安捷伦1260型HPLC使用操作

1260型HPLC使用操作 滁州市一院临床药学室 主要内容 仪器的组成操作前准备开机及关机工作站使用数据分析注意事项 仪器的组成 主体安捷伦1260HPLC流动相瓶 四元泵 自动进样器 柱温箱 二极管阵列检测器附件电脑 显示器 打印机等 仪器的组成 安捷伦1260HPLC流动相瓶四元泵自动进样器柱温箱二极管阵列检测器 仪器的组成 四元泵 自动进样器 柱温箱 二极管阵列检测器 排气阀 流动相瓶 电源开关 指示灯 色谱柱 操作前准备 流动相选择流动相过滤流动相超声与脱气流动相冷却 操作前准备 流动相选择分类 组成分 单组分和多组分极性 极性 弱极性 非极性常用溶剂 甲醇 水 乙腈 乙醇 乙酸乙酯 四氯化碳等 溶剂最好为HPLC级 水为超纯水 其中多采用二元或多元组合溶剂作为流动相 通过调节各组分的比例改变流动相的极性 已达到最佳的分离效果 对于部分情况还可以加入缓冲盐 调节出峰时间和达到改善峰型的效果 操作前准备 流动相过滤为了除去流动相中的杂质 保护系统和色谱柱 在流动相使用完后 装入新的溶剂前应使用抽滤瓶对溶剂进行过滤 滤膜 滤膜 有机膜和水系膜 二者不能混用 一般HPLC流动相过滤使用孔径为0 45 m的滤膜 针对混合溶剂首选有机滤膜过滤 操作前准备 流动相超声与脱气为了除去溶解在流动相中得气泡 降低基线噪音 在HPLC开机前应把各溶剂瓶在超声机中超声30min左右 对于溶解在流动相中的极微气体 安捷伦1260HPLC四元泵中集合了脱气机 可以进一步对混合后的流动相进行脱气处理 操作前准备 流动相冷却流动相在超声机中长时间超声后 由于水分子振动摩擦 使水温上升 因此流动相瓶中的溶剂也会被加热 加热后的流动相进入液相系统和色谱柱后 会影响基线噪声的增加 使平稳时间延长 开机及关机 1260HPLC及化学工作站开机使用与关机 打开计算机 打开主机电源 点击仪器1联机进入工作站 排气 A B C D 调节流速与流动相比例 关闭排气阀 打开柱温箱 逐步增大流速检查压力 稳定后打开检测器 跑基线 稳定后清洗针与管路 样品命名 进样检测 保存数据 冲洗管路及关机 开机及关机 关机前 用90 水冲洗柱子和系统0 5 1小时 流量1 0mL min 再用100 有机溶剂 甲醇 冲0 5小时 然后保存方法和仪器设置 退出化学工作站 及其它窗口 关闭计算机 关掉液相主机各模块电源开关 拔掉电源插头 做好仪器使用登记 工作站使用 进入工作站主界面方法和各模块参数设置跑基线样品命名与进样检测 工作站使用 进入工作站 工作站使用 主界面 工作站使用 方法和各模块参数设置 在各模块中空白处点击右键 选择 方法 编辑参数 仪器方法设置 仪器方法设置 1bar 14 5psi 0 1MPa 100kPa不同仪器单位不同 仪器方法设置 仪器方法设置 工作站使用 视图 在线信号 信号窗口1 工作站使用 跑基线 至少平稳30min 工作站使用 单次样品 样品命名 工作站使用 序列样品 命名与序列表设置 工作站使用 进样检测 样品色谱图 数据分析 进入仪器1脱机打开数据文件夹打开样品色谱图色谱峰编辑色谱峰数据打印报告色谱峰实例 数据分析 打开仪器1脱机 数据分析 数据文件夹 序列样品数据 单次样品数据 样品数据 色谱图 色谱图编辑 色谱峰数据 数据分析 色谱峰手动积分 数据分析 报告 打印报告 主峰数据 主峰要求 分离度 1 50 95 对称因子 1 05塔板数8000以上 数据分析 患者丙戊酸钠血药浓度检测色谱图 环己烷羧酸 丙戊酸钠 空白 标准品 色谱峰实例 注意事项 氘灯是易耗品 分析前应最后开灯 不分析样品应及时关闭氘灯 注意事项 流动相不要使用多日存放的蒸馏水 一般不易超过三天 易长菌 影响基线平衡 仪器使用后 应用90 水冲洗柱子和系统0 5 1h 流量1 0mL min 再用100甲醇冲洗0 5h 注意事项 开机时 打开排气阀 设置流动相为100 水 泵流量5 0mL min 若此时显示压力 10b