梅毒的实验室检查

2014-10-8,梅毒的实验室检查,梅毒（TP）生物学特性,1、小而纤细的螺旋状微生物，长520um,粗细0.2um2、有612个规则的螺旋基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕。3、螺旋整齐、数目固定、折光性强，较其他螺旋体亮，运动缓慢而有规律，有三种运动方式：围绕其长轴旋转运动；伸缩其螺旋间距离移动；弯曲扭动如蛇行。4、人是梅毒螺旋体的唯一自然宿主，梅毒螺旋体不能在体外培养繁殖，最适生存温度是37，离开人体很快死亡，煮沸、干燥、肥皂水以及一般的消毒剂如双氧水、酒精等很容易将其杀灭。,3,微生物形态 规则螺旋体 一端/两端钩状，菌体成8、S或C形 在暗视野显微镜下运动活泼 G-, Fontana镀银染色,染成棕褐色,4,形态与 染色,暗视野显微镜下观察,5,梅毒螺旋体,梅毒螺旋体，Fontana镀银染色,传播途径,梅毒患者的皮肤、粘膜中含梅毒螺旋体，未患病者在与梅毒患者的性接触中， 皮肤或粘膜若有细微破损则可得病。 获得性梅毒 （后天）早期梅毒病人是传染源，95%是通过不洁性交传染，少数通过接吻， 握手、输血、接触污染的内衣湿毛巾、茶杯、烟斗、哺乳、尿布等传染。 胎儿梅毒（先天 ）：孕妇体内螺旋体，一般在妊娠34月通过胎盘感染婴儿。,免疫性,特异性抗体感染2周后产生特异性IgM抗体, 不能通过胎盘感染4周后出现特异性IgG及IgA抗体,可通过胎盘，非特异性抗体刺激机体产生抗心磷脂抗体/反应素RPR 和 TRUST等方法可检出：57周或硬下疳后23周完全治愈的早期梅毒可再感染,梅毒的实验室检测方法,显微镜检测法： （1） 暗视野显微镜检查 （2） 镀银染色检查梅毒血清学检测法： （1）非梅毒螺旋体抗原血清试验 （2）梅毒螺旋体抗原血清试验,暗视野显微镜检查,标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮肤或粘膜的渗出液、淋巴结穿刺液观察：在暗视野显微镜下，先用低倍镜，再转至高倍镜，梅毒螺旋体在暗背景上呈白色发光，螺旋整齐，运动规律。结果解释：阴性结果不能排除梅毒 可能是：螺旋体数量不足 已用过抗生素或某些外用药 损害接近自然消除,暗视野显微镜下的梅毒螺旋体,螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最好方 法，WHO指定其为性病实验室必备项目之一,镀银染色检查,基本原理：梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体结果：棕褐色的梅毒螺旋体,梅毒血清学试验 非梅毒螺旋体抗原试验：VDRL、RPR、TRUST 梅毒螺旋体抗原试验：ELISA、TPPA、FTA-ABS,非梅毒螺旋体抗原试验,1、人感染TP后组织受到破坏,裂解出的一种类脂成分与梅毒螺旋体的蛋白质结合后成为抗原刺激机体产生抗类脂质抗体,即反应素。2、其他疾病也可产生此种抗体，可出现假阳性。3、敏感性低，尽60左右，有漏检现象。4、感染初期（4周内），可呈阴性。68周后达100 .但治愈后3 6个月可消失。5、反应素的量可反映组织的损伤程度，半定量检测可提示与梅毒的活动有关。,非梅毒螺旋体抗原试验,用心磷脂作抗原，测定血清中抗心磷脂抗体，亦称反应素。敏感性高而特异性较低，且易发生生物学假阳性。早期梅毒患者经充分治疗后，反应素可以消失，早期未经治疗者到晚期，部分病人中反应素也可减少或消失。目前一般作为筛选和定量试验，观察疗效，复发及再感染。,非梅毒螺旋体抗原试验,1、性病研究实验室试验（VDRL）：用心磷脂及胆固醇为抗原。缺点：抗原每天配制：血清标本加热灭活；结果在显微镜下观察。2、不加热血清反应素玻片试验（USR):也是VDRL抗原的改良，敏感性及特异性与VDRL相似，扔需显微镜下观察。3、快速血浆反应素试验（RPR):是VDLR抗原的改良，敏感性及特异性与VDRL相似，加入特制碳粉，可肉眼读出结果。4、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST):加特制的甲苯胺红，稳定、颗粒均匀，生产批间差小，结果易观察。,梅毒螺旋体抗原血清试验,用活的或死的梅毒螺旋体或其成分来作抗原，测定抗螺旋体抗体。敏感性和特异性均高，一般用作确证试验。检测血清中抗梅毒螺旋体IgG抗体，即使患者经过足够治疗，仍能长期存在，甚至终身不消失，此抗体无保护免疫力，血清反应仍持续存在阳性，不能用于观察疗效。,梅毒螺旋体抗原血清试验,荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS TEST)梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）梅毒螺旋体酶联免疫试验（TP-ELISA),FTA-ABS,间接荧光抗体技术较敏感和较特异的试验，公认为金标准梅毒螺旋体Nichols株作抗原，Reiter株进行吸收FITC荧光素标记的抗人抗体步骤多，对照多，结果判定需要经验,TPPA,特异性和敏感性均高，检测的是IgM抗体，但操作繁琐，费用高。TPPA取代TPHA明胶颗粒取代红细胞用于抗原的致敏，不需要吸收过程。非特异性凝集少对反应板、枪头要求高,TP-ELISA,抗原采用超声破碎的螺旋体抗原或重组抗原检测的是IgM或IgG抗体敏感性和特异性与其他试剂基本一致应作进一步评价,梅毒血清试验假阳性反应因素：技术性反应：标本的污染溶血操作失误生物学假阳性反应：感染性疾病：麻风、麻疹、疟疾、传染性肝炎、病毒性肺炎、传染性单核细胞增多症、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、非典型肺炎等，疾病发展过程中释放心磷脂到血液中，产生反应素。生理机能发生变化：妊娠可出现阳性，但这类患者血清反应滴度低，很少超过1：8。半年内渐转成阴性。,梅毒血清试验假阴性反应因素：,在梅毒螺旋体感染后12周内可呈阴性反应梅毒螺旋体感染不久即开始治疗晚期梅毒患者的血清中反应素含量低，敏感性低的梅毒血清试验易出现阴性反应在二期梅毒时RPR试验也可出现阴性反应，即前带现象,三种方法联合检测,TRUST ELISA TPPA,减少假阳性，假阴性,血清学检测的几个特点：,在最初的两周可能是阴性结果FTA、TPPA和ELISA在所有阶段都最敏感VDRL、RPR/TRUST在三期梅毒期可能为阴性VDRL-CSF仅用于诊断神经性梅毒,梅毒检测流程图,A1(ELISA),A1+,A1-,A2(PRP或TRUST）,A1+A2+感染：既往或现在,A1+A2-,A3（TPPA）,A1+A2-A3+可能是梅毒感染需结合临床表现,A1+A2-A3-基本排除梅毒潜伏期,美国2009年指南,梅毒血清学检测策略,W