第十五章 甾体激素类药物的分析

第十五章甾体激素类药物的分析,基本结构：环戊烷并多氢菲,第一节 基本结构与分类,母核,分类：,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,肾上腺皮质激素,氢化可的松,肾上腺皮质激素,肾上腺皮质激素,醋酸地塞米松,雄性激素,丙酸睾酮,蛋白同化激素,苯丙酸诺龙,孕激素,孕激素结构特点,孕激素,雌激素 A环为苯环，C3位有酚羟基,A环为苯环,雌激素结构特点,雌激素,炔雌醇,第二节 理化性质与鉴别试验,一、性状特征1.性状与溶解度：白色至微黄色粉末或结晶性粉末，在水中不溶或几乎不溶。2.熔点：具有鉴定意义，还可以反应药物的纯度。3.比旋度：多有手性碳原子，具有旋光性。4.吸收系数：具有紫外吸收。,结构与性质,1. 肾上腺皮质激素,常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他米松等。,2.雄性激素及蛋白同化激素,常见药物有丙酸睾酮、甲睾酮、苯丙酸诺龙等。,3.孕激素,常见药物有黄体酮、炔孕酮、炔诺酮、炔诺孕酮等。,4.雌激素,常见药物有炔雌醇、炔雌醚、雌二醇、苯甲酸雌二醇等。,二、化学鉴别法,（一）与强酸的呈色反应,（二） 官能团的反应,1. C17 醇酮基(还原性),肾上腺皮质激素+碱性酒石酸铜 Cu2O（红色）,甾酮激素类药物,呈色,羰基试剂,2.酮基的呈色反应（C3酮基和C20酮基）,常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼,具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物,呈色,亚硝基铁氰化钠间二硝基酚、芳香醛,3.甲酮基,黄体酮,蓝紫色,亚硝基铁氰化钠,其他甾体,淡橙色不显色,黄体酮,蓝紫色,雌激素类药物,红色偶氮染料,重氮苯磺酸,4.酚羟基,含炔基的甾体激素,银盐沉淀,硝酸银,5.炔基的沉淀反应,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,6.有机卤素,茜素氟蓝 硝酸亚铈,硝酸-硝酸银,AgCl,呈蓝紫色,茜素氟蓝,蓝紫色,F-,7.酯的反应,C17或C21位上有羟基的酯，一般先进行水解，生成相应的羧酸，再根据羧酸的性质来进行鉴别。,戊酸酯戊酸（臭气）己酸酯己酸（臭气）,-3-酮 240nm,苯环 280nm,三、UV法,33003000cm-1,30002700cm-1,19001650cm-1,16501450cm-1,1000650cm-1,四、IR法,37503300cm-1,醋酸可的松,结构特征：43酮、C17 OHC20 酮基、 C11 酮基、醋酸酯,1630cm-1,3420cm-1,亚甲基、角甲基吸收带,1750cm-1,1232cm-1,1052cm-1,五、色谱法,薄层色谱法：主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法 要求：供试品溶液所显主斑点的颜色和位置 与对照品溶液的主斑点相同。,HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）,方法：对照品法 要求：在含量测定项下记录的色谱图中，供 试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,第三节 特殊杂质与检查,一、有关物质的检查（一）薄层色谱法,判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色,醋酸氟轻松 检查 其他甾体,取本品加氯仿-甲醇（9 ：1）制成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（9 ：1）稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取5l，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97 : 3）为展开剂，展开后晾干，在105干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试,液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。,1,2,特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度 接近。,（二）HPLC法（高低浓度对比法）,判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积,来源：合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,剧毒,原理：,S,二、硒的检查,三、有机溶剂（甲醇和丙酮）的检查,甲醇 不得出峰（灵敏度法） 检测限= 3.1ng,丙酮 5.0% 内标法 + 校正因子,GC法,四、游离磷酸盐的检查（对照品法）,地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠,原理：,方法：,第四节 含量测定,一、UV法,-3-酮 240nm（）,肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素,苯环 280nm（）,雌激素,二、比色法,1. 适用于非分光光度活性药物2. 使待测组分光谱位移，避免干扰3. 增加测定灵敏度4. 增加选择性,弱、非分光光度活性药物,强分光光度活性药物,化学反应,肾上腺皮质激素类,C17 -醇酮基,强还原性,（一）四氮唑比色法,（1）原理：,三苯甲臜深红,（2）种类,蓝四氮唑（BT）,双甲臜（暗蓝）,ChP TTC（RT） BP TTC（RT）USP BT,（2） 操作方法（对照品法）,基团对反应速度的影响,C11= O C11OH,C21OH C21-酯,C16无论何种取代基,（3）讨论,溶剂、水分的影响,含水量5%,含水10%A10%含水30%几无反应, 无水乙醇,O2与光线的影响,反应过程反应产物,怕光,避光、快速,O2影响颜色强度和稳定性,隔绝空气、 快速、充N2,碱的种类及加入顺序,反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行，以氢氧化四甲基铵的结果最佳。,加入顺序：,温度与时间,t、甲臜分解%,ChP 25 4045,BP 30 1h,（4）特点： 缺点 影响因素太多 优点 测定结果能指示药品的稳 定性（氧化及降解产物无此反应）,2. 其他比色法,异烟肼比色法 Kober反应比色法,异烟肼比色法 1. 原理 具有43酮基的肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素在酸性条件下与羰基试剂异烟肼缩合成异烟腙，在一定波长下具有最大吸收 。,2. 讨论（1）溶剂的选择：无水甲醇或无水乙醇（2）酸的种类：HCl、H2SO4、HAc均可，且酸与异烟肼的摩尔比为2:1时可获得最大吸收。,（3）水分、温度、光线和氧的影响： 水分使反应逆转，温度使反应加快，具塞玻管中反应，光线和氧不影响。（4）关于反应专属性： 在一定的反应条件下，只有C3-酮基起反应，故本法对4-3-酮甾体具有专属性。,Kober反应比色法 Kober反应是指雌激素与硫酸-乙醇反应呈色，在515nm附近有最大吸收。可用于雌激素的比色法测定。,ChP（2005）、USP、BP、JP均采用,RP-HPLC（大多内标法）,特点：用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快,三、HPLC法,1甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团 A. 酚羟基 B. 活泼次甲基 C. 甲酮基 D. C17 -醇酮基 E. 酮基,习题,2. 用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是A强酸性 B中性 C强碱性 D弱碱性 E以上都不对,3.问题（1）（5） A维生素B1 B醋酸地塞米松 C两者皆是 D两者皆不是 （1） 异烟肼比色法 （2）硫色素反应 （3）紫外分光光度法 （4）绿奎宁（Thaciaquin）反应,B,A,C,D,4. 可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A氨制硝酸银 B异烟肼 C红四氮唑 D硫酸 E重氮苯磺酸,5. 可用于甾体激体类药物的测定方法有 A高效液相色谱法 B四氮唑盐法 C紫外分光光度法 D异烟肼比色法 EKober反应比色法,6. 能与亚硝基铁氰化钠反应生成蓝紫色的药物是 A雌二醇 B黄体酮 C醋酸可的松 D苯丙酸诺龙 E以上都不对,7. 各国药典对甾体激素类药物常用HPLC或GC法测定其含量，主要原因是A.它们没有特征紫外吸收，不能用紫外分光光度法 B. 不能用滴定分析法进行测定 C. 由于“其它甾体”的存在，色谱法可消除它们的干扰D. 色谱法比较简单，精密度好E. 色谱法准确度优于滴定分析法,8异烟肼比色法测定甾体激素类药物时，药物的