抗核抗体检测及临床意义张瑾

抗核抗体检测及其临床意义,宁波市李惠利医院 张瑾,风湿免疫性疾病诊断方法症状、体征自身抗体影像学检查病理,风湿免疫性疾病相关自身抗体,抗核抗体谱（ANAs）类风湿关节炎相关抗体(RF, 抗CCP等)抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗自身免疫性肌炎谱自身免疫性肝病相关抗体谱抗磷脂抗体谱,抗核抗体谱检测的意义,有助于弥漫性结缔组织病的分类和诊断 抗Sm抗体是SLE的标记抗体； 抗Scl-70抗体是SSc的标记抗体； 抗Jo-1抗体是PM/DM的标记抗体；观察疾病活动度和治疗反应 抗dsDNA抗体研究发病机理 抗核小体抗体、抗dsDNA抗体,基本概念ANA荧光核型ANAs中的常见抗体,抗核抗体,自身抗体：指抗自身组织、器官、细胞及其成分的抗体ANA：指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。ANA存在一个谱。ANA新概念：抗核酸(Nucleic acid)和核蛋白(Nucleoprotein)抗体总称某些核抗原成分在核仁和 胞浆内比核质内更丰富 (如SSA/RO,Jo-1,rRNP等),ANA检测方法-IIF法,ANA滴度ANA核型,ANA滴度的意义,结缔组织病的粗筛（1:160）阳性标本还需进一步识别感染、肿瘤及5%正常人可出现低滴度阳性ANA阴性基本可以除外SLEANA滴度与疾病活动性无明确相关性,荧光显微镜下ANA的染色型别,均质型（H）核膜型（M)斑点型（S）核仁型（N）着丝点型（ACA）胞浆型（C）混合型,均 质 型 (H),抗组蛋白抗ds/ssDNA抗核小体主要出现在SLE中,均 质 型 (H),核膜 型 (M),主要与抗dsDNA有关与抗原底物片固定方法和备制过程有关出现在SLE中部分与抗核包膜蛋白有关抗板层素抗gp210 出现在PBC中,核膜 型 (M),与抗ENA成分有关 抗Sm 抗RNP 抗SS-A 抗SS-B出现在SLE、MCTD、pSS、SSc、PM/DM等,斑 点 型 (S),斑 点 型 (S),与抗核仁蛋白有关 抗Scl-70 抗RNA多聚酶I 抗PM-Scl出现在SSc中,核 仁 型 (N),核 仁 型 (N),与抗着丝点染色质有关 存在于有丝分裂期出现在SSc、CREST综合征等中,着 丝 点 型(ACA),着 丝 点 型(ACA),与抗胞浆成分有关抗核糖体P蛋白（rRNP）：出现在SLE中抗合成酶：Jo-1、PL-12、PL-7、OJ、EJ抗信号识别颗粒（SRP)抗线粒体：出现在PBC中抗高尔基体抗溶酶体等等,胞 浆 型 (C),见于PM/DM,胞 浆 型 (C),ANA荧光核型小结,均质型（H）：像大饼，SLE相关核膜型（M)： 像圈圈，SLE相关斑点型（S）：像藕片，抗ENA核仁型（N）：像纽扣，SD相关着丝点型（ACA）：像满天星，抗ACA胞浆型（C）：像空心大饼,SLE PM/DM PBC相关混合型：稀释后检测有助于区分,抗核抗体谱（ANAs）,ANAs,抗核不溶成分抗核可溶成分（抗ENA）抗染色体DNA蛋白抗核仁抗体,抗DNA抗体 抗核小体抗体 抗组蛋白 H1,H2A, H2B, H3,H4,抗Sm,U1RNP,SSA,SSB抗Scl-70,Jo-1,PM-1抗rRNP,PCNA.,dsDNAssDNA,抗着丝点抗体（ACA),抗5sRNA,抗dsDNA检测方法,以短膜虫或马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法(IIF) ：1:5短膜虫或马疫锥虫的动基体 内含有天然纯dsDNA，未经 人工处理，不含组蛋白与 ssDNA，抗原性纯一特异。