复方葛根桂枝汤中葛根素在大鼠体内的药动学研究

复方葛根桂枝汤中葛根素在大鼠体内的药动学研究摘要：目的建立HPLC-MS快速测定大鼠血清中葛根素浓度的方法,通过比较葛根素及复方葛根桂枝汤中葛根素的药动学特点，评价复方中其他配伍对葛根素药动学的影响。方法将大鼠分为葛根素组和复方葛根桂枝汤组，分别于不同时间点采血，用高效液相色谱-质谱串联法测定血浆中葛根素的浓度，采用DAS2.0软件计算药动学参数。结果大鼠灌胃给予复方葛根桂枝汤和葛根素后的主要药动学参数：AUC(0-t)分别为15.10.9ug/L*h和139225.2ug/L*h，MRT(0-)分别为8.73.8h和5.20.12h，t1/2分别为6.53.8h和3.40.6h，Tmax分别为1.00h和1.61.5h，葛根素与复方桂枝葛根汤的主要药动学参数具有显著性差异。结论复方桂枝葛根汤中复杂成分的存在能影响其有效成分葛根素的体内药动学特点。关键词：葛根素；复方葛根桂枝汤；药动学；液质联用IStudyonPharmacokineicsofPuerarininFufanggegenguizhiDecoctioninRatsAbstract:ObjectiveToestablisharapidHPLC-MSmethodforthedetermination,tocomparepharmacokineicsofpuerarinandFufangguizhigegenDecoctioninratsandtoassesstheeffectofothercomponentsincompoundonthepharmaeokinetiesofpuerarin.MethodsRatsweredividedintopuerarinandFufanggegenguizhiDecoctionextractgroup,bloodatdifferenttimepoints.TheplasmaconcentrationofthepuerarinandFufangguizhigegenDecoctionwasanalyzedbyHPLC-MS.ThepharmacokineticsparameterswerecalculatedwithDAS2.0.ResultsThepharmacokineticparametersFufanggegenguizhiDecoctionextractandpuerarianwereasfollowsAUC(0-t)15.10.9ug/L*hand139225.2ug/L*h，MRT(0-)8.73.8hand5.20.12h，t1/26.53.8hand3.40.6h，Tmax1.00hand1.61.5h.Theseparametershavesignificantdifference.ConclusionThecomplexcomponentsinFufangguizhigegenDecoctioncanaffectthepharmacokineticsofpuerarininratinvivo.Keywords:puerarin，FufanggegenguizhiDecoction，pharmacokinetic，HPLC-MS目录摘要.I-II1前言.12材料与仪器.22.1材料.22.2实验动物.22.3仪器.23方法.23.1药品制备.23.2动物分组与处理.33.3高效液相色谱-质谱串联法的色谱与质谱条件.33.4药动学数据处理.44结果.44.1HPLC-MS的方法学考察.54.2复方桂枝葛根汤的药代动力学研究.65讨论.95.1测量指标的选择.95.2血浆样品的处理.95.3检测条件.105.4研究结果差异性探讨.105.5研究展望.11参考文献.12综述.14致谢.1901前言复方桂枝葛根汤处方源于某中医院的经验方，是由张仲景的经典方剂桂枝加葛根汤加减变化而成，由葛根、桂枝、白芍、细辛、羌活等10味中药组成，具有祛风除湿，通痹止痛的作用，临床上用于治疗风寒湿阻型颈椎病。方中葛根为君药，乃发张仲景葛根汤善治“项背强几几”之意，重用葛根升阳解肌，疏利关节，并引药上行达病所，对改善头痛、眩晕、项强、肢体麻木等症状有效1；对该复方的研究多是临床病例，临床实践的分析，及临床作用机制的研究。张敏2通过对桂枝加葛根汤用于治疗颈椎病的疗效观察发现，患者治疗两周后，症状均有不同程度的改善，总有效率达到了92%。刘梅3等研究发现葛根桂枝汤能上调椎间盘组织Fas表达，下调bcl-2表达，从而发挥延缓椎间盘退变的作用。目前关于该复方的研究多是从整体出发，本实验研究试图通过对单味药的药动学变化研究，来为该复方的配伍合理性，提供依据。葛根素(Puerarin)作为本实验的研究对象，它是从葛根中提取的主要有效成分，具有扩张心脑血管、降低心肌耗氧以及抗肿瘤、抗氧化的作用，临床上主要用于治疗心血管疾病4-5。复方葛根桂枝汤中，作为研究对象的君药葛根有效成分为葛根素。近年来随着药动学研究的兴起，对于单味药尤其的药动学分析研究较多，有学者用HPLC法测定葛根素在大鼠体内的药动学过程结果表明，大鼠灌胃葛根素后的药-时过程符合二室模型6-7。