【毕业学位论文】（Word原稿）黄芪多糖增强疫苗免疫效力及机理研究预防兽医学硕士论文

密级： 论文编号： 中国农业科学院 学位论文 黄芪多糖 增强疫苗 免疫效 力及机理 研究 on in of on in of 摘 要 本 论文 研究了黄芪多糖 （ 的提取 、理化性质、毒性、制剂安全性及其对肉鸡和小鼠免疫功能的影响，并从细胞 信号 转导 角度探讨其作用机制。 试验一 黄芪多糖的制备及理化性质分析 本试验研究了黄芪多糖的提取、分离 、 理化性质及多糖含量。采用水提醇沉法提取黄芪多糖。分别采用 应碘 碘化钾反应茚三酮反应研究了黄芪多糖粗提物的理化性质。并采用苯酚 果表明黄芪多糖 （ 的得率为 理化性质分析表明黄芪多糖粗提物中含有多糖组分，不含淀粉和蛋白质， 总 糖含量为 试验二 黄芪多糖毒性试验及制剂安全性 评价 本试验进行 了 黄芪多糖毒性试验和安全性 评价 。结果发现黄芪多糖属无毒， 并具有无热原、刺激性低的特点；结果提示，黄芪多糖可用于口服、注射、滴鼻、点眼多种免疫方式，且无毒 副作用 、安全可靠。 试验三 黄芪多糖对肉鸡免疫功能的影响研究 本试验 观察 了黄芪多糖 对鸡新城疫疫苗免疫的增效作用。结果 发现：黄芪多糖对肉仔鸡免疫功能有一定影响，可提高肉仔鸡新城疫抗体 水平 。 表明 黄芪多糖有一定的免疫增强作用，可与疫苗联用提高疫苗的保护力。 试验四 黄芪多糖对小鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响 实验观察 了不同浓度黄芪多糖体外对小鼠脾淋巴细胞转化和细胞因子 泌的影响。发现黄芪多糖 能 提高脾 淋巴细胞转化率 ， 促进 泌，其中以 200 g/上结果提示，黄芪多糖可以促进淋巴细胞功能，并通过调节细胞因子的分泌 影响 免疫系统功能。 试验五 黄芪多糖对小鼠脾淋巴细胞信 号转 导的影响 本试验研究了黄芪多糖对小鼠脾淋巴细胞内第二信使分子 影响。结果发现黄芪多糖可使脾淋巴细胞 生显著增加，其中以 200 g/芪多糖可使脾淋巴细胞 低，促进 产生，从而降低 例，并具有剂量相关性。 本结果提示，黄芪多糖的免疫调节 作用是通过改变细胞内 信号转导而 实现的。 关键词 ：黄芪多糖，肉鸡， 鸡新城疫疫苗 ，免疫调节， 信号转导 to to of of to of of n to to it be in as on of to on of It a on of of of on of to on by TT It in a by of on to on by O, O in a at 00 g/it by 录 第一章 绪 论 1 第一节 多糖类免疫增强剂的研究进展 1 第二节 黄芪多糖（ 究进展和应用展望 13 第二章 试验部分 19 试验一 黄芪多糖的制备及理化性质分析 19 19 19 20 21 试验二 黄芪多糖毒性试验及制剂安全性评价 22 22 22 23 24 试验三 黄芪多糖对 肉鸡免疫功能的影响研究 26 26 26 2 7 28 试验四 黄芪多糖对小鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响 29 29 30 3 1 33 试验五 黄芪多糖对小鼠脾淋巴细胞信号转导的影响 3 5 35 35 3 7 39 全文结论 42 参考文献 43 致谢 54 作者简历 55 