优点：特异性好,抗dsDNA检测方法,酶联免疫吸附法（ELISA）: 100IU/ml 优点：敏感性最高 缺点：过于敏感，同时可能检测到ssDNA抗体和低亲和力dsDNA抗体,而 这两种致病力均不强 放射免疫法(Farr): 20% 优点：对高亲和度DNA抗体的检测优于CL-IIF 缺点：具有放射性，对技术人员身体造成一定影响蛋白印迹法（WB） 缺点： dsDNA抗原在纯化包备过程中可变性解链，变成ssDNA,导致假阳性结果不同方法检测SLE患者抗dsDNA抗体的结果：everything is possible 至少用两种方法做（报告结果时注明方法学）,互为补充。如：IIF法+ ELISA法,抗dsDNA抗体临床意义,SLE 的血清特异性抗体多有致病性（IgG型），与亲和力（高）有关与LN与SLE疾病活动性相关，活动期达90 可用于SLE 疾病活动期判断药物疗效观察与SLE急性皮疹、血管炎、浆膜腔炎、白细胞减少等有关,抗组蛋白抗体（AHA）（酶联免疫吸附法X2SD),可出现于多种结缔组织病，不具有诊断特异性SLE ：50% 活动期SLE 可达90.2% 与LN相关，与SLE疾病活动性存在一定意义的相关性药物性狼疮（DIL）：90% 如：异烟肼、苯妥因钠、青霉胺、雌激素等 仅有AHA而无其他ANA，强烈支持DIL其他结缔组织病：23-30% 如：RA、PBC、SSc等,核小体是真核细胞染色质的基本复制单位，由组蛋白与DNA组成。参与SLE发病机制：多克隆B细胞活化剂产生ANuA，先于其他ANA促进抗dsDNA与AHA形成参与LN的发生,抗核小体抗体（ANuA）,抗核小体抗体临床意义,SLE标记性/高特异性自身抗体 敏感性：58%-66% （优于抗dsDNA及抗Sm） 特异性：98%-100% （与抗dsDNA相当）用于SLE的早期诊断 ANuA 的产生早于抗dsDNA、AHA 抗dsDNA阴性者有1/41/2 ANuA阳性与LN相关，用于SLE疾病活动性监测,ANuA、抗dsDNA、AHA联合检测意义,抗ENA抗体 extractable nuclear antigen,可提取性核抗原成分：核酸与核蛋白，不含染色质成分功能：参与细胞内DNA复制、RNA转录、蛋白翻译 合成来源：无种属差异，有组织不均一性理化特性：对温度和RNA酶敏感（U1RNP、SS-A）意义：抗ENA抗体是ANAs中范围最广、最为重要的 一簇抗体，与疾病活动性大多无相关,抗ENA抗体检测方法,免疫双扩散法(ID)对流免疫电泳法( CIE)免疫印迹法(IBT)酶联免疫吸附法(ELISA)蛋白芯片（Protein chip）,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体,靶抗原：位于细胞核内的一组含尿嘧啶丰富的核糖核蛋白， Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点,抗Sm抗体与抗U1RNP抗体,抗Sm：SLE的标记性抗体，是前瞻性及回顾性诊断的指标。 阳性率低： SLE （30%）抗U1RNP：多种CTD均可出现，与手指肿胀、雷诺现象、肌炎、指端硬化等相关，但肾炎发生率低。 阳性率：40 - 60%，其中SLE(30-40%) , SSc(14%) , pSS (12%) , PM/DM (15%)高滴度抗U1RNP+抗Sm- MCTD抗U1RNP+ 抗Sm+ SLE抗U1RNP- 抗Sm+ 实验室误差? U1RNP丢失 ?,抗rRNP抗体,靶抗原：胞浆中60S核糖体大亚基上的磷酸化蛋白,抗rRNP抗体,SLE的高度特异性抗体，与SLE脑病相关常在SLE活动期存在,但不会随病情的缓解立即消失,可持续1-2年后才转阴。