保留骨骼的血管铸型标本腐蚀的最新方法：生物腐蚀法.doc

保留骨骼的血管铸型标本腐蚀的最新方法：生物腐蚀法保留骨骼的血管铸型技术是解剖学标本制作技术中最富有表现力的一种特殊技术,也是最难以掌握的解剖学技术之一 。其主要难点是灌注不易均匀，在腐蚀过程中结构易断枝,难以完整保留骨骼 。制作此类标本 ,关键在于采用合适的腐蚀方法 ,使标本的腐蚀程度恰到好处 ,既能保证腐蚀完全 ,不残留多余的软组织,又不造成过度腐蚀 ,对骨质损害不大，甚至不伤害骨骼 。通常采用自然腐蚀法 、碱腐蚀法和硫酸腐蚀法 ,上述方法各具特点 : 1 自然腐蚀法 a 腐蚀工具改进的自然腐蚀法灌注前 ,标本下放置一稍大的有孔木板以利流水和残渣漏出 ,板周围加木栏以防止搬动时滑脱 , 板中穿入尼龙绳以便搬动 。在灌注好的标本表面散在划线以扩大蛆虫进入渠道 。木箱底部加少量水 (12 cm) 以保证箱内湿度 ,利于蛆虫繁殖 ,同时避免标本浸水过深致使皮下脂肪皂化而延长腐蚀时间 。标本表面敷盖有孔纱布并将两端浸水以保持湿润 ,且不影响蛆虫活动 。b 关节固定的自然腐蚀法 关键在于采用克氏针 ,在自然腐蚀前对标本进行关节内固定 ,以利于保持骨骼的完整性 ,尤其是对关节和骨块较多的部位有较好的效果 。将标本灌注 、摆正体位、冷冻后 ,用手电钻打孔进行固定骨骼 。以上肢为例 ,内固定的部位是肘关节 、腕关节以及各掌指关节 , 视骨骼大小、粗细情况分别用不同直径的克氏针穿入相邻骨骼 。随后对标本进行自然腐蚀 , 再经冲洗、漂白、干燥后进行修理 ,除去多余的克氏针 。 c 明胶加固的腐蚀法 是在自然腐蚀法的基础上 ,用明胶溶液对标本进行加固 ,取得较满意的效果 。先将标本置于一有机玻璃盒内，经灌注后进行常规自然腐蚀。待腐蚀至皮下组织后，加入15的明胶溶液，用量以浸没标本为宜。在整个制作过程中须保持标本盒中的温度在2530左右，以保证明胶始终呈胶冻状，既能固定标本形态，又能维持一定湿度。此后，蛆虫从标本开始“咬”食，当“咬”食至明胶时，腐蚀工作已进行完全。2 碱腐蚀法 a 次氯酸钠腐蚀法采用次氯酸钠溶液制作带骨骼的血管铸型标本，达到了既保留骨骼和关节，又不损伤微细血管的目的。所用饱和次氯酸钠溶液可由氢氧化钠或碳酸钠溶液氯化或碳酸钠溶液与漂白粉复分解而得。其原理是利用次氯酸钠溶液的特性强碱性、强氧化性和相对较弱的腐蚀性。该法先用过氯乙烯填充剂灌注，待其充分硬固后，将标本完全浸泡在饱和次氯酸钠溶液中进行腐蚀，需注意不同部位的腐蚀时间因软组织的多少而不同。b 混合腐蚀法 采用次氯酸钠溶液先期处理后，再行自然腐蚀，从而充分结合了两种方法的优点。首先将灌注好的标本置入饱和次氯酸钠溶液中腐蚀处理（不超过10），然后拿出冲洗，用醋酸中和标本中残存的强碱性药液，为后续自然腐蚀的蛆虫繁殖提供一个良好的环境；之后再放入标本箱中进行自然腐蚀。C 氢氧化钙饱和的酒精碱腐蚀法 在传统的氢氧化钠（氢氧化钾）碱腐蚀法基础上进行改进，在冷却后的碱液中加入了乙醇和氢氧化钙。乙醇可在短时间内（h）分解脂肪而减少皂化物的产生，加快腐蚀速度；氢氧化钙则能沉淀在骨表面，减少碱对骨骼的腐蚀。首先将配制好的氢氧化钠（氢氧化钾）溶液冷却至室温，再按一定比例先后添加乙醇和氢氧化钙，配制成饱和浓度的氢氧化钙碱腐蚀液。