中药复方物质基础与药理研究4

1 第六章第六章 第七节第七节 中药复方物质基础与药理研究中药复方物质基础与药理研究 中药复方是指由两味及两味以上中药以中医药理论为指导 按照 君臣佐使 组成原则及配伍理论而组成的方剂 中药复方是临床用药的主要形式 较之单 味药 具有疗效强 毒性低等优点 因此 复方的物质基础与药理研究更符合 临床的实际情况 近年来中药复方的研究倍受重视 发展很快 据粗略统计近 二十年来已对 800 多个方剂进行了多方面的中药药理研究 近十年已有 1500 篇 以上对中药复方的研究论文发表 大多数也是从药理方面阐明复方的作用 一 中药复方物质基础与药理学研究的目的意义 我国中药复方的研究之主流是在中医药理论指导下进行的 这是与国外对 天然药物研究的不同之处 也是我们的优势和特色 近年的研究在阐明复方功 效 主治的现代科学内涵 在创制和开发新药方面取得了不少成就 在方法学 上也有了一些进展 但总的来说仍以印证一些药效指标为主 低水平重复较多 相关科学的配合不够密切 使得现有的中药复方制剂成分还太复杂 药效不稳 定 重现性较差 物质基础不清楚 中成药质量控制大多还是用指标成分 而 不是有效成分 缺乏被国际所认可和接受的客观 严格的标准和规范 近年来 越来越多的人认识到不能简单地采用从单个中药中分离有效单体 的方法去研究复方 中药复方的作用大多是多组分 多靶点所产生的综合效应 如何识别 提取复方中的效应物质及阐明其作用机理成为中药工作者面对的一 个重要问题 也是中药现代化研究的关键所在 开展中药复方物质基础与药理 学研究的意义在于 一可以进一步揭示中医药理论特别是配伍理论的科学内涵 二可以在弄清复方作用的基础上大大提高中药复方制剂活性成分的可测性 内 在质量的可控性 作用的可靠性 稳定性 改变外观粗糙 使用不便等缺点 中医药要走向世界 客观上要求对中药复方药效物质基础及其作用机理进行深 入研究 尽管中药复方化学成分非常复杂 作用涉及的环节非常广泛 使研究 工作显得困难重重 但随着先进科学技术的发展 特别是分析技术 生物效应 检测技术的发展和应用 采用与中医药理论相适应的药理模型 中药复方的药 效物质基础和作用机理将会被逐步阐明 使中医药事业走向现代化 国际化 二 选方原则 选方应以临床疗效为基础 选择临床常用 组成简单的复方 也可从基本方 着手 基本方一般疗效较好 组成比较简单 许多方剂都以此为基础再加味组 成 开展研究较易 理论意义及实用价值较大 且研究了一个基本方的药理作 用就可为研究与此有关的一类方的药理作用打下基础 如桂枝汤 桂枝 白芍 甘草 生姜 大枣 是桂枝汤类的基本方 能解肌发表 调和营卫 用于外感风寒表虚证 可设想研究其对感冒 2 及流感病毒的抑制作用 对免疫 血液循环系统 主要是微循环 胃肠道平滑肌及对环磷酸腺苷 环磷 酸鸟苷的影响 以及解热镇痛作用等 本方重用桂枝成了桂枝加桂汤 治 气从少腹上冲心 的奔豚证 显示了桂枝的心脏作用 原方重用芍药成了桂枝加芍药汤 适应证增加了 腹满时痛 突出了芍药治腹 满痛的作用 桂枝加附子汤 治证有 手足冷 身痛不仁 显示附子有镇痛作用和改善微循环作用 原 方加葛根称为桂枝加葛根汤 治桂枝汤证有项背强痛者 提示葛根能治项背强痛等 说明研究了桂枝汤一 方后可为研究这一类的许多方子奠定基础 复方来源广泛 有历代医方书中的老方 也有现代临床报道的新方 还有 经方 时方 不论什么方 总以有无疗效为依据 张仲景的 伤寒杂病论 方 多数是方简效高 故可以选作研究课题 也有很多屡经验证卓有成效的验方 符合当前防病治病需要 作为研究课题更切合实际些 如复方丹参方作为 一种经验处方 于1972年研制成功并获准生产 30年来已有十余种剂型 百余 家药厂生产 年产值已达50亿元 是我国的第一大中药品种 复方丹参方的主 要成分是丹参 三七和冰片 具有活血止痛的功效 临床广泛应用于血瘀型心 绞痛 近年有人使用药理和化学紧密结合的方法 采用多种模型对复方丹参方 的药效物质 配伍配比规律及作用机制进行了较系统的深入研究 