5-ALA-PDT对鼻咽癌细胞C666-1和CNE2的杀伤效应研究毕业答辩

2013届硕士研究生学位论文答辩,5-ALA-PDT对鼻咽癌细胞C666-1和CNE2的杀伤效应研究,2013年6月7日,论文结构,第一章 C666-1和CNE2细胞的EBV检测,第二章 5-ALA在NPC细胞中的药代动力学研究,第三章 鼻咽癌细胞对5-ALA-PDT的响应比较,第四章 全文总结与研究工作展望,绪 论,第一章 C666-1和CNE2细胞的EBV检测,研究背景及选题意义,论文工作重点介绍,论文工作总结,工作展望,致谢,汇报大纲,三,四,实验结果及分析,全文总结及研究工作展望,光动力治疗鼻咽癌研究背景,鼻咽癌（NPC）发病机理,EBV DNA(95%),NON-EBV DNA(5),细胞株C666-1,细胞株HK1,CNE2,光敏剂选择性潴留于病变组织 特定波长的光源实施靶向治疗,PDT具有双重选择性,EBV- C666-1,2007年，杨小民等人研究5-ALA和HpD介导的PDT对EBV+C666-1和EBV-CNE2 的响应情况,2009年，陈争等人研究HMME-PDT对EBV+ C666-1和EBV-CNE2细胞杀伤效应的实验,研究现状,PDT对CNE2的杀伤作用大于C666-1,研究结果：,CNE2对HMME的吸收能力高于C666-1,不足之处：,未对5-ALA和HpD在细胞中的潴留情况和亚细胞分布进行分析,研究结果：,PDT对CNE2的杀伤作用大于C666-1,原 因：,不足之处：,EBV对NPC-PDT疗效是否产生影响尚不明确,研究现状,细胞的生长状态以及新陈代谢情况会影响5-ALA合成PpIX，不同生长周期的同种细胞合成PpIX的能力不同。,生长曲线,几乎所有5-ALA-PDT实验都是在对细胞培养24h后开展，不能很好的反映5-ALA-PDT对细胞的杀伤效果。,不足之处：,选题意义(创新点),首次选用EBV+C666-1、EBV-C666-1和 CNE2 为研究对象，有望为探讨EBV在NPC-PDT的作用机制提供理论依据。,首次研究相同浓度5-ALA在不同生长期细胞内的药代动力学规律,2,2,5-ALA在NPC细胞中的药代动力学研究,5-ALA-PpIX在NPC细胞内的亚细胞分布的检测,5-ALA-PpIX在不同生长期细胞内荧光量的检测,2,5-ALA在NPC细胞中的药代动力学研究,5-ALA-PpIX在不同生长期细胞内荧光量的检测,24、48、72、96和120 h,5-ALA在NPC细胞中的药代动力学研究,5-ALA-PpIX在NPC细胞内的亚细胞分布的检测,2,共焦显微镜原理图,NPC细胞对5-ALA-PDT的响应评估,PDT实验,三株细胞以2105/孔的密度接种在六孔板中培养，24、48和72小时后进行PDT实验,细胞接种：（对照组和实验组）,照光光源：,光功率密度：15mW光 波 长：627nm,照光剂量：,09 、1.8、2.7和3.6 J/cm2,NPC细胞对5-ALA-PDT的响应评估,细胞存活率检测,用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其吸光度值,Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒,WST-8,5-ALA-PpIX在不同生长期细胞内荧光量,2,2,5-ALA-PpIX在NPC细胞内的亚细胞分布,小结 1,2,NPC细胞对5-ALA-PDT的响应评估,EBV+ C666-1在48 h，72 h的5-ALA-PpIX单细胞荧光量与24 h的荧光量基本相同，且对PDT的响应程度无显著差异。因此，本实验只给出EBV+ C666-1在细胞培养24 h后的PDT存活率。,5-ALA-PDT对EBV+C666-1细胞的杀伤作用最显著。,EBV-C666-1和CNE2细胞存活率比较,2,EBV-C666-1和CNE2细胞存活率比较,1997年，Tabata 等人提出定位于线粒体的5-ALA-PpIX 比定位于细胞膜的PpIX对PDT疗效更好。,小结 2,细胞中PpIX的含量和分布是影响PDT疗效的重要因素。,不同细胞、不同生长期的同一种细胞吸收5-ALA生成PpIX的能力不同，且EBV+C666-1对5-ALA的选择性高于EBV -C666-1,5-ALA-PpIX在C666-1细胞中主要分布在线粒体上，而在CNE2细胞中主要分布在细胞膜。不同鼻咽癌细胞内的5-ALA-PpIX的亚细胞分布有所差异,相同实验条件下，5-ALA-PDT对EBV+ C666-1的杀伤效果最明显。EBV- C666-1和CNE2细胞在分别培养48和72 h后进行PDT实验，杀伤效果最好且两者存活率无显著差异。,4,全文总结,1.比较EBV+C666-1和EBV-C666-1细胞的粘附、运动和迁 移能力，分析两株细胞的恶性生物行为，探讨EBV对鼻 咽癌细胞体外浸袭转移能力的影响。,2.利用不同亚细胞定位的光敏剂，研究当EBV+C666-1 和EBV- C666-1细胞内的光敏剂潴留浓度相同时，对 PDT的响应情况。,4,工作展望,为什么EBV+C666-1吸收5-ALA-PpIX高于EBV-C666-1？,EBV在NPC-PDT的作用机制 ？,4,研究工作的创新点回顾与总结,为5-ALA-PDT治疗肿瘤的研究提供一种新思路,承担项目,发表论文,郑惠芬，林黎升，郑秋萍，李步洪. 5-ALA-PDT对 两种鼻咽癌细胞EBV- C666-1和CNE2的杀伤效应 研究J. 中国激光医学杂志，2013，22(02)，69-73.,2. Chen D, Zheng H, Huang Z, et al. Light-emitting diode- based illumination system for in vitro photodynamic therapy J. I