微生物实验实验一显微镜的使用及微生物形态观察.doc

微生物实验 实验一 显微镜的使用及微生物形态观察 实验二 活性污泥生物相及藻类形态观察 实验三 微生物的染色 实验四 微生物细胞数的计数 实验五活性污泥不同微生物种群的分离培养与鉴别 实验一 显微镜的使用及微生物形态观察 一 目的 1 了解普通光学显微镜的构造学习显微镜的使用方法和保养高低倍镜的使用 2 观察蓝细菌霉菌酵母菌放线菌的个体形态学会生物图的绘制 二 实验器材 1 光学显微镜 2 示范片颤藻曲霉青霉酵母菌放线菌 实验二 活性污泥生物相的观察 一 目的 1学习测量微生物大小 2学习用压滴法制作标本片 3 观察几种原后生动物菌胶团及藻类个体形态 二 实验器材 1 活性污泥混合液 2 单胞藻新月藻草履虫等示范片 3 显微镜载玻片盖玻片 4 目测微尺物测微尺 三 实验内容 1 微生物大小的测定 1 标定目镜测微尺 装在目镜上的目测微尺中央刻有等分为100格或更多格的标尺使用前要用物测微尺标定物测微尺中央刻有1mm长的标尺等分为100格10m格将物测微尺的刻度朝上放在载物台上用低倍镜找出物测微尺的刻度移动物测微尺使其第一条线与目测微尺的第一条线重合顺着刻度线找出另一条重合线算出低倍镜下目测微尺每格的长度换高倍镜用同样方法标定出高倍镜下目测微尺每格的长度 测微尺示意图 2压滴法观察活性污泥中生物相 1压滴法制作标本片 用滴管取活性污泥混合液一小滴放在载玻片中央取一块盖玻片先将一边与混合液接触然后慢慢将盖玻片放下使其盖在混合液上片内不能有气泡 2观察活性污泥中生物相 先用低倍镜观察活性污泥中菌胶团原生动物后生动物画出所观察到的生物形态图标明名称放大倍数和微生物的大小 四实验结果 1低高倍镜下目测微尺每格的长度 2画出23种污泥中所观察到的生物形态图标明名称放大倍数和微生物的大小 3画出两种藻类生物形态图标明名称放大倍数和微生物的大小 实验三 微生物的染色 一 目的 1 学习微生物的染色技术掌握微生物的单染色法和革兰氏染色法 2 学习油镜的操作 二染色原理和油镜的工作原理 1油镜工作原理 油镜的放大倍数最大100故镜头焦距短直径小但所需光照强度却最大从标本片透过的光线是从玻片进入空 气再进入镜头由于玻璃和空气的介质密度不同有些光会 因折射或反射而 不能进入 镜头物象就显 现不清 为了不使通过的 光线有 所损失须在油镜与玻片 之间加入折射率和玻璃 n 152相仿的香柏油 n 1515 故而称之为 油镜 2单染色法 微生物不但个体微小且无色半透明要在显微镜下观察清楚必须染上颜色 微生物细胞中含有大量的蛋白质等一类两性电解质在酸性溶液中结合质子带正电在碱性溶液中给出质子而带负电等电点一般在pH 25所以在中性碱性或弱酸性溶液中微生物细胞通常带负电荷碱性染料在电离时染色部分是带正电荷的容易与带负电荷的菌体结合使之着色经染色后的菌体细胞与背景形成鲜明的对比在显微镜下很容易观察 3革兰氏染色法 革兰氏染色法将细菌分为G和G- 这由两类细菌细胞壁的结构和组成的不同而决定用结晶紫初染后所有的细菌都染上蓝紫色碘作为媒染剂能与结晶紫结合形成结晶紫-碘的复合物增强了染料与菌体的结合力用乙醇脱色处理时两类细菌的脱色效果是不同的G细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成且壁厚类脂含量低用乙醇脱色时使细胞壁脱水网状结构孔径缩小通透性降低使得结晶紫碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内虽经洗脱和复染仍然保持初染剂的蓝紫色G-细菌则不同由于其细胞壁肽聚糖层较薄类脂含量高所以在脱色处理时类脂被乙醇溶解细胞壁的通透性增大使结晶紫碘的复合物比较容易被洗脱出来用复染剂复染后细胞被染上复染剂的颜色 