文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文名称 芪多糖 膝多糖 多糖 物血凝素 细胞介素 扰素 瘤坏死因子 然杀伤 甲基噻唑蓝 噬细胞 伴刀豆球蛋白 氧化氮 O 诱导一氧化氮合成酶 腺苷酸 鸟苷酸 补体受体 3 凝抑制 城疫 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 1 第一章 绪论 畜禽传染病一直是畜牧业发展的克星，尤其是病毒性传染病对畜牧业造成了重大的经济损失。我国每年由于动物疫病造成的直接经济损失在 260 元，因疫病引起的生产性能下降饲料和人工浪费药物消耗等 间接损失达 800 亿元 60。 近年来，由于新发病（如牛传染性海绵状脑病尼帕病西尼罗河热 ）的不断出现和传统重大动物疫病（如口蹄疫 禽流感 等）的 发生和 蔓延，给疫病控制工作带来了更大的困难。同时，免疫抑制性疾病对畜禽健康的威胁日益增加。 特别是病毒性、寄生虫引起的 免疫抑制性疾病除了 病原 本身的直接危害之外，更为重要的是造成免疫抑制，可使低致病性的病原体引起多种疾病综合症的发生， 并 造成 机体对 疫苗 的免疫应答降低 ，从而导致免疫失败 49。 目前，应用疫苗进行预防仍然是 控制 畜禽传染病的主要措施。 免疫佐剂 能增强疫苗的免疫应答，延长免疫持续期，是疫苗免疫能否成功的关键因素之一。在国内外畜牧生产中，应用较广的疫苗佐剂如铝胶盐水，油佐剂等存在着粘滞性高、稳定性差等缺点。为适应基因工程疫苗、亚单位疫苗和合成肽等新型疫苗的发展，研制和开发可生物代谢，无毒害、活性强的新型佐剂，已成为迫切需要研究的课题。 植物活性多糖是一种重要的天然活性成分，大量研究表明它具有促进机体免疫功能抗菌抗病毒抗寄生虫抗肿瘤和抗辐射等一系列作用。已有实验证明饲料中添加活性多糖能显著增强畜禽的免疫功能，促进免疫器官发育和抗体生成，激活淋巴 细胞，并能促进动物生长，降低动物死亡率。因此，植物活性多糖是一种很有前途的免疫 佐剂 ，在动物生产中的研究与应用 已 引起国内外的重视。 本研究从天然植物黄芪中提取活性多糖，研究其 理化 性质及对小鼠和肉鸡免疫功能的影响，并探讨其作用机制。同时，黄芪多糖作为多糖类免疫增强剂的一种，其作用机制与其它多糖类免疫增强剂有许多相似或相同之处，可作为免疫 增强 剂提高疫苗的免疫效果，因此本文就多糖类免疫增强剂的研究进展及黄芪多糖的国内外研究进展作一介绍。 第一节 多糖类免疫增强剂的研究进展 多糖 (一大类天然产 物，广泛存在于动物、植物、微生物等有机体中。因其来源广泛价格低廉效果确切纯天然具有多种多样的生物活性功能 ,而受到人们的普遍重视，使多糖生物资源的开发利用和研究日益活跃，成为天然药物、生物化学、生命科学的研究热点。到目前为止，已有近百种多糖类化合物从天然产物中被分离出来。多糖不仅是所有生物有机体的重要结构成分，而且也是一种重要的信息分子，参与分子识别细胞粘着及细胞的防御机制。近年来，大量药理及临床研究表明，多糖类化合物是一种良好的免疫调节剂，它能激活免疫受体，提高机体的免疫功能 120。因此，在现 代畜牧业中，开发利用天然多糖提取物作为免疫调节剂，受到人们的普遍重视，进行了大量研究。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 2 1 多糖类免疫增强剂的免疫调节作用 从研究报道可以得知，多糖能在多条途径、多个层面对免疫系统发挥调节作用。