冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处

精品文档 1欢迎下载 冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么 1 从一抗的选择方面来看 有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片 而有的一抗只能做冰冻切片 关键取决于所要检测的抗原稳 定性 有的抗原不稳定 经过组织固定 脱水 透明 浸蜡 包埋 脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤 所检测的抗原易被破坏 这时只能用冰冻切片来做 检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片 而那些稳定的抗原 能经受住石蜡切片的的考验 一般来讲也 可以用冰冻切片来做 总得来讲 对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原 用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切 片好一些 2 从研究目的来看 石蜡切片对组织细胞的定位很准确 而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构 并造成抗原的弥散 从而定位不准确 3 从抗原的保真性来看 冰冻切片对抗原的保真很好 而石蜡切片在组织固定 脱水 透明 浸蜡 包埋 脱蜡等过程中可能会 对抗原的性质造成影响 4 从操作步骤的繁琐程度看 染色过程冰冻切片简单 而石蜡切片要求脱蜡入水 抗原修复等过程 比较繁琐 5 总之 石蜡切片对标本的长期保存较合适 且组织细胞形态结构保持好 而冰冻切片适合对新鲜组织的制片 然后立即固定 染色效果较好 且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰 冰冻切片 frozen section 是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬 度 然后进行切片的方法 因其制作过程较石蜡切片快捷 简便 而多应用 于手术中的快速病理诊断 冰冻切片的种类较多 有低温恒冷箱冰冻切片法 二氧化碳冰冻切片法 甲醇循环制冷冰冻切片法等 这些方法 随着时代的 变迁 科技的发展 许多年前被认为是非常重要的技术 现在也逐步被淘汰 了 当然有些技术 如低温恒冷箱冰冻切片法 正在受到青睐 编编辑辑本本段段冰冰冻冻切切片片的的应应用用 1 在手术进行中 突然发现病人的病变与原诊断 原定手术方案不相 符合 或者怀疑时 需要病理确定 2 了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞 或者转移的程度 以利于确 定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施 3 对于已确定为恶性肿瘤的患者 则需要了解其手术范围是否足够 上下切缘是否有残存的肿瘤组织 4 在做剖腹探查时所发现的肿块或者异样的组织 5 显示组织中的脂肪和脂类物质 这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤 某些科研组织等 6 某些酶的显示如 ATP 酶 琥珀酸脱氢酶等 精品文档 2欢迎下载 7 神经病理学技术中的某些染色法如 Eager 氏法 Marchi 氏法 Cajal 氏法 Hortega 氏法和 Holzer 氏法等 8 对某些物质所进行的免疫荧光的研究 编编辑辑本本段段冰冰冻冻切切片片的的制制作作方方法法 低低温温恒恒冷冷箱箱冷冷冻冻切切片片制制作作法法 以 Shandon As 620 E 型恒温箱冷冻切片机为例 该机的箱面上有电子控 制板 装有即时冷冻键和除霜键 启动即时冷冻键 机器马上进行工作状态 并可持续 10mins 启动即时除霜键 可将工作间顶部后面的制冷栅上的霜除 掉 并可持续 15mins 有照明键一个 启动该键可照明工作间 有利工作及 观察组织的冰冻状况 配有消毒键一个 当进行一周的工作或者一天的工作 后 启动该键 可对工作间进行消毒 当每天工作完毕时 可启动密锁键 锁住工作间 除此之外 箱面的左边有四个按键 两个为快速自动进退键 两个为微小进退键 还有一个手动旋钮 调节修组织块时的进退 冷冻箱内左边的冷冻台 温度可达 60 左右 冷冻箱的中间为一台切片 机 工作间的温度在 0 30 间可任意调节 并在箱面上的荧屏显示出来 操操作作方方法法及及步步骤骤 取材 未能固定的组织取材 不能太大太厚 厚者冰冻费时 大者难 以切完整 最好为 24 24 2mm 取出组织支承器 放平摆好组织 周边滴上包埋剂 速放于冷冻台上 冰冻 小组织的应先取一支承器 滴上包埋剂让其冷冻 形成一个小台后 再放上细小组织 滴上包埋剂 将冷冻好的组织块 夹紧于切片机持承器上 启动粗进退键 转动旋 钮 将组织修平 调好欲切的厚度 根据不同的组织而定 原则上是细胞密集的薄切 纤维多细胞稀的可稍为厚切 一般在 5 10um 间 调好防卷板 制作冰冻切片 关键在于防卷板的调节上 这就要求操 作者要细心 准确地将其调较好 调校至适当的位置 切片时 切出的切片 能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道 平整地躺在持刀器的铁板上 