明确了复方 丹参方的药效物质基础 为这类疗效明确的小复方二次开发提供了理论依据和 技术支持 总之 选题以疗效明确 组方简练为基础 十分重要 三 中药复方配伍关系研究 复方是中医用药的主要形式 从某种意义上讲复方的核心是药物间的合理 配伍 合理的配伍才能使药物的使用具有高效 低毒 稳态的特点 因此 以 配伍关系研究作为切入点是开展对复方中的效应物质及其作用机理研究的一条 合理途径 近年来对中药配伍规律的研究成为中医药研究的一个热点和重点 这为进一步深入开展对复方物质基础及作用机理的研究提供了条件和依据 了 解复方配伍关系研究的概况 包括开展这些研究所采用的思路 方法 对进行 更深层次的研究很有必要 一 复方配伍研究的主要内容 1 组方原则研究 中医组方遣药是按一定的原理和法则进行的 这种原则 被高度概括为 君 臣 佐 使 君 臣 佐 使的概念是古代医家总结方剂 组成规律的产物 假借当时封建王朝君 臣 佐 使之间的相互统驭关系来说 明各药在方剂中所起的作用 古人云 药有个性之特长 方有合群之妙用 复方中各味药物间既有相互配合 又有相互制约 紧密联系 形成合力 才能 发挥最大的治疗效果 对于 君 臣 佐 使 的具体含义历代中医学家虽有 不同的见解 但比较一致的看法是 君药为方中治疗主病或主证起主要作用的 药物 臣药为辅助君药治疗主病或主证的药物 或为针对兼病 兼证起主要作 用的药物 佐药为治疗兼证或制约君药 臣药偏性的药物 使药为引经或起调 3 和作用的药物 上述组方原则有其科学的内涵 现在研制中药复方新药时 方 解是否合理是一项重要的评价内容 要探索复方的效应物质及其作用机理 首先要了解所要研究的复方配伍是 否合理 药物与药物之间是否通过相辅相成 相生相克的交互影响 而产生增 效抑弊的综合效应 如果一个复方的配伍不尽合理 一方面会使疗效降低 或 毒副作用增加 另一方面其提取物或制剂中的无效成分或有害成分也必然增加 选择这样的复方进行效应物质及作用机理的研究注定会给分析工作带来额外的 麻烦 造成事倍功半的后果 许多经典方组成精辟 疗效显著 药理实验也证 明 其方中各药的相互影响符合中医组方原则的要求 复方物质基础及作用机 理的研究应以对这些方子研究为重点 进行突破 举一反三 达到事半功倍的 效果 其具体的研究方法 要按复方不同的主治 功效而设计 首先要分析该复 方的适应证 设计几项指标 除研究该方对正常机体的作用外 还要制造相应 的病理模型 来验证复方的作用或疗效 药理作用不但要研究复方对整体的作 用 而且还可用离体器官进行研究分析 其次 在全方研究的基础上 要进行 拆方研究 以便进一步了解哪一味药或哪几味药在该方中对某项指标起决定性 作用 拆方的方法可以根据中医药理论将全方药物分成几个组 也可利用优选 法 正交试验法以筛选有效的单味药 再次是在研究时 尽可能采用现代科学 新成就 新技术 新方法 如吴茱萸汤由吴茱萸 人参 生姜 大枣四味药物组成 具温中补虚 降 逆止呕功效 实验证明 此方能解除胃痉挛 确有明显止吐作用 实验可选择 对胃肠运动 止吐等观察指标分别对方中各组成药物单独及交互的作用进行检 测 可发现其中吴茱萸在抑制胃运动和镇吐中起主要作用 为君药 生姜有止 吐作用 并与吴茱萸协同 增强其效应为臣药 人参 大枣本身并无镇吐作用 但仍可加强整方的止吐效果 同时减小毒性 又如桂枝汤具有解肌发表 调和 营卫的功效 以相关的现代医学指标 解热 发汗 抗炎 镇痛 抑制流感病 毒增殖 增强免疫功能进行研究 发现全方的作用显著强于方中诸药的各种组 合 全方减去任何一味药 都会影响其作用 以上两方分析表明 复方合理的 配伍 可以取得最大的药理效果 复方效应不是若干药味简单 机械的凑合所 能产生的 而是通过药与药之间合理的组合 互相协同所形成的综合结果 2 两药相互作用研究 复方中药与药之间的配伍关系的基本内容是七情 七情是指单行 相须 相使 相畏 相杀 相恶 相反 李时珍曰 相须 者 同类不可离也 相恶者 夺我之能也 相使者 