动物细胞培养PPT课件

专题2 2动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术手段 动物细胞培养 基础 动物细胞融合 生产单克隆抗体 核移植 2 2 1动物细胞培养和核移植技术 一 动物细胞培养 为什么要进行动物细胞培养 材料一 在治疗烧伤病人时 通常是取病人的健康皮肤进行自体移植 对于大面积烧伤的病人 自体健康皮肤非常有限 使用他人皮肤来源又不足 且会产生排斥反应 怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢 材料二 许多动物细胞能分泌蛋白质 如抗体等 但是 单个细胞产生的蛋白质很少 怎样才能获得大量的分泌蛋白呢 什么是动物细胞培养 具体培养过程 1 为什么要把动物组织分散成单个细胞 完成44页两个问号 2 什么叫细胞贴壁 什么叫接触抑制 3 什么叫原代培养 什么叫传代培养 4 总结出具体的培养过程 任务 阅读教材第44 46页第一段时间 4分钟问题 就是从动物机体中取出相关组织 将它分散成单个细胞 然后 放在适宜的培养基中 让这些细胞生长和繁殖 1 概念 一 动物细胞培养 2 培养过程 为什么要把动物组织分散成单个细胞 怎样分散成单个细胞的 完成44页两个问号 成块的组织中细胞与细胞靠在一起 彼此限制了细胞的生长和增殖 另外 单个细胞所需的营养容易供应 其代谢废物容易排出 所以分散成单个细胞后培养 用胰蛋白酶分散细胞 说明细胞间的物质主要是蛋白质 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2 当pH大于6时 胃蛋白酶就会失去活性 胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7 2 8 4 多数动物细胞培养的适宜pH为7 2 7 4 胃蛋白酶在此环境中没有活性 而胰蛋白酶在此环境中活性较高 因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化 44页两个小问题的答案 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外 长时间的作用也会消化细胞膜蛋白 对细胞有损伤作用 因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间 3 几个重要的概念 细胞贴壁 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上 单层 要求 培养瓶 皿 内表面光滑 无毒 易于贴附 接触抑制 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时 细胞会停止分裂增殖 这种现象称为细胞的接触抑制 原代培养 传代培养 贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理让细胞继续培养 这样的培养过程通常被称为传代培养 即从原培养瓶内转接到新的培养瓶内过程 通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养 细胞株 传到40 50代后有部分细胞遗传物质发生了变化 具有癌细胞的特点 失去接触抑制 可能在培养条件下无限制的传代下去 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞 能传到40 50代 其遗传物质没有发生变化 细胞系 注意 目前使用的细胞通常为10代以内 以保持细胞正常的二倍体核型 动物胚胎或幼龄动物的组织 器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 细胞悬浮液 10代细胞 部分细胞 癌变 无限传代 动物细胞培养不能最终培养成动物体 50代细胞 原代培养 传代培养 细胞贴壁 剥离 分瓶 细胞 培养过程 分化程度低 增殖能力强 去掉组织间蛋白 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 细胞贴壁生长 随细胞增多 出现接触抑制 部分细胞癌变 失去接触抑制 无限传代 动物细胞培养都需要满足什么条件 任务 阅读教材第46页黑体字后面时间 4分钟问题 4 动物细胞培养条件 无菌 无毒的环境 添加一定量的抗生素 定期更换培养液 营养 葡萄糖 氨基酸 无机盐 维生素 动物血清 微量元素等 温度和PH 温度36 5 0 5度 pH7 2 7 4 气体环境 O2和CO2 95 空气和5 CO2 离体培养的细胞对微生物和有毒物质没有防御能力 保证细胞顺利的生长增殖 CO2培养箱 哺乳动物离体细胞培养和体内细胞一样 需要在恒足温度下才能生存 温差变化一般不应超过0 5度 因此培养箱对温度应具有较高灵敏度 CO2培养箱的优点在于能恒定地供应一定量的CO2 一般5 即可维持培养液PH值稳定 培养基的类型 天然培养基 合成培养基 营养价值高 成分复杂 成分明确 便于控制试验条件 5 动物细胞培养技术的应用 1 生产蛋白生物制品 病毒疫苗 干扰素 单克隆抗体等 4 用于检测有毒物质 2 获得大量自身的皮肤细胞 用于植皮 3 作为基因工程的受体细胞 5 用于生理 病理 药理等方面的研究 为治疗和预防疾病提供理论依据 6 植物细胞和动物细胞培养的比较 获得细胞或细胞分泌蛋白 细胞的全能性 细胞株 细胞系 植物体 快速繁殖 培育无病毒植株等 葡萄糖 动物血清促生长因子 蔗糖 植物激素 液体培养基 固体培养基 细胞增殖 动物细胞培养 特点 原理 概念 贴壁生长 接触抑制 培养条件 无菌无毒 营养 温度 PH 气体环境 过程 细胞增殖 1 在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 A 细胞系B 细胞株C 原代细胞D 传代细胞 2 动物细胞工程技术的基础是 A 动物细胞融合B 单克隆抗体C 胚胎移植D 动物细胞培养 A D 3 用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 其主要原因是这样的组织细胞 A 容易产生各种变异B 具有更强的全能性C 取材十分方便D 分裂增殖的能力强 D 4 动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于 A 培养基不同 B 动物细胞培养不需要在无菌条件下进行 C