HIV实验室安全防护

1,艾滋病实验室安全防护,2,艾滋病对医务人员健康的危险,3,医务人员有职业性HIV感染的危险,我国已经出现艾滋病发病的高峰, 大批病人到医院求医,病人中HIV阳性的比例越来越大.诊断和治疗的过程难免接触病人的血液和体液, 皮肤受伤的机会很大.调查显示医务人员发生针刺伤的频率是大约5-10%, 手术人员受伤的机会是12%以上.,4,血液和体液传播是HIV感染的主要途径,效率高已经出现职业性感染的病例：美国麻省护理学会主席Karen Daley就是因为在丢弃用过的针头时刺伤了手指不幸感染了HIV和和HCV,医务人员有职业性HIV感染的危险,5,经血或体液传播的职业暴露,经皮肤或粘膜暴露HIV、HBV、HCV感染为主传播方式：针刺或其他锐器损害* 病毒入皮肤抓伤、皮损、擦伤、烧伤* 病毒因意外溅入眼、鼻、口三种病毒不会经空气传播,6,美国对职业性HIV感染的研究,感染的人员: 检验人员, 护士,内科医生,外科技师, 透析医师,停尸房技师.感染的途径:皮肤或粘膜暴露传染性物质:血液, 血性体液,体液, 实验室浓缩的病毒使皮肤受伤的物品:注射或缝合针, 碎玻璃, 手术刀等,7,有传染性的体液包括,血液精液阴道分泌物脑脊液羊水胸水, 腹水心包液滑膜液一切有可见的血液污染的体液,8,没有传染性的体液是,唾液泪液汗液尿液粪便,9,HIV职业暴露感染率（平均感染率）,职业暴露后存在着感染HIV的危险性，但实际感染HIV的机率是很低的。有研究资料表明：皮肤破损： 0.33%（CI 0.2-0.5%）粘膜接触： 0.09%（CI 0.06-0.5%）,10,职业暴露预防的关键,一、实验室生物安全级别的正确设置二、做好实验室安全防护三、废弃物的处置和消毒四、实验室意外和事故处理,11,一、实验室生物安全级别,血清学检测（含初筛及确认实验室）、免疫学和核酸检测： II级生物安全实验室HIV分离、细胞培养及研究工作： III级生物安全实验室（BSL-3),12,二、实验室安全防护,（一） 个人防护及保健 1.防护服：白大衣、隔离衣、一次性工作服等 2.一次性手套、一次性口罩、安全防护眼镜及 冲眼器 3.专用工作鞋：鞋面覆盖足背，鞋底防滑 4.个人保健,13,二、实验室安全防护(cont.),（二） 实验室管理要求 1.建立安全制度 2.人员管理和培训 3.建立严格的保密制度并定期检查 4.严格质量管理 5.对存放试剂和有毒区域的监控 6.建立应付突发时间的措施,14,二、实验室安全防护(cont.),（二） 实验室管理要求 1.建立安全制度 实验室的仪器设备、建筑和设施的安全性应符合要求 制订安全工作制度或安全标准操作程序（S-SOP) 定期修订安全工作制度或安全标准操作程序及其实施情况的检查和修订，并有记录 制定意外事故处理预案，建立意外事故的登记报告制度 实验室主任负责组织对事故的调查、登记、处理和报告,15,二、实验室安全防护(cont.),（二） 实验室管理要求 2.人员培训和管理管理人员和所有检测人员要进行充足有效的技术培训须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安全教育实验室主任对区域及人员的合理安排，做好安全检查新入、外来人员进入实验室时须经过室主任的批准工作人员须进行年度采血检测HIV抗体和备案制度，血清应长期保留。,16,二、实验室安全防护(cont.),（二） 实验室管理要求 3.建立严格的保密制度并定期检查所有资料均应严格保密，如送检单、记录、报告单等检测人员应具有高度保密意识保密制度纳入年度考核，发现问题几时处理并根据情况修订保密制度 4.严格质量管理：做好安全操作及试剂选择、检测工作的质量控制；对检测报告须严格把关,17,二、实验室安全防护(cont.),（二） 实验室管理要求 5.对存放试剂和有毒物区域的监控存放试剂和有毒物的冷藏柜、冰箱、培养箱和容器在工作人员视线外地点时应上锁设置专门的储存阳性血清、质控品的冰柜或毒种库应上锁，专人管理,18,二、实验室安全防护(cont.),（二） 实验室管理要求6.建立应付突发事件的措施在紧急预案种要包括在紧急事件发生时通知相关领导和工作人员实验室主任和设备安全员要遵循有关规定，报告、调查和处理突发事件及可能发生的意外专业暴露,19,二、实验室安全防护(cont.),（三） 实验室的安全操作 1.