我之佐使也 相畏者 受 彼之制也 相反者 两者不合也 相杀者 制彼之毒也 故七情中 除单行 外 均反映药物同药物间的相互关系 4 单行 指用单味药治病 一般针对比较单纯的病情 使用一种针对性比 较强的药物获得疗效 相须 指功效相同的药物伍用相互助长疗效 桂枝与麻黄相须为用使发 汗解热作用加强 相使 指功效不同的药物合用 辅药可以提高主药功效 如大黄与黄芩 伍用 能提高黄芩清热泻火的功效 相畏 是指两药同用时 一种药物受到另一种药物的抑制 使之减轻或 消除烈性或毒性 如常山有抗疟作用 但有恶心 呕吐反应 配伍槟榔 不影 响常山抗疟作用 却可使呕吐反应减小 相杀 即用一药消除另一药的毒性或不良反应 如生姜与半夏同用可拮 抗半夏的毒性 相恶 是指两药合用后能互相牵制而使作用抵消或药效消失 知母 人 参都有降血糖作用 但两药合用 却使降血糖作用减弱甚至消失 瓜蒌加黑附 片可使单味黑附片兴奋蛙心的作用消失 相反 是指两药合用后可能发生不良反应或毒性 中药 十八反 之一是 甘草反甘遂 在煎煮过程中 由于甘草中的甘草皂甙有助溶作用 与甘遂中的 甾萜类物质形成了分子复合物 增加了甘遂的毒性成分甾萜类物质的溶出率 使煎液的毒性增加 故甘草不能与甘遂配伍使用 又如甘草与芫花合用 无论是灌服还是腹腔给药 其LD50均比单味药小 说明合用毒性增加 概括地说 中药配伍用药原则要求 充分利用相须 相使配伍 产生 增效协同作用 应用烈性 有毒药物时 相畏 相杀配伍 以消除或减弱毒 性 以上均为用药之所求 避免相恶配伍导致药效拮抗而削弱原有功效 避免相反配伍增强毒性或导致不良反应 研究七情关系的最基本形式可从药对着手 所谓药对是指在中医方剂中 两味药物相对固定 经常成对出现的配伍形式 上述桂枝与麻黄 生姜与半 夏 还有白术与枳实 苍术与厚朴 黄芪与当归 芍药与甘草 人参与附子等 均为常见的药对 其配伍均反映了七情配伍的基本原则要求 有其科学内涵 如现代研究表明 人参与附子单独使用在改善心肌收缩功能方面虽然均有 一定作用 但两者配对使用可使心衰豚鼠的平均动脉压 心内压 LVP 及L Vdp dt max 增加的幅度明显提高 产生协同作用 进行复方的物质基础研究 从药对配伍研究着手 可能是一条简便易行的途径 又如在低浓度时芍药苷和 甘草苷两种成分各自均不能在小鼠横隔膜上显示神经肌肉结合部位阻滞作用 但如此低浓度合并给药则出现显著阻滞效果 杜力军等 中国实验动物学杂志 2000 10 1 42 5 3 剂量配比研究 复方配伍研究除考察方中组成药物是否合理外 各药 的用量也非常重要 方中的药物即使不变 某些药物剂量的改变也会引起整方 药效的改变 探索复方各组成药物剂量配比的合理性已受到了重视 有关研究 已有报道 如有人用两个不同剂量的补阳还五汤观察对 气虚血瘀 动物模型 血粘度的影响 1方黄芪为 2 方的2倍 其它药物的剂量固定不变 两种配 伍的复方用同样的方法制备成每毫升含生药1g 的水煎液 两组模型动物分别 口服剂量相同的1号或2号方 5g kg 连续2天 结果发现 两方均有改善血粘 度的作用 而1 方的作用强于2 方 1 探索复方物质基础与作用机理 方中 各药量的配比是一项不容忽视的因素 国家973 复方丹参方药效物质和作用机理研究 项目 在国内首次明确了 该方的药效物质和作用机理 使复方丹参方由传统的经验组方过渡到有现代科 学依据的新组方 并重新确定了复方丹参方中丹参提取物与三七皂苷的配比 提高了疗效 新的配比方成功转让 取得了很大的经济效益社会效益 已有报 道 丹参与三七生药比例以5 3最有利于丹参有效成分的溶出 曾桂凤 等 色 谱 2004 22 2 141 判断某个中药复方组方及配伍是否合理 应采用理论思维和实验研究相结 合的方法 理论思维主要是从研究传统医学文献入手搞清楚在中药饮片这一层 次的配伍规律 传统文献提供的理论指导可以帮助我们站在前人已获成就的基 础上向科学的高峰攀登 减少一些不必要的原始探索 并且如果脱离了中医药 理论和临床实践 