6.NSE生产工艺规程

本文未经允许不得翻版或转送 第 1 页 共 6 页 苏州新波生物技术有限公司文 件 编 号 生产工艺规程 Q SB ZDQ SB ZD 7 7 PD TWP001 PD TWP001 版本 A 0分发编号 页数 6 N NS SE E 定定量量检检测测试试剂剂盒盒 主管部门 生 产 部 编 制 人 审 核 人 批 准 人 批准日期批准日期发布日期发布日期实施日期实施日期 苏州新波生物技术有限公司 文件编号 Q SB ZD 7 PD TWP001 版本状态 A 0 本文未经允许不得翻版或转送 第 2 页 共 6 页 神经元特异性烯醇化酶 神经元特异性烯醇化酶 NSENSE 定量检测试剂盒 定量检测试剂盒 时间分辨免疫荧光法 时间分辨免疫荧光法 生生 产产 工工 艺艺 规规 程程 一 总述一 总述 1 1 名称名称 中文 神经元特异性烯醇化酶 NSE 定量检测试剂盒 英文 Time resolved immunofluorometric assay kit for NSE 2 2 作用和用途作用和用途 定量检测血清中 NSE 含量 用于 SCLC 的鉴别诊断等 3 3 分离方法分离方法 包被抗体的固相分离法 4 4 试剂盒的组成 试剂盒的组成 1 包被有抗人 NSE 单抗的 96 孔板 一块 12 孔 8 2 铕 Eu3 标记的抗 NSE 单抗 铕标记 一瓶 1 0 ml 3 校准品 A B C D E F 一套 0 5ml 瓶 冻干品 4 浓缩洗液 一瓶 40ml 5 荧光增强液 一瓶 20ml 6 分析缓冲液 一瓶 20ml 7 吸头 20 支 8 说明书 一份 5 5 试剂盒的技术指标试剂盒的技术指标 5 1 物理性能 液体组分应澄清 无沉淀或絮状物 冻干组分应呈结晶或粉末状 所有组分应无包 装破损 5 2 准确性 试剂盒校准品与相应浓度的企业标准品同时进行分析测定 用 Log B log 拟合 要 求两条剂量 反应曲线不显著偏离平行 以 NSE 企业标准品为对照品 试剂盒校准品 的实测效价与标定效价的比应在 0 900 1 10 范围内 5 3 剂量 反应曲线的线性 用 Log B log 或其他数学模型拟合 在校准品 B 与校准品 F 之间的浓度范围内 剂 量 反应曲线相关系数 r 的绝对值应不低于 0 9900 5 4 精密度 苏州新波生物技术有限公司 文件编号 Q SB ZD 7 PD TWP001 版本状态 A 0 本文未经允许不得翻版或转送 第 3 页 共 6 页 分析内精密度 CV 应不高于 15 0 分析间精密度 CV 应不高于 20 0 5 5 分析灵敏度 试剂盒分析灵敏度为最低检测限不大于 0 7ng mL 5 6 质控血清测定值 应在允许范围内 5 7 特异性 与 AFP CEA CA125 交叉反应小于 0 7ng mL 5 8 稳定性 37 放置 7 天 测定结果应符合上述 5 1 5 7 项要求 6 6 正常值 病理值正常值 病理值 以本试剂盒对 504 例正常人血清进行测定 NSE 临界值为 14 00ng ml 7 7 原材料及规格 原材料及规格 名称 规格 厂家 1 抗 NSE Ab 中检维康 2 NSE 抗原 纯品 Hytest 3 96 孔板 钴辐射活化板 国产 4 Tris 三羟甲基氨基甲烷 进口 国产 5 盐酸 G R 上海化学试剂公司 6 鸡冠花红 A R 上海试剂三厂 7 叠氮钠 G R 上海生工生物工程有限公司 8 牛 球蛋白 SIGMA 9 双馏水 自制 10 Tween20 上海生工生物工程有限公司 11 BSA 进口 上海赛达生物药业有限公司 12 无水碳酸钠 A R 上海虹光化工厂 13 DTTA Eu 国产 14 碳酸氢钠 A R 上海虹光化工厂 15 氯化钠 G R 上海化学试剂公司 苏州新波生物技术有限公司 文件编号 Q SB ZD 7 PD TWP001 版本状态 A 0 本文未经允许不得翻版或转送 第 4 页 共 6 页 16 醋酸钠 A R 上海化学试剂公司 17 醋酸 A R 上海化学试剂公司 18 乙二胺四乙酸二钠 EDTA A R 上海化学试剂公司 19 荧光增强液 自制 20 浓缩洗液 自制 二 二 固相抗固相抗 NSENSE McAbMcAb 的制备的制备 工作液制备工作液制备 移取一定量抗 NSE McAb 于所需体积的碳酸钠缓冲液中 0 05 mol L pH9 5 使其浓度约为 5 g ml 封闭缓冲液的配制封闭缓冲液的配制 在 50mmol