弃物 生产酒精 用纤维素酶处理服装面料等 作用 纤维素在造纸业中大量使用 是重要的造纸原料 作用 纤维素在造纸业中大量使用 是重要的造纸原料 纤维素可以制成甲基纤维素 乙基纤维素 羧甲基纤维素 微晶纤维素等衍生物 纤维素可以制成甲基纤维素 乙基纤维素 羧甲基纤维素 微晶纤维素等衍生物 食物中的纤维素 即膳食纤维 对人体的健康也有着重要的作用 食物中的纤维素 即膳食纤维 对人体的健康也有着重要的作用 分布 纤维素是自然界中分布最广 含量最多的一类多糖纤维素是自然界中分布最广 含量最多的一类多糖 植物的根 茎 叶等器官都含有大量的纤 维素 其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物 木材 作物秸秆等也富含纤维素 注意 纤维素与淀粉都是由葡萄糖组成的 但组成两者的葡萄糖的连接方式不同 因而使两者的形态完全不同 纤维素与淀粉都是由葡萄糖组成的 但组成两者的葡萄糖的连接方式不同 因而使两者的形态完全不同 2 纤维素酶的组成及作用 纤维素酶是一种复合酶 一般认为它至少包括三种组分 即 C1酶 CX酶和葡萄糖苷酶 前两种酶使 纤维素分解成纤维二糖 第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖 纤维素最终被水解成葡萄糖 为微生物的 生长提供营养 二 纤维素分解菌的筛选 1 纤维素分解菌的筛选方法 刚果红染色法 这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选 2 纤维素分解菌的筛选方法的原理 刚果红是一种染料 它可以与纤维素形成红色复合物 但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这 种反应 当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时 刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物 当纤维素被纤维素酶分解后刚果红 纤维素的复合物就无法形成 培养基中会出现以纤维素分解菌为中 心的透明圈 这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌 三 实验操作 分离分解纤维素的微生物实验流程 土壤取样 选择培养 此步是否需要 应根据样品中目的菌株数量的多少来确定 梯度稀释 将样品 涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 一 土壤取样 采集土样时 由于生物与环境的相互依存关系 在富含纤维素的环境中 纤维素分解菌的含量 相对提高 因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境 如树林中多年落叶形成的腐殖土 多年积累的枯枝败叶等等 若找不到合适环境 可将滤纸埋在土壤中一个月左右 滤纸埋在土壤中能使 纤维素分解菌相对聚集 实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境 一般应将纸埋于深约 10cm 左 右腐殖土壤中 也会有能分解纤维素的微生物生长 二 选择培养 1 选择培养的目的 增加纤维素分解菌的浓度纤维素分解菌的浓度 以确保能够从样品中分离到所需要的微生物 2 制备选择培养基 旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基 为什么 是液体培养基 原因是配方中无凝固剂 这个培养基对微生物是否具有选择作用 如果具有 是如何进行选择的 有选择作用 本配方中的碳源是纤维素 所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖 海量资料 QQ 群 261742327 看视频百度搜索 驼铃儿高中教学视频 16 你能否设计一个对照实验 说明选择培养基的作用 用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照 3 选择培养 将土样加入装有 30ml 选择培养基的锥形瓶中 将锥形瓶固定在摇床上 在一定温度下震荡培养 1 2 天 直至培养液变浑浊 也可重复选择培养 注意 为什么选择培养能够 浓缩 所需的微生物 在选择培养的条件下 可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖 而那些不适应这种营 养条件的微生物的繁殖被抑制 因此可以起到 浓缩 的作用 三 梯度稀释 将选择培养后的培养基进行等比稀释 101 106倍 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 四 将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 1 制备培养基 参照课本旁栏中的比例配制 2 倒平板操作 3 涂布平板 将稀释度为 104 106的菌悬液各取 0 1ml 涂布到平板培养基上 30 倒置培养 菌落周围 会出现明显的透明圈 4 挑选产生透明圈的菌落 参照课本刚果红染色法 挑选产生透明圈的菌落 一般即为分解纤维素的菌 落 五 刚果红染色法 方法一 方法一 先培养微生物 再加入刚果红进行颜色反应 优点 这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 优点 这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 缺点 操作繁琐 加入刚果红溶液时会使菌落之间发生混杂 缺点 操作繁琐 加入刚果红溶液时会使菌落之间发生混杂 方法二 方法二 在倒平板时就加入刚果红 优点 操作简便 不存在菌落混杂问题 优点 操作简便 不存在菌落混杂问题 缺点缺点 1 1 由于在纤维素粉和琼脂 土豆汁中都含有淀粉类物质 可以使能够产生淀粉酶的微生物出 由于在纤维素粉和琼脂 土豆汁中都含有淀粉类物质 可以使能够产生淀粉酶的微生物出 现假阳性反应 现假阳性反应 但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊 因为培养基中纤维 素占主要地位 因