中药复方的研究也就失去了方向 另一方面 复方的配伍研 究应加强现代科学分析方法 不应用现代科学技术进行实验研究 中医药的发 展就不可能适应时代的要求 不可能有质的飞跃 复方配伍关系研究不能仅仅停留在印证经典方或经验方组成的合理性上 不少经典方 经验方确有疗效 但有些含有紧缺 有毒 禁用药材 使其推广 应用遇到困难 更难以通过现代化工业生产进入国际市场 对这类复方常需要 通过精简或以其它药代替原方中的紧缺 有毒 禁用药材以组成新方 更进一 步 复方研究不能停留在饮片配伍的水平 药效作用总是借助于一定的化学物 质而产生的 既然中药的配伍与药效的变化关系密切 这种变化必然由其化学 物质的变化而引起 通过分析配伍引起的药效变化与化学物质的变化的关联有 可能发现其药效作用的物质 复方配伍关系的研究还应在发现药效物质的基础 上将饮片配伍过渡到有效成分或有效组分配伍的新水平 二 复方配伍对药物成分与作用环节影响的研究 1 配伍对制剂过程药物成分的影响 中药复方由多味药物组成 传 统应用以合煎的汤剂为主要剂型 大多通过口服给药 既然复方煎剂的疗效 优于单味药或单味药的简单相加 探明复方与各单味药间成分的区别就显得非 6 常重要 研究制剂过程中药物配伍对各药所含成分的影响成为近年复方实验 研究的热点之一 观察的内容主要包括配伍后各药原有所含化学成分是否发生 了质的变化或量的变化 1 配伍对制剂过程药物成分质的影响 探索配伍后煎液中各药原所含化 学成分是否发生了质的变化以夏云等的研究方法和研究结果具有代表性 他们 将生脉散中的人参 麦冬 五味子按 1 3 1 5 比例合煎 或各药分煎 取得水煎 浓缩液后分别用有机溶剂萃取 然后对提取物进行分离 分析 鉴定 结果 从合煎液中分离得到一个复方产生的新成分 经鉴定为 5 羟甲基 2 糠醛 而单 味人参 麦冬 五味子的分煎液中均未见有这一成分 结合药理研究还发现 这种新成分对复方整体疗效的发挥是有利的 从而推断复方独特疗效有其一定 的物质基础 即此复方在各药共煎过程中发生了化学变化 产生了新的效应物 质 2 应该说这是一个很好的研究思路 通过这一研究至少证明复方所含成分 不一定是各单味药成分的简单相加 制剂过程中产生的新化学成分可能同效应 有关联 从而有助于阐明效应的物质基础 但阐明复方药效物质基础的研究并非如此简单 一是上述研究目前只证明 生脉散合煎过程中产生了新的物质 尚不能证明新物质对复方起多大作用或是 否起决定性作用 至于方中单味药原有的化学成分对复方药效起不起作用 起 多大作用等问题 该项研究尚无法回答 因而新物质最多可能只是全方的效应 物质之一 事情并不简单的原因之二是 远非所有的复方在合煎过程中都会产 生新物质 当归补血汤由当归和黄芪两味药物组成 古籍文献与大量现代临床 和药理实验资料均显示 两药合用能产生协同增效的作用 有人对其产生协同 增效的药效物质进行了探索 实验采用以高效液相色谱为主与计算机联用 对 复杂样品的智能优化和峰识别的方法 通过将当归补血汤复方与其单味药所有 化学成分的比较发现 黄芪与当归有很多共同均有的化学成分 但含量不一 将当归补血汤与黄芪 当归单独煎煮 对比后发现 两药配伍后没有主要化学 成分的产生或消失 但某些成分有含量上的变化 3 我们的研究也证实 当归 与黄芪合煎未见有新的化合物产生 有人研究发现 麻黄汤由中药麻黄 桂枝 杏仁 甘草等组成 麻黄平喘 的主要药效物质是麻黄碱 桂枝的镇痛解热成分是桂皮醛 杏仁的镇咳成分是 苦杏仁甙 研究表明 复方中的苦杏仁甙分解成的苯甲醛 与桂皮醛一起同麻 黄碱产生化学反应 生成了新的化学成分 该化学成分在热水中分解后 分别 发挥麻黄碱 桂皮醛 苦杏仁甙的药效作用 肖小河 等 21 世纪我国生药学研 究的机遇与挑战 中国药学杂志 1999 34 7 438 441 但总体而言 中药配伍后发现新药效物质的报道目前还很少 所以对复方物 质基础的研究不能仅仅将目光盯在共煎过程中是否有新物质产生上 7 2 配伍对制剂过程药物成分质的影响 组方后不同药物的化学成分在不 