阳性率：24%可出现在SLE 早期（ANA及抗dsDNA阴性）,抗SSA与抗SSB抗体,靶抗原：位于同一小分子核糖核蛋白上的相邻结构 在不同的细胞周期，在细胞内的定位不同 （细胞核内和胞浆中均可存在）pSS的SS-A存在于细胞核内 SLE的SS-A存在于胞浆中 SS-B主要位于细胞核内,45KD 47KD48KD,抗SSA与抗SSB抗体,抗SS-A ：结缔组织病中出现频率最高的抗体（ 60 -75%），见于pSS（75%）SLE（25%） RA（10%） SSc （24%）PBC（20%）等抗SSB：常与抗SSA相伴出现，诊断pSS更特异，见于 pSS（40%）、SLE （10%）临床意义：与新生儿狼疮和先天性心脏传导阻滞、平 滑肌受累、光过敏、血管炎、皮损、紫癜、 淋巴结肿大、WBC减少有关ANA阴性的SCLE：常为抗SSA 抗体阳性。,抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体),靶抗原：组氨酸tRNA合成酶 胞浆中的磷酸蛋白,抗Jo-1抗体(抗PL-1抗体),PM/DM的标记抗体，阳性率20-30%抗体效价与疾病活动性相关抗Jo-1抗体综合征：急性发热,对称性关节炎,技工手,雷诺现象,肌炎（相对轻） ,肺间质病变 其他抗合成酶抗体：抗PL-7、抗PL-12、抗OJ、抗EJ,抗ScL-70抗体,靶抗原：DNA拓朴异构酶I的降解产物 主要存在核仁中SSc的标记抗体，阳性率20-30%多见于dSSc，病情进展快，提示预后不良与ILD、弥漫性皮肤硬化有关，而PAH少见,主要靶抗原：着丝点蛋白-B多见于ISSc，病程缓慢，提示预后较好CREST综合征：软组织钙化（C）,雷诺现象（R）,食道功能障碍（E）,指端硬化（S）,毛细血管扩张（T），但并非标记抗体，也见于孤立性雷诺现象、SS、PBC、AIH等国外文献：与PAH相关，而ILD少见 中国人群：未发现与PAH相关，但ILD少见,白伊娜，王迁等.中国系统性硬化症患者硬皮病相关自身抗体的检测及其临床意义. 中华微生物学和免疫学杂志.2011（5）:452-455.,抗着丝点抗体(ACA),Take Home Massage,ANA荧光核型对抗体性质范围有一定提示作用，尤其在靶抗原阴性时。ANA阴性而靶抗原阳性主要见于抗胞浆成分抗体，如：SS-A、Jo-1、rRNP、线粒体等。抗核仁型抗体常与SSc有关。抗均质型或核膜型抗体常与SLE有关。,Take Home Massage,抗dsDNA：SLE特异性抗体，与LN及疾病活动度 有关，至少两种方法联合检测（如： IIF法+ ELISA法）。抗核小体、抗组蛋白、抗dsDNA三抗体阳性者强烈 提示增殖性LN。与疾病活动性相关的抗体：抗dsDNA、抗核小体、 抗组蛋白、抗Jo-1、抗rRNP与预后相关的抗体：抗Scl-70（差）、ACA（好）,案例1,女性，34岁游走性多关节痛，雷诺现象半年RF 56U/L；抗CCP抗体阴性；ANA 1：320胸部CT：轻度肺间质病变诊断？治疗？,（核仁型）,UCTD ILD 发展为 SSc可能性大Pred+CTX,案例2,男性，50岁双腕关节炎、雷诺现象半年ANA全套：阴性；抗CCP、RF：阴性胸部CT：轻度肺间质病变 右腕关节MRI：骨髓水肿和滑膜炎诊断？,复查：ANA阴性，抗Jo-1弱阳性诊断：抗Jo-1抗体综合征Pred+T,案例3,女性 32岁 手指关节痛2月 ANA（+）S1:80 抗SSA（+）135 抗Ro52（+）110三大常规正常； ESR CRP 正常；补体正常；RF 87IU/ml；诊断？ 治疗？,CTD SLE待随诊，重用HCQ,案例4,女性，40岁4年前多浆膜腔积液、低补体血症、ANA 1：320、抗SS-A+、抗SS-B+，诊断为“系统性红斑狼疮可能性大”，予“pred+CTX”治疗好转后“pred 10mg qod +HCQ”维持。15天前新发面部皮疹（丘疹鳞屑型）、脱发；尿常规：PRO 阴性；尿四蛋白：轻度增高；补体下降（C3 50mg/dl C4 7.4mg/dl）；抗dsDNA（IF） 1：320 抗核小体 + 抗组蛋白+；诊断？治疗？,SLE，SLEDAI 8分， pred1mg/kg/day+CTX