多糖不仅能激活 T B 淋巴细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞 (免疫细胞，还能活化补体，促进细胞因子生成，从而调节机体的免疫功能。 对免疫器官的作用 免疫器官主要由中枢免疫器官骨髓胸腺腔上囊及外周免疫器官脾脏淋巴组织等组成。骨髓是造血干细胞生长分化及发育的场所，可提供各种免疫细胞的前体细胞， B 细胞单核巨噬细胞粒细胞 胞血小板和红细胞也在此分化成熟。腔上囊是鸟类特有的中枢免疫器官，来自骨髓的淋巴 T 细胞在其内诱导分化为成熟的 B 细胞，经淋巴循环和血液循环到外周淋巴器官参与体液免疫。胸腺的免疫功能主要是诱导 T 细胞的分化和成熟，胸腺衍化的 T 细胞能辅助T 细胞产生抗体。脾脏是机体最大的免疫器官，内含大量的免疫细胞，其中 T 淋巴细胞约占 40%左右， B 淋巴细胞约占 60%左右，在体液免疫中的地位极其重要。因此研究多糖对机体免疫器官的作用是研究多糖免疫调节作用的一个重要方面。 银耳多糖皮下注射 100 mg/正常小 鼠的胸腺及脾脏重量均无显著影响，而腹腔注射 200 mg/使正常小鼠脾脏重量明显增加 43。在 10mg/量范围内，当归多糖能对抗环磷酰胺引起的小鼠脾萎缩，增加小鼠脾重 111。给小鼠腹腔注射北洋参多糖 32 用药 7 d，可使胸腺重量明显增加 20。腹腔注射板蓝根多糖（ 50 mg/显著促进小鼠的免疫功能，表现为显著增加正常小鼠脾重、白细胞总数及淋巴细胞数，对氢化可的松所致免疫功能抑制小鼠脾重、白细胞总数和淋巴细胞数的降低有明显对抗作用 109。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 3 对细胞因子的调节 现代研究表明，活性多糖可以诱导免疫细胞产生多种细胞因子。而在机体免疫调节过程中，细胞因子具有重要的作用。如 巨噬细胞向 T 细胞递呈抗原后的第二激活信号，通过激活胞促进抗体产生和诱导 胞产生 许多作用是通过 现的。 能诱导 胞的产生，增强 胞的细胞毒活性，刺激 B 细胞分化、增殖，促进抗体的产生 42。具有重要的免疫调节作用：（ 1） T 细胞重要的自分泌生长因子，是 T 细胞依赖免疫应答的重要决定因素，还可刺激其它 T 细胞衍 生的细胞因子的合成。（ 2）刺激 胞，增强它的溶细胞功能，产生所谓的淋巴因子激活杀伤细胞（ （ 3）作用于 B 细胞，即可以作为生长因子又是抗体合成的刺激物 71。 牛膝多糖能激活网状内皮系统的吞噬功能，激活巨噬细胞，促进 生成及促进淋巴细胞增殖，增强 胞和 胞的活性，并能提高血清免疫球蛋白 平 101。大刺猴头多糖能够激活 胞，产生 多种免疫因子 2。海带多糖还可促进脾脏 T、 15。 羧甲基茯苓多糖对外周血淋巴细胞分泌 促进诱生作用 119。灵芝多糖可明显增加小鼠脾淋巴细胞产生 能力，还能促进 成及其 表达，可在转录水平影响这些细胞因子的产生 27。淫羊霍多糖能增强脾和胸腺 T、 B 淋巴细胞的增殖和分化，促进巨噬细胞的吞噬活性，诱导多种细胞因子如 的生成 15。银耳多糖可增强小鼠腹腔巨噬细胞产生 能力 64。黄芪多糖能促进 生成 59。当归多糖含有药理特性类似与肝素的 成分，可与多种生长因子相互作用，促进 生长因子生成 92,131,137,154,155。