同靶点上可以产生协同效应而不一定需要新成分的介入 而药物组方后共煎 由于相互影响 增加或减少某种药物成分的煎出率 可以是复方效应不同于单 味药的另一原因 有关这方面的报道较多 如人参单煎与人参加麦冬 五味子 合煎 按 1 3 1 5 配伍 相比较 能使人参皂苷 Rb1 Rb2 Rc Rd Re Rg1煎出量减 少 甚至消失 而 Rg3 Rh1的含量明显增加 参麦液中 Rg2 Rg3 Rh1成为人参皂 苷中的主要皂苷 4 出自 金匮要略 的大黄牡丹汤由大黄 牡丹皮 桃仁 冬瓜仁和芒硝组 成 方中大黄清热解毒 祛痰通便 丹皮凉血散瘀为君 全方为治疗肠痈的代 表方剂 现代药理学研究表明 大黄蒽醌衍生物具有泻下 抑菌等作用 丹皮 所含丹皮酚具有抗菌消炎等作用 与该方通里攻下功效相符 汪显阳 3 汪显 阳 大黄牡丹汤不同配伍对有效成分煎出率的影响 中国中医药科技 2002 9 3 161 用紫外可见分光光度法测定大黄牡丹汤全方和拆方不同组 合配伍煎液中总蒽醌 结合蒽醌和丹皮酚的含量 结果 全方煎煮液中总蒽醌 结合蒽醌和丹皮酚的含量最高 说明合理的配伍可通过促进有效成分的煎出率 而增强药物的疗效 又如 将四逆汤中的附子 干姜用量固定 甘草取 6 个不同剂量 组成 6 个不同配比的四逆汤 取其煎液 应用薄层扫描法测定其乌头碱的含量 并进 行统计分析 结果表明附子同甘草配伍后煎液中的乌头碱含量减少 减少的程 度随甘草剂量的增加而增加 两者呈负相关 四逆汤中附子为君药 具有回阳 救逆功效 干姜为臣药 助附子以伸发阳气 附子有大毒 用甘草为佐药 既 能解毒 又能缓姜 附辛烈之性 实验结果表明附子配伍干姜 甘草而减小其 毒性作用的机理至少部分是由于共煎过程中甘草 干姜减少了有毒成分乌头碱 在煎剂中的含量 5 另一方面 某些配伍可使药物在共煎过程中发生反应 导致有效成分的损 耗 如 出自 保命集 的芍药汤由芍药 大黄 黄芩 黄连 当归 槟榔 木香 肉桂 甘草等组成 主治湿热痢疾 何桂霞等用薄层扫描法测定了黄连 所含黄连素在不同配伍情况下煎液中的含量 6 实验分为黄连单煎 芍药汤全 方合煎 芍药汤去大黄 芍药汤去甘草 芍药汤去黄芩 芍药汤去大黄 黄芩 甘草三药后合煎 煎煮条件一致 各种煎液中黄连生药的含量一致 结果各 种配伍煎液中黄连素的含量较单味黄连煎液中黄连素的含量分别下降95 2 5 3 3 74 9 67 5 及8 8 同时黄连亦明显降低合煎液中大黄素 黄芩苷等 成分含量 因此 研究人员对该方配伍是否合理提出了质疑 2 配伍对药动学的影响 复方中药与药之间的相互作用不仅仅表现在共 煎过程中化学组分发生质与量的变化 还表现在进入体内后有些化学成分会对 8 其它化学成分的体内过程产生影响 探索配伍对复方中主要成分的药动学的影 响有助于加深对配伍规律的理解和合理的组方用药 有关这方面的研究也已有 不少报道 如取大鼠分为2组 分别灌服单味甘草汤及芍药甘草汤 灌服的量 以所含甘草酸计算 均为500mg kg 灌服药液后间隔一定时间取血 制备血浆 用HPLC测定甘草酸和甘草次酸含量 结果表明 芍药甘草汤组甘草酸和甘 草次酸血药浓度 生物利用度显著提高 芍药甘草汤组对单味甘草组甘草次酸 的相对生物利用度为15 7倍 甘草酸的相对生物利用度为44 1倍 表明甘草伍 用芍药能显著提高甘草酸 甘草次酸的生物利用度 7 川芎嗪为川芎的有效成分之一 药理研究表明其有扩张血管 增加冠脉流 量及脑血流量 抑制血小板聚集等作用 有人用大鼠分别灌服川芎煎剂30g kg 及川芎 丹参复方煎剂 川芎 丹参 3 1 40g kg 每间隔一定时间取血 用 HPLC测定血清川芎嗪浓度并计算药动学参数 结果表明川芎煎剂与川芎 丹 参复方煎剂比较 给药后0 25h血清川芎嗪浓度与AUC值前者分别是后者的1 53 倍和1 52倍 Ka 一级吸收速率常数 t1 2Ka前者大于后者 说明川芎伍用丹 参口服可导致对川芎嗪的吸收减慢 生物利用度降低 8 另有研究证实 川芎 伍用当归 白芍 