而后根据标本各部位所含肌肉、脂肪量的不同，浸入腐蚀液中进行不同程度的腐蚀。d 多碱混合液腐蚀法 将氢氧化钙饱和的乙醇碱腐蚀法和次氯酸钠腐蚀法相结合，取得较满意的效果。原理是次氯酸钠对脂肪组织腐蚀快；氢氧化钾（氢氧化钠）溶液碱性强，对软组织腐蚀快；次氯酸钙既能增强对脂肪组织的腐蚀性，又能生成保护骨骼的氢氧化钙保护膜。此法将配制好的氢氧化钾（氢氧化钠）溶液冷却后按一定比例先后加入饱和次氯酸钠溶液和次氯酸钙配制成多碱混合腐蚀液，之后将标本各部位按软组织含量的差异进行不同程度的腐蚀。3 自然腐蚀法与碱腐蚀法的总结 对自然腐蚀法，进程缓慢(在南方一件标本需时约1.52 年,北方则更长) ,不宜用于对时间要求紧迫的科研资料的收集。如翻动时易折损铸型枝，骨骼完整性亦难以保持。且未使用腐蚀剂，仅靠蛆虫的咬食很难将软组织除净。此外，制作标本的环境没有得到改善（存在臭味），所需时间仍偏长（半年左右）。另外，腐蚀不彻底、环境较差、时间偏长等自然腐蚀法的固有问题仍未解决。若要从根本上改变自然腐蚀法的固有缺陷，采用腐蚀剂是必不可少的。 但传统的碱腐蚀法易丢失细小的铸型血管，而次氯酸钠腐蚀法则能将其较完整地保留。同时，该法制作周期短，对脂肪腐蚀快；骨质损害轻微，标本腐蚀彻底；无需漂白；无蛆虫滋生。但由于次氯酸钠腐蚀性较强，覆盖软组织较少的骨骼容易受损，且初期会产生大量皂化物和反应物，需额外采取保护措施。此外，次氯酸钠见光受热易分解，对操作环境构成了限制。 综上所述，制作保留骨骼的血管铸型标本，首先要完好地保留铸型的血管，这是制作任何铸型标本都应遵循的前提。首先要选择一个良好的腐蚀方法。尤以改进的碱腐蚀法为佳，但搬动时仍须小心，尤其是对血管较细密的部位。其次，从保持骨骼的完整性和正常位置来看，关节固定改进的自然腐蚀法相对其他几种方法更有效，而后几种方法则通过小血管支对小块骨骼的网络作用间接维持骨骼的完整性。再次，从环境质量和制作周期考虑，改进的自然腐蚀法仍存在腐蚀不彻底、环境较差、时间偏长等问题，而改进的碱腐蚀法则能有效避免，但同时带来腐蚀不均及产生皂化物等新问题，需采用混合腐蚀法和多碱混合液腐蚀法加以解决。4. 基于自然腐蚀与碱腐蚀法的种种不足，我们提出了生物腐蚀标本的战略，经11年的努力攻克了几大难点得出了很好的效果。以上肢为例：用内外固定法将肘关节、腕关节、掌指关节固定，摆放成解剖位。取一水箱，最好是能将上肢刚好放入为准，利用加热及温控投备保持水为恒温。取小水泵，能使水在其作用下缓慢流动为止，用碱调节水的酸碱值，加入一定量的生物酶，用碱定期调节酸碱度，一个月左右的时间即可达到腐蚀完全的标准。原理：生物酶将蛋白质催化水解成氨基酸5.保留骨骼的血管铸型腐蚀方法对比表：自然腐蚀碱腐蚀生物腐蚀灌注后标本要求无以表皮不干燥为准以表皮不干燥为准腐蚀时间周期1.52年由碱液浓度大小及标本大小情况而定小件标本：1个月头部标本：45天是否生成皂化物有一定量的皂化物有一定量的皂化物无腐蚀过程中是否需要挪动标本需要经常不需要腐蚀剂过程中是否有毒大量微生物 无无对骨骼损伤程度有可能腐败腐蚀部份骨组织无骨骼是否钙化钙化钙化无钙化对骨骼是否有漂白作用无有，且骨表面粗糙 有腐蚀过程中是否破坏血管不破坏细小血管破坏细小血管不破坏腐蚀是否均匀