芦荟多糖能使紫外线辐射所致细胞产生的 少 50%，并完全阻断培养上清液注射入小鼠体内所产生的 应的抑制，还能阻断紫外线激活的 白的磷酸化，但对 白的磷酸化无明显作用 124,143。 75 亲合力 达明显增加 148。 体内注射香菇多糖后， 水平有所下降， T 细胞亚群比例趋向 更合理，预示病人的免疫潜能上升，这是香菇多糖延长患者生命的原因之一 136。 对补体系统的调节 补体是血液中一组具有酶 原 活性的蛋白质系列，它能协同抗体杀死病原微生物或协助、配合吞噬细胞来杀灭病原微生物 120。许多多糖均有调节补体活性作用。补体蛋白上存在的识别点可识别多糖的结构，多糖和血液补体蛋白的相互识别作用能够使蛋白活化，诱发增加补体蛋白抵御吞噬病原的能力 28。 而 从当归、艾叶、柴胡、甘草、紫根等植物中提取的酸性多糖都是具有抗补体活性的多糖 120。 对免疫细胞的调节 细胞免疫主要是由 T 细胞 介导。机体通过致敏阶段和反应阶段， T 细胞分化成效应性淋巴细胞并产生细胞因子。 T 细胞能抵抗细胞内寄生的细菌病毒真菌以及原虫的感染； T 细胞具有中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 4 免疫监视作用，被肿瘤抗原致敏的 T 细胞通过直接杀伤和释放细胞因子等可直接或间接地杀伤肿瘤细胞。多糖具有增强细胞免疫功能的作用。 一些多糖可以通过激活免疫细胞提高机体的免疫力。如 提取的一种海藻多糖可诱导荷瘤小鼠 迟发型超敏反应，增强脾淋巴细胞到浆细胞的变化，增强外周血中 T 细胞的百分率 ，提示其抗瘤作用与其增强辅助性 T 细胞、杀伤性 T 细胞、自然杀伤 T 细胞的活性有关 140。女贞子多糖能促进 T、 B 淋巴细胞的转化，增强巨噬细胞的吞噬活性 7。 海藻硫酸多糖对 T、 B 淋巴细胞有促进增殖作用，并对环磷酰胺 (致免疫力低下小鼠，它还可以通过调节血像、增加胸腺指数、提高 T 淋巴细胞和 胞数目、促进 T、 增殖来缓解 105。淫羊霍多糖能增强脾和胸腺 T、 B 淋巴细胞的增殖和分化，促进巨噬细胞的吞噬活性 5。 香菇多糖是一种典型的 T 细胞激活剂，可提高肿瘤患者 值而逆转免疫 抑制状态，具有调节肿瘤患者细胞免疫功能的作用 89。 紫松果菊多糖与小鼠骨髓的巨 噬 细胞共同孵育，则巨噬细胞对肿瘤细胞的毒性大大激活 35。枸杞多糖具有增强 胞杀伤活性及增加白细胞数量的作用 18。甘草多糖能提高 T 细胞转化率 65。芦荟多糖可促进腹腔巨噬细胞吞噬功能，促进淋巴细胞转化率 62。灵芝多糖可使 T 淋巴细胞增多 38。 对体液免疫的调节 体液免疫是 B 细胞介导的免疫应答，是由 B 细胞通过对抗原的识别活化增殖，最后分化成浆细胞并分泌抗体来实现的，抗体是介导体液免疫的重要分子，在体内可发挥 多种免疫功能。多糖作为疫苗免疫增强剂可以促进抗体的产生。 枸杞多糖具有提高 B 细胞产生抗体能力的作用 11。紫锥菊的多糖部分具有刺激巨噬细胞的吞噬功能，刺激 T 淋巴细胞增殖，并能显著增强体液免疫功能 12。人参多糖免疫小鼠，小鼠体内的特异性抗体及 含量显著增加 12。高山红景天多糖可明显增加特异的抗体分泌细胞数，从而增强机体的体液免疫 69。有人研究玉米花粉多糖对鸡新城疫弱毒疫苗免疫应答的影响，发现玉米花粉多糖能显著促进 体的产生，使抗体提前产生并维持较高滴度 72。 