熟地黄后明显降低了川芎嗪在大鼠体内的血药浓度 降低的 程度不但低于单用川芎组 而且低于川芎 丹参复方组 9 复方中的成分复杂 有时很难找出一个活性较强的成分 有时即使能找出 一个活性相对较强的成分 但其也很难代表全方的作用 因此 用复方中某一 成分作为指标 分析复方的药代动力学的 其意义具有一定的局限性 药物的 最终价值取决于药效动力学过程 尤其是对有效成分不明或有效成分并不单一 的复方更应关心其药效或毒效动力学过程 我室曾用LD50补量法 以毒性效应作指标观察附子单用及伍用干姜 甘草 药动学的区别 方法为 取小鼠测得附子水煎酒沉液腹腔注射的LD50为26 30g kg 另取小鼠先腹腔注射20g kg附子 此剂量约相当于LD50的75 称之为负 荷量 分别在间隔 t 时间后测定还需追加注射多少量的附子才能造成50 动物 死亡 这一追加量称之为LD50t 本例测得 给予20g kg负荷量附子后1 2 4 6 9小时的LD50t分别为11 02 14 39 20 89 22 37 23 01g kg 首次注入的附 子 间隔 t 时间后其体存量为 负荷量 LD50t 由此得出腹腔注射负荷量为20g kg的附子液 间隔1 2 4 6 9小时后 其体存量分别为为15 28 11 91 5 4 1 3 93 3 29g kg 同上测得四逆汤水煎酒沉液腹腔注射的LD50为58 35g kg 给 予负荷量40 0g kg后1 2 4 6 8 h 其体存量分别为29 51 17 78 11 85 11 85 7 38 g kg 将首次给药后间隔时间对体存量或体存量的对数作图 可得出 附子及四逆汤的时间 毒效曲线 并可求得各项药动学参数 经用计算机拟合药 时曲线分析 附子及四逆汤的体内毒效过程均为二室模型 消除相半衰期分别 9 为17 0及5 8h 实验结果表明附子伍用干姜 甘草后毒性成分在体内的代谢 消除加快 这至少是干姜 甘草能减小附子毒性的又一部分原因 与中医传统 理论相符 9 3 配伍对药效作用的影响 配伍对制剂过程药物成分的影响以及配伍对 药动学的影响最终均会反映到药效上 另外 有些中药配伍可以不明显影响 制剂过程药物成分 也不明显影响药物成分的体内过程而直接影响药效 有关 配伍对药效作用影响的研究报道较多 张惠云等比较川乌与白芍配伍前后的抗炎作用 分别以川乌单用 白芍单 用及川乌 白芍 2 1合用 每组所用总生药量均为20g kg 结果发现 两药 合用抗甲醛性和抗佐剂继发性炎症作用明显优于各单味药 说明川乌配伍白芍 用于抗炎能产生协同增效的作用 10 又如袁久荣等对四物汤中各药配伍的补血作用进行了研究 实验将四物汤 中四味药物安不同组合方法得到15种配伍 分别是 全方 地黄 当归 川芎 地黄 当归 白芍 地黄 川芎 白芍 当归 川芎 白芍 地黄 当归 地黄 川芎 地黄 白芍 当归 川芎 当归 白芍 川芎 白芍 地黄 当归 川芎 白芍 取小鼠分为17组 每组11只 分 别为正常对照组 模型对照组及15个药物组 各用药组给予相应的药物12 5g kg 容量 2ml kg 每日一次 连续13天 对照组给予等量自来水 模型对照组 和各用药组于给药4天后用乙酰苯肼和环磷酰胺制备血虚模型 第14天采血 进行血常规检验及计算机聚类分析 结果表明 补血作用以四物汤全方作用最 强 拆方的各种配伍组合及单用均不及全方 当归在方中起主要作用 证明了 四物汤组方配伍的合理性 10 分析药物间的配伍关系 对药味较少的复方 可按上述方法将药物单独组 合 进行直观观察 但要分析大复方 尤其还要同时考察其它因素如剂量等时 可采用正交设计 或均匀设计 正交设计时利用正交表 一般是将组成复方 的每一药物作为一个因子 也可几味药作为一个因子 将给药与否 给药剂量 或炮制与否等作为水平 根据不同的因子 水平数及是否观察交互作用等而选 择适当的正交表 根据表的安排进行分组实验 然后对实验数据进行一些简单 的数学运算 即可看出各药物对实验结果影响的主次 判断剂量 炮制与否怎 样影响药效等 