第15章 _甾体激素类药物的分析

第十五章,甾体激素类药物的分 析,基本结构：环戊烷骈多氢菲,分类：,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,肾上腺皮质激素,氢化可的松,肾上腺皮质激素,醋酸地塞米松,雄性激素,丙酸睾酮,蛋白同化激素,苯丙酸诺龙,孕激素,黄体酮,雌激素,炔雌醇,一、结构与性质,1. 肾上腺皮质激素,常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他米松等。,2. 雄性激素及蛋白同化激素,常见药物有丙酸睾酮、甲睾酮、苯丙酸诺龙等。,3. 孕激素,常见药物有黄体酮、炔孕酮、炔诺酮、炔诺孕酮等。,4. 雌激素,常见药物有炔雌醇、炔雌醚、雌二醇、苯甲酸雌二醇等。,二、鉴别试验,（一）呈色反应,1. 与强酸的呈色反应,2. 官能团的呈色反应,甾酮激素类药物,呈色,羰基试剂,（1）C3酮基和C20酮基,常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼,异烟腙（黄色）,睾酮,肾上腺皮质激素药物,呈色,四氮唑盐OH,（2） C17 醇酮基,具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物,呈色,亚硝基铁氰化纳间二硝基酚、芳香醛,（3）甲酮基,黄体酮,蓝紫色,亚硝基铁氰化纳,其他甾体,淡橙色不显色,黄体酮,蓝紫色,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,（4）有机卤素,茜素氟蓝 硝酸亚铈,硝酸-硝酸银,AgCl,呈蓝紫色,茜素氟蓝,蓝紫色,F-,雌激素类药物,红色偶氮染料,重氮苯磺酸,（5）酚羟基,肾上腺皮质激素药物,Cu2O橙红色,碱性酒石酸铜,（二） 沉淀反应,Ag黑色,氨制硝酸银,1. C17 醇酮基,含炔基的甾体激素,银盐沉淀,硝酸银,2. 炔基,炔雌醇,3. 与硝酸-硝酸银的沉淀反应,含有氯取代的甾体激素类药物。,KOH,(三) 制备衍生物测定m.p.,香,（四）水解产物的反应,特臭,特臭,-3-酮 240nm,苯环 280nm,（五） UV法,33003000cm-1,30002700cm-1,19001650cm-1,16501450cm-1,1000650cm-1,（六） IR法,37503300cm-1,醋酸可的松,结构特征：43酮、C17 OHC20 酮基、 C11 酮基、醋酸酯,1630cm-1,3420cm-1,亚甲基、角甲基吸收带,1750cm-1,1232cm-1,1052cm-1,（七） TLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别,方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。,炔诺酮TLC图,（八） HPLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）,方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,三、 杂质检查,（一）游离磷酸（对照品法）,地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠,原理：,方法：,（二）甲醇和丙酮,甲醇 不得出峰（灵敏度法） 检测限= 3.1ng,丙酮 5.0% 内标法 + 校正因子,GC法,（三）雌酮,原理：Zimmermann反应,碱性KOH乙醇,高纯度,来源：合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,剧毒,原理：,S,（四）硒,（五）其他甾体,定义 与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”,2. 来源 原料、中间体、异构体、降解产物,3. 特点 （1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似,4. 方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）,四、含量测定,（一）UV法,-3-酮：240nm（）,肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素,苯环：280nm（）,雌激素,（二）反应分光光度法,1. 适用于非分光光度活性药物2. 使待测组分光谱位移，避免干扰3. 增加测定灵敏度4. 增加选择性,弱、非分光光度活性药物,强分光光度活性药物,化学反应,肾上腺皮质激素类,C17 -醇酮基,强还原性,1. 四氮唑比色法,（1）原理,三苯甲臜深红,蓝四氮唑（BT）,双甲臜（暗蓝）,ChP TTC（RT） BP TTC（RT）USP BT,（2） 操作方法（对照品法）,基团对反应速度的影响,C11= O C11OH,C21OH C21-酯,C16无论何种取代基,（3）讨论,溶剂、水分的影响,含水量5%,含水10%A10%含水30%几无反应, 无水乙醇,O2与光线的影响,反应过程反应产物,怕光,避光、快速,O2影响颜色强度和稳定性,隔绝空气、 快速、充N2,碱的种类及加入顺序,反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行，以氢氧化四甲基铵的结果最佳。,加入顺序：,温度与时间,t、甲臜分解%,ChP 25 4045,BP 30 1h,（4）特点： 缺点 影响因素太多 优点 测定结果能指示药品的稳定性（氧化及降解产物无此反应）,2. 其他比色法,异烟肼比色法 Kober反应比色法,ChP（2005）、USP、BP、JP均采用,RP-HPLC（大多内标法）,特点：用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快,（三）HPLC法,1甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团 A. 酚羟基 B. 活泼次甲基 C. 甲酮基 D. C17 -醇酮基 E. 酮基,复 习,2. 用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是A强酸性 B中性 C强碱性 D弱碱性 E以上都不对,3.问题（1）（5） A维生素B1 B醋酸地塞米松 C两者皆是 D两者皆不是 （1） 异烟肼比色法 （2）硫色素反应 （3）紫外分光光度法 （4）羟肟酸铁反应 （5）绿奎宁（Thaciaquin）反应,B,A,C,D,D,4. 可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A氨制硝酸银 B异烟肼 C红四氮唑 D硫酸 E重氮苯磺酸,5. 可用于甾体激体类药物的测定方法有 A高效液相色谱法 B四氮唑盐法 C紫外分光光度法 D异烟肼比色法 EKober反应比色法,6. 能与亚硝基铁氰化钠反应生成蓝紫色的药物是 A雌二醇 B黄体酮 C醋酸可的松 D苯丙酸诺龙 E以上都不对,7. 各国药典对甾体激素类药物常用HPLC或GC法测定其含量，主要原因是A.它们没有特征紫外吸收，不能用 紫外分光光度法 B. 不能用滴定分析法进行测定 C. 由于“其它甾体”的存在，色谱法可消除它们的干扰D. 色谱法比较简单，精密度好E. 色谱法准确度优于滴定分析法,8异烟肼比色法测定甾体激素类药物时，药物的呈色基团是 A. 酮基 B. 酚羟基 C. 活泼次甲基 D.