对单核吞噬细胞 系统的影响 近年来的研究表明，单核吞噬细胞作为免疫效应细胞， 其杀伤各种肿瘤细胞和参与抵抗细菌、真菌及寄生虫等感染的炎症反应的重要因子。多糖能促进 胞分泌 细胞因子。含有一个未成对电子的小分子物质，因而具有活跃而广泛的生物化学性质，主要通过环 非 径而发挥其生物效应 51。 人参多糖单体 可增强正常小鼠的单核巨噬细胞系统功能 21。猪苓多糖能对正常人外周血单核细胞（ 促进增殖作用，可提高 上 体的表达并促进 其分泌 强其杀伤力 21。香菇多糖（ 刺激小鼠腹腔巨噬细胞活化并使 性增加，释放大量 。枸杞多糖（ 胃与腹腔注射均可明显增加小鼠腹腔静 息期 O 诱生量及胞内溶菌酶与超氧化物歧化酶（ 活性 122。 究发现葡聚糖能促进 成酶基因的表达，使其 录和蛋白质合成增加，进而促进 合成与分中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 5 泌。 对 胞和 胞的影响 胞是一类重要的免疫调节细胞，它对 T 细胞 B 细胞骨髓干细胞等均有调节作用，并通过释放细胞因子 对机体免疫功能进行调节。 胞能杀伤对 胞敏感和不敏感的实体瘤细胞，具有广谱的抗肿瘤作用。 研究发现商陆多糖能促进 导的淋巴细胞转化，增强 胞活性，促进 150。牛膝多糖 50 mg/100 mg/腔注射，每天一次，共 5 d，可显著增强 胞活性，还可对抗环磷酰胺对 胞的抑制作用 114。 2 多糖作用机制的研究 多糖类免疫增强剂的作用机制是当前多糖研究的重点内容，已经深入到基因和分子水平。多糖通过与淋巴细胞表面受体结合，从而影响淋巴细胞的信息 传递过程，进而影响淋巴细胞基因表达和淋巴细胞功能，是目前比较公认的多糖作用机制。 多糖受体的研究 多糖通过与细胞表面多糖受体结合发挥作用。多糖与蛋白质和酶一样，分子中存在一个或几个寡糖片断的活性中心，只有多糖分子中的这些有活性的寡糖片断才能与受体结合。 目前，已发现有四类多糖受体即补体 型受体（ 体。现在研究最多的是 在于 胞巨噬细胞 B 细胞中性细胞和细胞毒 两个不同结构区域，一个能与葡聚糖特异 结合，一个与 活补体 3的裂解片断 b）特异结合， 体与葡聚糖结合后，可促进巨噬细胞对 理的靶细胞的吞噬作用 152。可溶性酵母多糖与中性粒细胞和自然杀伤细胞的 体的凝集素位点结合，从而激活受体结构，使其变形，调节对 理靶细胞的细胞毒性作用 147。 研究表明，葡聚糖受体受细胞因子和前列腺素调控。如淋巴因子 促进巨噬细胞表面葡聚糖受体的表达 141。 增强葡聚糖受体的功能，使其介导的吞噬能力增强 141。 多糖对基因表达影响的研究 多糖能够 影响淋巴细胞的基因表达；还能通过促进细胞因子基因表达来促进细胞因子的分泌。 灵芝多糖在体外能促进小鼠脾细胞 泌及其 表达，并呈剂量依赖关系 100 。腹腔注射云芝多糖可以通过增加巨噬细胞的锰超氧化物歧化酶(量，提高小鼠巨噬细胞总 性 66。紫云英中提取的果胶多糖可增加 录活性，促进体外培养的小鼠 B 细胞的 泌 130。体内注射 5 mg/30 mg/菇多糖，均能提高肝中 超氧化物歧 化酶（ 表达量，其中以 5 mg/ 第一章 绪论 6 剂量的作用稍强 61。 多糖对淋巴细胞信号传导的影响 多糖还可影响淋巴细胞的信号传导，这方面已有众多文献报道。 影响 一种重要的信号分子，多糖可通过影响 分泌调节机体免疫。 