如真武汤由炮附子 白术 茯苓 芍药 生姜组成 取每味药为一个因素 共5个因素 附子为主药 取附子1水平为9g 2水平为18g 芍药有白芍 赤 勺之分 故取一水平为赤勺9g 二水平为白芍9g 其余各药取一水平分别为茯 苓9g 生姜9g 白术6g 二水平为不用药 实验选取正交表L8 2 7 用水提酒沉 法将正交设计表设定的8个配方制成注射液 代号分别为D1 D8 取犬60只制 10 备心衰模型 分为8组 分别注射D1 D8药液 0 5ml kg 通过测定左心室LV dp dtmax 心率 尿量等判断疗效 有关LVdp dtmax正交效应计算见附表1 11 表1 正交效应计算表 LVdp dt max kap s 实验号 因素及水平 实验结果 1 2 3 4 5 6 7 A B AxB C AxC D E 1 1 1 1 1 1 1 1 192 20 2 1 1 1 2 2 2 2 86 05 3 1 2 2 1 1 2 2 41 76 4 1 2 2 2 2 1 1 88 45 5 2 1 2 1 2 1 2 105 45 6 2 1 2 2 1 2 1 106 47 7 2 2 1 1 2 2 1 147 70 8 2 2 1 2 1 1 2 82 60 K1 408 46 488 37 508 55 487 11 421 23 466 70 533 02 K2 440 42 306 51 340 33 361 77 427 65 380 18 315 86 848 88 K1 K2 31 96 127 86 168 32 125 34 6 42 88 52 217 16 表中K1为1 水平总和 K2为2水平总和 1 2 4 6 7例分别为炮附子 白术 茯苓 芍药 生姜 3 5例分别为炮附子与白术 AxB 炮附子与茯苓 AxC 的交互作用例 结果表明 真武汤及各拆方组药物均能明显增加心衰犬的LV dp dtmax 增 强心肌收缩力 且有较强的利尿作用 以真武汤原方组合效力最佳 附子是强 心的主要药物 但方中其他各药与之有协同作用 方中之芍药以赤勺更能增强 全方效力 方中生姜的作用不容忽视 它能显著提高全方的强心利尿作用 D1 方比 D5 方仅多一味生姜 虽D5方附子用量加倍 而D1方的作用仍明显优于D5 方 说明生姜在方中起增效作用 这与 附子无姜不热 生姜辛散水气的传 统理论相符 采用正交设计 结合对所得数据的逐步回归分析 不但可观察方中各药物 对药效影响的主次 判断剂量 炮制等因素是否影响药效等 还可直接分析复 方药效物质基础 如宁黎丽等报道 12 将吴茱萸汤中的吴茱萸 人参 生姜 大枣按正交设计法组成药量配比不同的9个处方 表2 表2 吴茱萸汤的9种不同剂量L9 34 组方 11 编号 重量 g 吴茱萸 人参 生姜 大枣 1 9 18 9 10 2 9 9 4 5 5 3 9 27 13 5 15 4 4 5 18 4 5 15 5 4 5 9 13 5 10 6 4 5 27 9 5 7 13 5 18 13 5 5 8 13 5 9 9 15 9 13 5 27 4 5 10 将9个组方按同样方法进行水煎酒沉以及氯仿萃取 提取物甲醇溶解后 进行 HPLC分析 各方均分离出13个色谱峰 9个不同组方的13个色谱峰的数 值各不相同 将9个不同组方的水煎酒沉提取物配制成 1g ml 生药的浓度 各 组方均按口服0 2ml 10g 的剂量 同时进行抗醋酸致小鼠扭体的镇痛实验 另 按口服1 0ml 100g的剂量同时进行抗硫酸铜致家鸽呕吐的实验 9个不同组方均 显示有不同强度的镇痛和止吐作用 将9个不同组方的镇痛和止吐强度数值与 HPLC分析所得13个色谱峰数据组成原始数据矩阵 并进行逐步回归分析 在 镇痛回归分析中 有9个变量 色谱峰 以X表示 对方程作用显著 被保留 镇痛复相关系数RP 1 000 其中X4 X9 X10 X12与镇痛成正相关 可认为是镇 痛有效成分 X2 X3 X5 X6 X13与镇痛负相关 减弱镇痛效果 在止吐回归 