这时便可掀起防卷板 取一载玻片 将其附贴上即可 应视不同的组织选择不同的冷冻度 冷冻箱中冷冻度的高低 主要根 据不同的组织而定 不能一概而论 如 切未经固定的脑组织 肝组织和淋 巴结时 冷冻箱中的温度不能调太低 在 10 15 左右 切甲状腺 脾 肾 肌肉等组织时 可调在 15 20 左右 切带脂肪的组织时 应调至 25 左右 切切含含大大量量的的脂脂肪肪时时 应应调调至至 3 30 0 冰冰冻冻切切片片时时的的注注意意事事项项 防卷板及切片刀和持刀架上的板块应保持干净 需经常用毛笔挑除切 片残余和用柔软的纸张擦 有时需要每切完一张切片后就用纸擦一次 因为 精品文档 3欢迎下载 这个地方是切片通过和附贴的地方 如果有残余的包埋剂粘于刀或板上 将 会破坏甚至撕裂切片 便切片不能完整切出 多例多块组织同时需做冰冻切片时 可各自放于不同的支承器上 于 冷冻台上冻起来 然后依据不同的编号 依序切片 这样做既不费时也不会 乱 放置组织冰冻前 应视组织的形状及走势来放置 所谓 砍柴看柴势 切片也是如此 如果胡乱放置 就不能收到很好的效果 组织块不须经各种固定液固定 尤其是含水的固定液 在未达到固定 前 更不能使用 临床快速冰冻切片 不须要预先固定 一是为了争取时间 二是固定了的组织 反而增加了切片的难度 如果使用未完全固定的组织做 冰冻切片 就会出现冰晶 这是因为含水的固定液在组织未经固定前 其中 的水份也可渗入到组织中去 当冰冻发生时 这些水份就存留于组织中 形 成了冰晶 当切片时 如果发现冰冻过度时 可将冰冻的组织连同支承器取出来 在室温停留片刻 再行切片 或者用口中哈气 或者用大拇指按压组织块 以此来软化组织 再行切片 另者 调高冰冻点 用于附贴切片的载玻片 不能存放于冷冻处 于室温存放即可 因为 当附贴切片时 从室温中取出的载玻片与冷冻箱中的切片有一种温度差 当 温度较高的载玻片附贴上温度较低的切片时 由于两种物质间温度的差别 当它们碰撞在一起时 分子彼此间发生转移而产生了一种吸附力 使切片与 载玻片牢固地附贴在一起 如果使用冷藏的载玻片来附贴切片 由于温度相 同 没有发生上述的现象 冰冰冻冻切切片片的的快快速速染染色色法法 冰冻切片附贴于载玻片后 立即放入恒冷箱中的固定液固定1 分钟后即 可染色 以往 为了防止切片脱落 当切片附贴于载玻片后 即用电吹风吹 干后再固定 根据实验对比认为这种做法欠妥未经固定的切片 强热作用后 蛋白发生变性 核内含有的物质由于热的作用融合在一起 染色后镜下分辨 不出核内的各种物质 冰冻切片附贴于载玻片后 立即放入恒冷箱中的固定 液固定 这样可以使切片中细胞内各种物质都在没有任何变化的情况下被固 定起来 核染色质清晰 核仁明显 其他物质都完好保存 方法 切片固定 30 秒 1 分钟 水洗 染苏木素 3 5 分钟 分化 于碱水中返蓝 20 秒 伊红染色 10 20 秒 脱水 透明 中性树胶封固 冰冻组织 1 2 分钟 切片 1 分钟 固定 1 分钟 染色共五分钟 总共在 10 分钟内完成快速制片过程 结果与 石蜡切片不相上下 精品文档 4欢迎下载 冰冻切片的方法还有很多种 如甲醇循环的半导体冰冻切片法 二氧化 碳冰冻切片法 半导体冰冻切片法和氯乙烷冰冻切片法等 这些方法在目前 来说已很少使用 因此在这里不作阐述 编编辑辑本本段段优优缺缺点点 一一 优优点点 1 简便 可以不需要对组织固定 脱水 透明 包埋等手续即可进行切 片 减少了一些中间环节 2 快速 用时短 3 组织变化不大 4 能很好保存脂肪 类脂等成分 5 能够比较完好地保存各种抗原活性及酶类 特别是对于那些对有机溶 剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好 二二 缺缺点点 1 不容易做连续切片 2 切取的组织不能过大 组织过大不容易冻结或者组织冻结不均 影响 切片及染色效果 3 不容易制作较薄的切片 4 组织块在冻结过程中容易产生水的结晶而影响细胞的形态结构及抗原 物质的定位 并且组织结构也不如石蜡切片清晰 编编辑辑本本段段冰冰冻冻切切片片操操作作中中的的注注意意事事项项 1 1 新新鲜鲜的的组组织织制制备备 组织尽可能新鲜 骤冷愈快愈好 才能避免冰晶 常用的骤冷剂有 CO2 气 78 丙酮干冰冷却的轻石油醚 乙烷和庚烷 80 液氮 190 液氮冷却的丙烷 19 液氮适用于组织化学 较安全 缺点 组织块易发生龟裂 2 2 固固定定组组织织的的制制备备 为防止水解酶和其他物质的移位 弥散 常用 4 24 小时的甲醛固定 能很好地保存酶类 但对许多脱氢酶和转移酶能灭活 故不宜使用 低温 冷甲醛短时间固定 10 分钟左右 固定 可显示琥珀酸脱氢酶 电镜出现后 需要保存细胞的超微结构 以 4 缓冲戊二醛 25 戊二醛 16ml 0 1M 二甲胂酸 pH7 84ml 蔗糖 8g 固定较好 这些固定液主要 用于水解酶 而不适于许多氧化还原酶和转移酶 3 3 恒恒冷冷箱箱温温度度 精品文档 5欢迎下载 一般在冷冻后 10 分钟 到接近冷室温度时再切 一般组织在 15 20 切片最易成功 每种组织有其合适的切片温度 刀的温度和冷 室温度 Pearse 及 Bancroft 的经验如下 组织 刀温度 组织温度 恒冷箱温度 肝 18 10 5 肾 15 8 5 皮肤 35 10 5 脑 18 5 5 固定组织一般高 3 5 度 4 4 切切片片机机的的使使用用 抗卷板的前缘与刀面须有足够的距离 使切片平滑通过 抗卷板略高于 刀面的最高点 可凭经验调整刀对组织的角度 一般新刀为20 操作程 序 先接通