猪苓多糖（ 小鼠腹腔巨噬细胞 成具有明显的促进作用，呈剂量依赖关系，并与干扰素具有协同促进作用，另外， 能诱导巨噬细胞 成 23。香菇多糖或协同干扰素均能促进小鼠巨噬细胞分泌 5。云芝多糖能促进 成酶基因的表达 ，使巨噬细胞分泌加 97。 息系统的影响 动物细胞内以 “第二信使 ”的形式对细胞功能起着重要的调节作用，影响机体免疫功能，大量研究表明，多糖能调节淋巴细胞内 含量和相对比值。 螺旋藻多糖可剂量依赖性地引起小鼠脾细胞中 度升高 113。灵芝多糖可引起小鼠腹腔巨噬细胞中 度快速升高，且呈剂量依赖关系， 5 峰值，之后缓慢下降，至 30 38；灵芝多糖也能剂量依赖性引起小鼠腹腔中 度快速升高 38。 钙离子的影响 钙离子也是一种重要的信使分子，对淋巴细胞功能有重要的作用，如调节淋巴细胞的分裂，促进 释放，介导巨噬细胞的吞噬作用等。研究表明多糖可引起淋巴细胞内钙离子浓度的改变。 银耳多糖在一定剂量范围内，可剂量依赖性地增加脾淋巴细胞内游离钙离子浓度，并与 通道阻断剂可阻断这一作用 7。螺旋藻多糖可剂量依赖性引起小鼠腹腔巨噬细胞显升高，其升高是胞 外 钙内流和胞内钙释放共同作用的结果 84。枸杞多糖能迅速诱导脾脏细胞和腹腔巨噬细胞内 加，并呈剂量依赖关系 70。灵芝多糖影响小鼠腹腔巨噬细胞的三磷酸肌醇（ 二酰基甘油（ 息传 递 系统，使小鼠腹腔巨噬细胞中 浓度升高，进而影响细胞钙离子浓度 37。 3 多糖免疫调节剂的开发利用 病毒作用 病毒必须通过吸附和穿入易感宿主细胞，才能以自我复制的方式进行增殖引起感染。吸附的两个阶段为 :一是病毒与细胞接触，进行静电结合，此过程是非特异的、可逆的；二是病毒表面为点 (蛋白质结构 )与宿主细胞膜上相应受体结合，此过程是特异的、非可逆的，硫酸多糖可与 合抑制 51。 目前最难对付的病毒之一。硫酸化香菇多糖具有显著抗 用 ,体外 10 就可完全抑制 原的表达，干扰 胞的侵染，抑制合胞体形成，临床使用能协同叠氮胸苷 (好地抑制 原的表达 132,139。 中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 7 肿瘤作用 多糖类的抗肿瘤作用一般是通过提高宿主免疫功能来实现的。多糖通过增强网状内皮系统提高血清抗体水平促进 淋巴细胞增殖诱生干扰素和肿瘤坏死因子增强巨噬细胞吞噬能力及直接杀伤肿瘤细胞等途径来提高机体 免疫力。 香菇多糖能刺激免疫细胞成熟、分化及增殖，改善宿主机体平衡，达到恢复和提高宿主细胞对淋巴因子激素和其它生理活性因子的反应性 44。白术多糖可促进淋巴细胞向成熟 T 淋巴细胞转化，提高小鼠细胞免疫功能 102。茯苓多糖能增强巨噬细胞识别功能，提高巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数，并能通过增强肿瘤坏死因子 (因转录而增加巨噬细胞释放 增强 活性 78。甘草多糖可以延长腹水瘤小鼠的生存期，抑制实体瘤的生长 144。猪苓多糖对小鼠 127。 报道 体内用香菇多糖能显著抑制小鼠外周血 产生，表明香菇多糖可应用于下调 治疗方案 133；另外，香菇多糖还能有效预防化学性或病毒性肿瘤的发生，对小鼠 体瘤的抑制率可达 70%其中 90%小鼠的肿瘤完全消退；还能抑制化学致癌，防止小鼠肠溃疡恶化导致的结肠癌的发生 138。 