在安排工作人员的实验室区域时，要根据其工作的种类和所涉及的生物试剂，对实验室环境做好安全检查。 2.进入实验室需穿隔离衣、戴手套，必要时戴防护眼镜。不要用手触摸暴露的皮肤、口唇、眼、耳及头发。 3.必要时可戴双层手套。手套破损时应立即丢弃、洗手并戴上新手套。,20,二、实验室安全防护(cont.),（三） 实验室的安全操作(cont.) 4.禁止口吸吸液管，须使用移液器 5.操作中有标本、检测试剂外溅时应及时消毒。对大量溅出的浓度高的传染物在清洁之前应先用1%次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦净。,21,二、实验室安全防护(cont.),（三） 实验室的安全操作(cont.) 6.工作完毕，要对工作台面消毒。工作台面应当用0.1%- 0.2%次氯酸溶液消毒；用消毒液洗后要干燥20min以上； 7.工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流 动水洗手。 8.血清及其它体液样品均应严格按要求妥善保存，HIV抗体阳性样品应做好标记单独保存。,22,二、实验室安全防护(cont.),（四）避免利器的使用 1.尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺伤。如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒处理； 2.尽量使用安全针具采血，如蝶形真空针，自毁性针具等，以降低直接接触血液和刺伤的危险性； 3. 应将用过的锐器直接放入耐刺、防渗漏的利器盒，针头直接放入坚固的容器内，消毒后废弃。,23,二、实验室安全防护(cont.),（五）样品的采集：所有的血液、血清、未固定的组织和组织液样品，均应视为有潜在传染性，都应以安全的方式进行操作。 1.小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的质量控制和参考物质。用后的包裹应进行消毒; 2.采血时一定要注意安全，谨慎操作，防止发生刺伤皮肤和造成外界污染;滤纸采样后要待血样干燥后再包装送检;,24,二、实验室安全防护(cont.),（五）样品的采集(cont.)3.离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶;4.室间传递的样品应为血清或血浆除特殊情况一般不运送全血；5.运送样品时应用WHO提出的三级包装系统，运送感染材料必须有记录。,25,二、实验室安全防护(cont.),（六）带入和带出实验室的物品 1.对所有带入实验室的物品都应进行检查。含有测试样品的包裹应在安全柜或送到合适的实验室方可打开; 2. 打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时要报告有关领导和专家; 3.检查样品的状况，如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。要将情况立即通知送样人。,26,二、实验室安全防护(cont.),（六）带入和带出实验室的物品 (cont.) 4.对血液和体液常规操作要在工作台上进行。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行； 5.在将HIV/AIDS样本转到其它实验室时，运送时应防止造成污染。送样品人应明确接收地点和接收人，安全将样品送到； 6.污染或可能造成污染的材料在带出实验室前应进行消毒。,27,三、废弃物处置和消毒,（一）废弃物处置 从艾滋病实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。,28,HIV对环境的抵抗力,HIV对外界环境中物理和化学因素抵抗力均较低,比乙型肝炎病毒(HBV)的抵抗力低得多.因此,对HBV的消毒和灭活方法对HIV均可使用对热的抵抗力对化学品的抵抗力对紫外线的抵抗力,29,对热的抵抗力,在室温(22-27)液体环境下可存活15天以上在54-56 时病毒活性约每20分钟下降1个对数TCID50(细胞的半数感染单位)56 30分钟可使HIV在体外对人的T淋巴细胞失去感染性,但不能完全灭活血清中的HIV经过60 3小时或80 30分钟作用,不能检出感染性病毒,对逆转录病毒灭活,WHO推荐100 20分钟,30,不同温度对HIV活性降低10倍所需的时间,31,对热的抵抗力,在-70 不加保护剂冷冻保存,其感染性可丧失.