分析中有9 个变量对方程作用显著 被保留 止吐复相关系数RP 1 000 其中 X3 X4 X5 X9 X10 X12与止吐成正相关 可视为止吐的有效成分 X7 X11 X13与止吐成负相关 减弱止吐效果 综合分析表明X4 X9 X10 X12 号色谱 峰的化学成分为吴茱萸汤镇痛 止吐的主要有效成分 这些成分的镇痛 止吐 作用的回归系数皆为正值 其含量增加 镇痛和止吐作用增强 而经对照品的 比对分析确认X9为吴茱萸碱 其它成分 如为已发现的天然化合物 也可以用 同样的方法确认化合物名称 如为尚未发现过的化合物 则可以进一步确定其 化学结构 上述例子说明 采用一定的数学设计模式 可用较少的药理实验次数多 因素多水平地分析复方中药与药的配伍关系 剂量选择 甚至于探明有效成分 所要说明的是实验设计时 药理实验指标的选择应尽可能与复方的功能 主 治相关 另外 指标应避免单一化 中药复方往往具有多效性 不能仅根据单 12 一指标的实验结果轻易作出对该方组成情况和各药所起作用的全面评价 一项 药理指标往往不能反映复方多环节 多靶点的作用特点 目前 用于复方药理 研究的数学模式除正交设计之外 还有优选法 均匀设计法等 对于正交表 均匀设计表的选择 数据的处理 显著性检验等问题 可参看有关专著 三 展望 应当指出 中药复方配伍关系的研究是探索复方物质基础 作用机理的一 个重要环节和一条合理的途径 其研究还需要一个漫长的过程 许多关键问题 尚待解决 许多研究思路 研究方法还不尽合理 有待完善 中药复方配伍规律的研究是一个复杂的系统工程 需要多学科的交叉参与 在进行配伍规律研究中 除药理学 化学学科的结合外还需要更多学科的交 叉合作 如在复方配伍的研究中 更多地采用恰当而准确的数学方法 有可能 帮助我们突破传统定性研究方法的局限性 在分析复方药效物质研究中取得事 半功倍的效果 此外 随着条件逐步成熟 应借助基因芯片及蛋白质组学和生 物信息学等技术平台 探索复方物质基础与差异基因和蛋白表达谱的内在联系 以建立从整体 细胞 蛋白质和基因水平上多靶点评价复方配伍的体系 复方配伍规律研究 是要揭示方中各药间的内在联系 达到优化组方 创立新方的目的 因此 复方研究应从以验证研究 验证经典配伍的有效性 合理性 逐渐向创制新方研究过渡 更进一步 复方配伍的研究应从饮片配伍 研究 过渡到有效成分或有效组分的配伍研究 改变中药粗 大 黑的外貌 提高其内在质量的可靠性 稳定性和疗效 中医的配伍理论是研究复方的理论依据 但临床疗效应是评价研究成果 的最客观标准 对前人的理论进行修正和发展不仅符合发展的一般规律 也有 利于提升现代中药产业的科技水平 对实现中医药现代化产生极大的促进作用 参考文献 1 闫润红 等 不同黄芪剂量的补阳还五汤对 气虚血瘀 家兔血粘度的影响 中药药理与临床 1995 15 1 7 2 夏云 等 生麦散复方化学动态变化与药效关系的研究 参麦散复方化 学的研究 I 中国中药杂志 1998 23 4 230 3 肖红斌 等 中药复方分析新方法及其应用 科学通报 1999 22 6 58 8 4 朱丹妮 等 生麦散复方化学动态变化与药效关系的研究 参麦散复方 化学的研究 II 中国中药杂志 1998 23 5 291 5 裴妙荣 等 四逆汤中甘草对附子解毒作用的相关性分析 中国中药杂志 13 1996 21 1 50 6 何桂霞 等 芍药汤配伍的化学变化 中国中药杂志 1998 23 7 432 7 项琪 等 芍药甘草汤在大鼠体内药代动力学研究 中国药学杂志 2000 35 9 615 8 黄熙 等 川芎伍用丹参煎剂对川芎嗪药物动力学的影响 中国中西医结合 杂志 1994 14 5 288 9 张琰 等 川芎煎剂 川芎丹参煎剂与四物汤在大鼠体内川芎嗪的血药浓度 测定 中医研究 1994 7 4 20 10 陈长勋 等 附子 川乌 四逆汤表观药动学参数的测定 中国医院药学杂 志 1990 10 11 487 11 袁久荣 等 计算机辅助分析四物汤补血作用