衰老作用 随着社会的发展，出现了众多关于衰老发生机制的学说，如遗传学说、自由基学说、交联学说以及免疫功能下降学说等等。其中持免疫功能下降学说的科学家认为衰老是由免疫功能下降引起的，而中草药免疫调节剂可以 增强老年人的免疫功能，因此很有希望将它们作为延缓衰老药应用于临床。近年来，化学家们已从扶正固本等补益类中草药中得到了多种多糖类化合物，不但能促进机体的免疫功能，而且证实了有些多糖确实有抗老延寿的作用。 药理证明刺五加多糖不但具有很强的免疫活性，而且有显著的抗衰老作用，实验表明它可延长家蚕寿命 108。南沙参多糖可降低老龄小鼠肝、脑脂褐素含量，显著抑制老龄小鼠血清中丙二醛的生成，提高老龄小鼠红细胞中超氧化物歧化酶及全血中谷胱甘肽过氧化物酶的活性 33。 氧化作用 从真菌云芝得到的连接蛋 白的多糖（ 对巨噬细胞 化修饰后 力降低和 成增多有很好的抑制作用，能使 力升高，脂质过氧化物等的指标恢复正常 156。从海带科植物海带中提取的低分子量岩藻聚糖硫酸酯具有能使高血脂症大鼠血清中 含量显著升高，血清及组织中 力降低，起到抗氧化的作用 153。灵芝多糖可清除 制化学发光，并可在引发脂质过氧化体系中抑制脂质过氧化 135。硫酸软骨素属于天然硫酸 酯 化多糖，可抑制氧化过程的进行 149。 血糖作用 从 养菌丝体的热水提取物中纯化出的一种多糖 抑制肝葡萄糖的输出，降低血糖 134。从 果肉中提取的一种水溶性酸性多糖（ 有中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 8 显著的降血糖作用 145。从真菌 发酵液中提取的水溶性中性多糖（ 患 糖尿病小鼠也有明显的降血糖作用 146。静脉注射 1 菇多糖 ,可显著的预防老年白内障和糖尿病引起的视网膜病的并发症发生 129。 4 几种重要多糖的研究进展 迄今为止，已有 300 多种多糖类化合物从天然产物中被分离出来，其 中以植物多糖最为重要，以下介绍几种重要多糖研究进展。 菌脂多糖（ 细菌脂多糖 (革兰氏阴性菌所特有，位于外壁层的最表面，由类脂 A核心多糖和侧链多糖三部分组成。其是亲脂又亲水的聚阴离子分子，对体液免疫 (细胞免疫 (有辅佐作用，可引起动物特异性应答。单独注射可引起多克隆应答。既有多克隆细胞有丝分裂原的作用，又可促进巨噬细胞等分泌单核因子，如白介素 可调节巨噬细胞表面 子的表达，从而改变抗原的提呈。细菌脂多糖的免疫调节作用早已为人们熟知，并作为免疫佐剂应用已有 几十年。近几年来在治疗方面的应用也屡见报道，其抑制肿瘤、抗放射、抗传染等作用在医学和兽医临床获得进一步证实 29。 菇多糖（ 香菇多糖是 1969 年在日本首先 获得 ， 1986 年日本厚生省批准生产并外销。 1988 年我国批准进口，现在国内亦可生产。香菇多糖是从人工培养的伞菌科真菌香菇子实体中提取、分离、纯化获得的均一组分的多糖。香菇能恢复或加强宿主对淋巴细胞、激素及其它生物活性因子的反应，通过刺激免疫活性细胞的成熟、分化和繁殖，使机体的淋巴细胞大量增加；它还能激活补体系统的经典途径或变更途径；还 可增加巨噬细胞非特异性免疫力，并增加中性粒白细胞对肿瘤的浸润，促使宿主因癌症及感染而引起的体内平衡失调快恢复。 香菇多糖可增强机体的细胞免疫。如增强 变 强细胞毒 T 细胞活性，提高 胞活性，明显增加 性细胞数和 值，使 T 细胞各亚群的活性明显增加；香菇多糖与 胞有抗癌协同作用，并明显增加巨噬细胞对癌细胞的吞噬作用，从而增强细胞免疫。