磁珠分离细胞技术

磁珠分选技术,磁珠分选技术,免疫学+细胞生物学+磁力学基于抗体对抗原的特异性识别：免疫磁珠磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连：抗体偶联磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、Oligo dT磁珠在高强度、梯度磁场中达到磁性分离的目的：分离细胞、蛋白、核酸、细菌等,磁珠磁力架分离柱或分离试管 MACS，Dynal，BD，StemCell，R&D,磁珠分选系统,管式分选,Dynalbeads,Dynalbeads,分离试管,磁力架,柱式分选,未标记的细胞先行流出,MACS微珠进行磁性标记,撤去磁场，将标记的细胞洗出,磁性铁珠在分选器作用下形成强大的磁场，使含磁珠的细胞悬浮在磁场中,MACS d50nm，多聚糖和氧化铁组成的超顺磁化微粒；可被细胞生物降解而无需解离磁珠；分离丰度极小的细胞(10-8);Dynal d=4.5um2.8um1um，多聚材料包被的氧化铁超顺磁微球；均一性好；也适用于细胞活化；BD d200nm，超顺磁化微粒；包被了高质量的BD抗体；StemCell 管式；柱式;R&D d150nm，链酶亲和素磁珠，类胶体.,直标,间标,抗链酶亲和素磁珠,抗生物素磁珠,抗免疫球蛋白磁珠,抗荧光素磁珠,在没有直接标记微珠可选时使用自备抗体或配体的磁性分选中分选或去除用多个抗体混合物标记的多种细胞分选稀有细胞和抗原弱表达的细胞,间标扩展了分选范围,分选策略,阳性分选去除分选多重分选,用磁珠标记目标细胞,目标细胞滞留在分选柱内,目标细胞被洗脱，收集,目的细胞磁性标记后，作为阳性的标记组分直接分选出来。高纯度，高回收率，操作简单，尤其是富集稀少细胞。,分选前,阴性组分(未滞留在分选柱上的细胞),阳性组分(滞留在分选柱上的细胞),应用anti-CD19磁珠分选人外周血中的B细胞,非目的细胞磁性标记后，作为阴性的组分滞留在分选柱上，未标记的目的细胞被分选出来。,去除不需要的细胞缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞）不需要抗体和目的细胞结合，即细胞不被刺激（如T细胞、B细胞、NK细胞功能分析）需进一步通过阳性选择分选细胞亚群。,标记非目的细胞,非目的细胞滞留在分选柱上，被去除,生物素标记CD2, CD14, CD16, CD36, CD43, CD235a; 再加入链酶亲和素标记的磁珠,应用去除法分选人外周血中的B细胞,先去除非目的细胞，再进行阳性分选。非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原；要分选非常稀有细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选，可获得高纯度的目的细胞。,标记去除非目的细胞,标记目的细胞,洗脱目的细胞,应用：分选人外周血中的CD4+CD25+ T细胞,分选前,去除分选后,阳性分选后的阴性组分,阳性分选后的阳性组分,洗脱目标细胞,用标记1标记目标细胞,用标记2标记目标细胞,去除磁珠标记,洗脱目标细胞,进行多次连续阳性分选，进行新标记前先去除原来的磁珠标记。可进行多参数分选。,应用：分选人外周血中的CD3+CD56+ T细胞,分选前,第一次阳选,第二次阳选,优点：操作简单，高效快捷，无菌和细胞状态更有保证，回收率、纯度高。缺点：不能在分选的同时进行分析，分选过程中很难去除死细胞团块的干扰，难于同时进行多种标记物的分选。,分选前标本处理密度梯度离心(Ficoll, Percoll)（根据情况）溶血(溶解红细胞)过滤(单个细胞)分选标本：不含有死细胞