04 【参考】放免分析基本原理

放射免疫分析 临床免疫教研室鲍会静Kris 10713放射免疫分析的基本原理 Content 放射免疫分析基本原理 放射免疫分析概述竞争性分析的基本原理非竞争性分析的基本原理两种分析方法的比较 放射免疫分析 Radioimmunoassay RIA 简称放免或放免法 是一种在无须采用生物测定方法的情况下用于检测抗原的实验室测定方法 体外实验 SolomonAaronBersonandRosalynSussmanYalowRosalynSussmanYalowinsulinRIA 放射免疫分析概述 RIA检测技术可以达到10 9 10 12 放射免疫分析 Radioimmunoassay RIA 广义范围 RIACPBARRAIRMA 分析原理分类 竞争性免疫分析非竞争性免疫分析 放射免疫分析概述 竞争性免疫分析基本原理 RIA如果标记抗原与非标记抗原对同一抗体有相同的亲和力 则二者在同一反应系统中就会发生与特异抗体的竞争性结合 竞争性分析的基本原理 Ag Ag Ab Ag Ab 标记抗原 抗体复合物 Ag Ab 非标记抗原 抗体复合物 1Ag和Ag 同时存在 并均可与Ab反应2Ag Ag Ab的结合位点 Ag 或是Ag 竞争性免疫分析基本原理 RIA 竞争性分析的基本原理 Ag Ag Ab Ag Ab 标记抗原 抗体复合物 Ag Ab 非标记抗原 抗体复合物 1Ag的量与可以测量的Ag Ab的量形成某种函数关系 2有关于Ag的量的剂量曲线 3获得Ag的未知浓度 竞争性免疫分析剂量反应曲线基于抗原抗体反应遵循质量守恒原则反应物与产物之间是动态平衡关系质量作用定量 lawofmassaction 反应的反应速率与各反应物的浓度的幂的乘积成正比 其中各反应物的浓度的幂的指数即为元反应方程式中该反应物化学计量数的绝对值 竞争性分析的基本原理 NO2 CO CO2 NOr k NO2 CO 式中r为反应速率 NO2 CO 分别为反应物NO2和CO的浓度 k称为反应的速率常数 根据质量作用定律 该反应的级数与反应的分子数是相等的 竞争性免疫分析剂量反应曲线YalowandBerson推导 竞争性分析的基本原理 k1 Ag Ab Ag Ab k2FB则 K k1 k2 Ag Ab Ag Ab B F Ab0 一B 移项 B F K Ab0 一B F 未结合抗原的摩尔浓度 B 结合抗原 或抗体 的摩尔浓度K 平衡常数 Ab0 抗体位点的初始摩尔浓度 Ab Ag Ab 如上式 B F与B之间应为线性函数关系 竞争性免疫分析剂量反应曲线Ekins推导 竞争性分析的基本原理 设 p 标记物加待测物的初始浓度 q 特异性结合物的初始浓度 B 根据放射性测量算得的结合百分率 F 根据放射性测量算得的游离百分率R B FB F 1 根据质量作用定律 k1 Ag Ab Ag Ab k2 竞争性免疫分析剂量反应曲线抗血清的不统一系统特异性结合物或者是待测物的亲和力 现举人血清TSH放射免疫分析实际测定的计量反应曲线如下 竞争性分析的基本原理 RIA操作流程 动态平衡体系中 Ag与Ag具有同样的免疫活性和结合反应能力 Ag和Ab的量恒定Ag Ag的分子数大于抗体的分子数 Ag与Ag相互竞争同Ab结合 彼此抑制 待测Ag与 AgAb呈负相关函数关系 RIA操作流程 RIA竞争抑制曲线类型注 横坐标为标准品的浓度或浓度的对数 非竞争性免疫分析基本原理 IRMA放射性核素标记在抗体上 所用的标记抗体与待测抗原相比为过量 IRMA不存在竞争待测抗原的量与抗原 标记抗体复合物的量成正相关 非竞争性分析的基本原理 Ag Ab Ag Ab Ab B F 非竞争性免疫分析基本原理 IRMA单位点双位点夹心法 非竞争性分析的基本原理 非竞争性分析的基本原理 双位点IRMA 单位点IRMA 非竞争性免疫分析剂量反应曲线缓冲液中 待测物质 过量标记抗体 非竞争性分析的基本原理 Ag Ab Ag Ab P Q PQ K PQ p PQ q PQ PQ 2 PQ p q 1 K pq 0此即