L Tris HCl 缓冲液 pH7 8 中加入一定量的 BSA NaN3 使 BSA NaN3 3的浓度分别为 1 0 05 将抗 NSE McAb 工作液按每孔 100 l 加入微孔 室温静置 24 小时 注意要防止水分蒸发 以洗板机吸干 洗涤二次 将封闭缓冲液按每孔 150 l 加入微孔 室温封闭 12 小时 注意 要防止水分蒸发 然后倒掉封闭液 洗衣机甩干 抽干 热封 三 抗三 抗 NSENSE McAbMcAb 的标记和分离的标记和分离 标记标记 将抗 NSE 抗体于 4 8 用 0 1 mol L 碳酸盐缓冲液 含 0 9 NaCl pH 9 6 透析 36 小时 取出抗 NSE 抗体 在电磁搅拌下按抗体 DTTA Eu 5 1 的比例加入 DTTA Eu 成分混 匀后静置 36 小时 分离分离 Ab Eu 与游离 DTTA Eu 通过 Sephadex G50 8cm Sepharose 6B 38cm 色谱柱 1 5 50cm 分离 洗脱液为 TSA 0 05M Tris HCl pH 7 8 0 05 NaN3 0 9 NaCl 分离 过程以核酸蛋白仪监控 四 四 NSENSE 血清校准品和质控品的配制血清校准品和质控品的配制 校准品稀释液的配制 校准品稀释液的配制 NaAc 1 60g HAc 0 480mL NaCl 0 9g BSA 3 0g NaN3 0 05g 纯水 100mL pH 值为 5 0 校准品配制校准品配制 用缓冲液将 NSE 浓缩液稀释成 A B C D E F 六个点 浓度分别约 0 1 5 20 100 500ng mL 以 NSE 企业标准品校正 分装 冷冻干燥后于 2 8 保存 质控品的配制 质控品的配制 在人血清中加入不同量的 NSE 溶液 使质控品各点的浓度分别 苏州新波生物技术有限公司 文件编号 Q SB ZD 7 PD TWP001 版本状态 A 0 本文未经允许不得翻版或转送 第 5 页 共 6 页 为 7 20 80ng mL 以企业标准品校正 分装 冷冻干燥后于 20 贮存 五 实验所须缓冲液的配制五 实验所须缓冲液的配制 NSENSE 分析缓冲液分析缓冲液 50mmol l Tris HCl pH 7 8 含 2 BSA 0 9 NaCl 0 1 Tween20 40umol LEDTA 0 05 NaN3 0 05 牛 IgG 0 15 小鼠血清 0 005 鸡冠 花红 2 8 贮存 六 血清六 血清 NSE DELFIANSE DELFIA 的分析步骤的分析步骤 1 试剂准备 1 洗涤液 将 40ml 浓缩洗液和 960ml 蒸馏水在干净的洗液瓶中混合 作为工作洗涤 液 2 校准品 在校准品中加入 0 5ml 去离子水 复融约 10 分钟 混匀备用 3 铕标记物 使用前一小时内 按照需要用量以分析缓冲液稀释铕标记 1 20 4 将分析缓冲液 校准品 待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温 20 25 2 吸取 25 l 校准品和待测样品 加入反应板微孔内 3 在各微孔内加入 100 l 已稀释的铕标记溶液 在室温 20 25 下于慢档振板 60 分钟 4 洗板 6 次 将板条在洁净的吸水纸上拍干 5 在每个微孔内加入 100 l 增强液 于慢档振板 5 分钟 6 确定微孔反应板已固定在时间分辨荧光测定仪上 开始检测 七 试剂盒的贮存与运输七 试剂盒的贮存与运输 试剂盒组装后贮存于 2 80C 严格禁止在高温下运输试剂盒 八 注意事项八 注意事项 1 吸取增强液或铕标记物时 请使用本试剂盒提供的吸头 并避免尘土污染吸头 2 使用前 分析缓冲液 校准品 待检样本和微孔反应板须恢复到室温 3 铕标记物稀释后请在一小时内使用 4 洗板机在洗涤时 须确认每孔中的洗涤液都注满微孔 洗涤后微孔内残留液体少 洗涤后 苏州新波生物技术有限公司 文件编号 Q SB ZD 7 PD TWP001 版本状态 A 0 本文未经允许不得翻版或转送 第 6 页 共 6 页 将微孔板倒扣在无尘吸水纸上拍干 5 使用干净的一次性容器配制铕标记物 应避免铕标记物稀释液进入铕标记物原液中 6 尽量建立一个干净无尘的实验室环境 不要混用不同批号的试剂 不要使用过期试剂 7 加增强液和铕标记物时 吸头应悬空 避免因吸头碰到小孔边缘或其中试剂而造成增强液 和铕标记物的污染 8 所有的样品和试剂盒应作为潜在的污染源看待 请按传染病实验室检查规程操作