但若在 - 70 保存于35%山梨醇或50%胎牛血清(FBS)中可存活3个月以上美国CDC证明干燥环境中的HIV浓度在几个小时内降低1-2log(即降低9099)在干燥的室温下HIV的感染性持续时间可达3天以上,并按每小时1个对数级TCID50减少,但其RT酶活性的检出时间不超过3天,32,对化学品的抵抗力,HIV不耐酸,pH3.0时病毒滴度在10分钟下降4个对数HIV较耐碱,pH高达9.0时,病毒滴度下降甚微HIV对消毒剂、去污剂等化学因素一般敏感: 0.2%次氯酸钠 0.1%家用漂白粉 0.1%戊二醛 0.5%多聚甲醇等,5分钟可灭活HIV,33,对化学品的抵抗力,酒精具有良好的灭活作用: 30%酒精溶液5分钟 20%酒精10分钟,可灭活HIV 在室温中: 0.5%次氯酸钠或70%酒精只需1分钟即不能检出RT酶活性, 如用19%酒精处理病毒5分钟后,仍有1%RT酶可被检出0.08%氯化铵在10分钟内病毒滴度降至低于检出水平.,34,对化学品的抵抗力,0.1%羟丙酸-丙醇(BpL)、1:1000甲醛、50%乙醚、0.5%三硝基甲苯X-100均可使1x104-1x107感染剂量的制品中HIV全部灭活.去垢剂NP40在制备病毒蛋白时常规使用,HIV对其抵抗力很弱,HIV接触NP40 1分钟 内 ,其传染性降低8个对数TCID50. 吐温-20（2.5%）对HIV无灭活作用。标本经冷丙酮或甲醛及丙酮固定，可使标本中HIV灭活。,35,各种化学品对HIV灭活的作用,36,对紫外线的抵抗力,对紫外线或射线不敏感 紫外线、射线不能灭活HIV,37,三、废弃物处置和消毒,（二） HIV常用的消毒方法 1. 物理消毒方法 ： 高压蒸汽消毒: 121，保持15-20min 干燥空气烘箱消毒（干烤消毒）: 140，保持2-3h,38,三、废弃物处置和消毒,（二） HIV常用的消毒方法 (cont.) 2. HIV常用的化学消毒方法: HIV最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂（次氯酸钠，含有效氯2000-5000mg/L）、75%乙醇和2%戊二醛，保持10-30 min。废弃物缸、溢出物 ： 5000mg/L 次氯酸钠。 生物安全柜工作台面和仪器表面： 75%乙醇 污染的台面和器具：2000mg/L 次氯酸钠，或用过氧化氢 或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒,39,四、实验室意外和事故处理,意外发生了未导致个人伤害偶然发 生的危险，但也可能已经发生 了伤害。 事故发生了人身伤害。 意外和事故均可被分为小型和重大的,40,四、实验室意外和事故处理(cont),小型意外：少量潜在传染性物质漏到椅子上，常用于这种情况的有效处理措施是消毒污染处。 重大意外：任何情况下，如果怀疑有严重的意外都将被视为重要的，实验室必须被清空，锁上，并且实验室管理者要请教安全专家，听从他们的意见,41,四、实验室意外和事故处理(cont),皮肤刺伤或切割伤：立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用70乙醇或其它消毒剂消毒伤口。皮肤污染：用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70乙醇或其它皮肤消毒剂。粘膜污染：用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。衣物污染：尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。,42,四、实验室意外和事故处理(cont),污染物泼溅：发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。重大泼溅事故：疏散人员控制污染报告实验室领导、安全负责人确定消毒处理程序甲醛具有致癌作用，不宜用于生物安全柜和实验室的常规空气消毒，如认为适合，可对有可靠密闭性能的生物安全柜和/或实验室的低温蒸汽甲醛