香菇多糖能促进正常小鼠经 2.5 mg/激的脾脏 T 淋巴细胞增殖反应，纠正 由环磷酰胺诱导的免疫低下状态 94。可促进马立克氏病感染鸡的脾细胞分泌 低鸡的死亡率 52。 另外，香菇多糖也能明显提高体液免疫功能，促进 B 细胞合成 加 抗 体分泌细胞数。 膝多糖 牛膝多糖是从中药牛膝中分离得到的一种小分子量多糖化合物，药效学的研究表明，牛膝多中国农业科学院硕士学位论文 第一章 绪论 9 糖具有显著的增强机体免疫功能的作用。毒理试验表明，牛膝多糖几乎无毒性。牛膝多糖的纯度可达 98%以上，易溶于水，与一些国内外已在临床使用的多糖类药物如香菇多糖云芝多糖等相比，具有分子量小无抗原性水溶性好人体易 吸收生化提取质量稳定人工栽培资源丰富等优点 91。 能影响红细胞免疫功能。如牛膝多糖能提高小鼠 体花环率，也能降低 环率，表明它既能促进红细胞免疫粘附作用，也能加强红细胞对循环免疫复合物的清除作用。 增强巨噬细胞免疫功能。它能提高腹腔巨噬细胞内乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶活性，并能显著诱导腹腔巨噬细胞表达 且对 诱导表达具有显著的剂量效果 57。 增强 T 淋巴细胞和天然杀伤细胞功能。如在体外能增强天然杀伤 (胞活性，促进伴刀豆球蛋白 A（ 导的肿瘤 坏死因子（ 生。皮下注射 50 及 100 mg/显著提高正常小鼠 胞活性和 成，增强二硝基氟苯诱导的迟发型超敏反应和对抗环磷酰胺对 膝多糖还可以增强 水型肝癌小鼠的 胞和淋巴因子激活的杀伤细胞（ 胞）的杀瘤活性，并显著提高小鼠的 产生 106。 增强小鼠体液免疫反应，明显提高正常小鼠血清总 特异性溶血素水平，增加脾脏空斑形成细胞数目，对抗环孢霉素 A 引起的 平的下降，增强小鼠单核巨噬细胞的吞噬功能，但对二硝基氟苯 （ 导的变态反应无明显影响 107。 牛膝多糖的衍生物 含量达 21%以上，多糖分子中的羟基已最大限度地被酯化），在体外具有明显的抗病毒作用，对乙型肝炎和 用 90。 杞多糖 (枸杞多糖是从中药枸杞中提取的杂多糖，它由六种单糖组成。 明显增加小鼠外周 血 色法），其作用强，用量小，对 T 淋巴细胞免疫反应具有选择性作用，可以认为它是一种 T 淋巴细胞免疫佐剂。 体液免疫也有促进作用。 辐射损伤的小 鼠免疫功能的受抑有恢复作用，还可逆转氢化可的松所致的小鼠免疫 功能 低下，使胸腺重量和抗体生成增加 32。 促进淋巴细胞增殖。如 外应用对正常小鼠及快速老化模型小鼠脾细胞增殖反应具有直接促增殖作用，明显增加正常小鼠脾脏抗体形成细胞（ 目，迅速诱导脾细胞和腹腔巨噬细胞内 的增加，并呈一定剂量依赖性关系 70。 调节细胞因子分泌。如体外应用枸杞多糖对 有双向调节作用，低浓度时对 产生及其受体表达有明显促进作用，高浓度时则呈不同程度的抑制效应， 可 诱导产生 99。 通过提高机体免疫，发挥抗肿瘤作用。如 瘤小鼠腹腔注射枸杞多糖（ 200 mg/ d，能显著提高 胞活性以及脾细胞产生 能力，脾重及脾有核细胞数目明显增多，在停药后第 1 5 10 天，抑瘤率分别为 85。 量依赖性的抑制小鼠 瘤瘤重，恢复和提高荷瘤小鼠脾细胞数及活化 T 细胞增殖能力，明显促进 泌水平 46。 增加 胞活性。如枸杞多糖能增强 胞杀伤活性，增加白细胞数量， 对环磷酰胺所中国农业科学院硕士学位论文 第