三实验器材 1显微镜香柏油接种环酒精灯等 2结晶紫染液碘液95乙醇沙黄染液 3菌种大肠杆菌枯草芽孢杆菌 四实验内容 一 单染色 1涂片 取一块载玻片用记号笔划分出两区域并做上记号在两区域中央各滴半滴无菌水用接种环以无菌操作法分别取两种菌种在左右两滴水中和匀后涂成薄膜 2干燥 室温自然干燥或吹干 3固定 涂面朝上通过火焰23次 4染色 在涂片薄膜上滴加结晶紫染液使之覆盖2分钟 5水洗 倾倒去染液斜置载玻片用洗瓶小水流沿玻片边缘冲洗直至水呈无色为止 6干燥 室温自然干燥或用吸水纸吸干 二 革兰氏染色 完成单染色的16步骤后 7 媒染 加媒染剂碘液使之覆盖1分钟水洗吸水纸吸干 8 脱色 滴加95 乙醇数滴使之覆盖16秒钟立即水洗吸干 9 复染 用沙黄番红液复染 2 分钟水洗吸干 二 镜检 先分别用低倍镜和高倍镜找到要观察的样品区域后用转换器将物镜转到空挡在样品区域滴加香柏油再将油镜慢慢转到工作位置浸入油中若不清晰慢慢转动微调直至清楚 油镜用完后用镜头纸沾取乙醇-乙醚混合液檫拭油镜头再用干的镜头纸檫干镜头 五实验结果 观察两种细菌的形态和颜色绘出油镜下细菌形态图说明革兰氏染色的结果 六思考题 通过实验你认为革兰氏染色成功关键是那一步为了避免假阳性或假阴性出现在对未知菌种做革兰氏染色鉴定时你认为应该怎样做 实验四微生物的计数显微镜直接计数法 一目的 1了解血球计数板的计数原理掌握血球计数板的计数方法 2观察酵母菌的形态学习区分酵母菌死活细胞的方法 二 实验器材 显微镜血球计数板酵母菌液美蓝染液盖玻片 三原理 1 血球计数板计数原理 血球计数板是一块特制的载玻片有四条竖槽和一条横槽横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网中间大方格为计数室边长为深为01mm容积为01mm3 10-4ml 计数室有两种规格一是分为16个中方格每中方格中有25个小方格另一种是分为25个中方格每中方格有16个小方格两种都共有400个小方格 计数 数出5个中方格中的总菌数A若菌液的稀释倍数为B则计算公式如下 1 25个中方格的计数板计算公式 2 16个中方格的计数板计算公式 2 区分酵母菌死活细胞基本原理 美蓝是一种无毒性的染料它的氧化型呈蓝色还原型是无色用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时由于细胞的新陈代谢作用细胞内具有较强的还原能力能使美蓝由蓝色的氧化型变成无色的还原型因此具有还原能力的酵母活细胞是无色的或淡蓝色而死细胞或代谢作用的衰老细胞则呈蓝色借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别 四 实验内容 1 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 1 在载玻片上加半滴美蓝染液在染液上滴一滴菌液取一块盖玻片先将一边与菌液接触然后慢慢将盖玻片放下盖在菌液上 2 将标本片放3分钟后先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况并根据颜色来区别死活细胞 2 酵母菌液的计数 1 镜检计数室 对计数板进行镜检若有污物则用自来水冲洗用电吹风吹干后 才能 进行计数 2 加样品 在血球计数板上盖上盖玻片 用滴管将摇匀的酵母菌液由盖玻片边的小槽滴一小滴菌液会自动进入计数室静置5分钟 3 计数 将血球计