而关于葛根素药动学研究概况如下：葛根素吸收较快，但胃肠道吸收程度较差，口服生物利用度较低，大部分经粪便以原型排泄，仅有少部分吸收人血，分布到各组织器官，在肝脏经细胞色素P450代谢8-9。中药成分复杂，在体内过程尚未阐明，疗效与药效的物质基础及中药制剂用量的三者数量关系不明确，因此对于中药制剂的临床使用，尚存在剂量的安全隐患。对中药制剂进行药动学研究，阐明药效发挥的基础，建立符合中医自身规律的用药原则，为中药制剂安全、合理、有效地用药治疗疾病提供可靠而坚定的基础。在此基础上，我们对复方桂枝葛根汤进行药代动力学研究，而方中的君药葛根主要有效成分为葛根素，故我们选取这该指标对复方桂枝葛根汤进行药代动力学研究。通过比较葛根素在大鼠体内药动学参数，阐明葛根素在1大鼠体内吸收分布过程，为临床合理用药提供理论依据。2材料与仪器2.1材料葛根素由中国食品药品检定研究院提供，规格20mg/每瓶，批号：HDGGS01。甲醇、乙腈，甲酸为色谱纯，由MERCK公司提供。处方中所用的十味药材均购于广东致信药业有限公司。其他试剂均为市售分析纯。实验用水为超纯水。2.2实验动物SD大鼠雌雄各半,体重范围：180-220g，来源：广州中医药大学实验动物中心，等级：SPF级，实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2013-0217。2.3仪器TC-15套式恒温器（浙江新华医疗器械厂）；东方-A型电热恒温干燥器（广州东方电热干燥设备厂）；HH-S4数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）；BS224S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司d=0.0001）；JJ200型电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）；GL-20G-型高速冷冻离心机（上海Anke公司）。液相-质谱联用分析系统（LC-MS/MS），包括资生堂公司VP系列NanospaceS1-23301二元泵和NanospaceS1-23202在线脱气机（日本），NanospaceS1-23133多用途自动进样器以及AB公司API-4000Q-Trap质谱检测器（含ESI离子源），色谱柱：ThermoSyncronis-C18(2.150mm,5m)。3方法3.1药品制备3.1.1复方浓缩物的制备及葛根素对照品灌胃液的制备2取葛根30g川芎10g桂枝10g白止10g白芍15g防风10g细辛3g威灵仙15g羌活10g炙甘草10g的比例配方，共246g。按比例加入8倍量的水，加热回流提取12小时，浓缩药液至1g/ml浓度，待用。精密称取葛根素100mg，用含有0.3%吐温和5%乙醇的水溶液，定容至10ml容量瓶中，配制为10mg/ml葛根素溶液，用于大鼠给药。3.1.2葛根素工作液及内标标准溶液的配制葛根素工作液的配制：精密称取葛根素2.23mg，置于1ml容量瓶中，加入甲醇定容至1ml，充分震荡摇匀，得2.23mg/ml的葛根素储备液，后经一系列稀释成100g/ml，10g/ml，5g/ml,1g/ml,0.25g/ml,50ng/ml，10ng/ml,5ng/ml，2.5ng/ml浓度的工作液，置于4下保存备用。内标标准溶液的配制：精密称取对羟基苯甲酸甲酯1.96mg，置于1ml容量瓶中，加入甲醇定容至1ml，充分震荡摇匀，得1.96mg/ml的内标储备液。后稀释成100ng/mL的内标标准溶液，置于4下保存备用。3.2动物分组与处理3.2.1动物分组将大鼠分2组，每组8只，雌雄各半。第一组葛根素组；第二组复方桂枝葛根汤组。给药前禁食12h，饮水自由。葛根素组大鼠按30mg/kg的剂量口服给予葛根素，复方桂枝葛根汤组按5g/kg的剂量给予复方桂枝葛根汤。葛根素组在给药前及给药后0.083，0.33，0.83，1.3，2，4，6，8，10，16h,24h时间点采血，复方桂枝葛根汤组在给药前及给药后0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，4，6，8，12h时间点采血,经眼眶后静脉丛采全血约0.5mL，置肝素化试管中，6000rpm离心10min，分离血浆，-80保存待测。3.2.2血浆样品预处理采用蛋白沉淀法进行样品前处理，取100L血浆，加入10uL甲醇：水3(1:1)溶液，混合，加入300L含100ng/mL对羟基苯甲酸甲酯溶液的甲醇溶液后，充分振荡混匀，于14000g、4离心10min，取上清液进行分析。3.3高效液相色谱-质谱串联法的色谱与质谱条件流动相A为水相，5%乙腈（包含0.1%FA）；流动相B为有机相，95%乙腈（包含0.1%FA）。流速为0.2mLmin-1，柱温：室温，采用梯度见下表1。质谱条件，见表2。葛根素定量分析离子对m/z:415.2-295.2，IS定量分析离子对m/s:151.1-92.1。表1待测物和内标的色谱梯度TimeTimeEventsParameter0.3PumpsPumpBConc150.8PumpsPumpBCoc.1003.2PumpsPumpBCoc.1003.5PumpsPumpBCoc.155.0Stop-表2待测物和内标的质谱条件ItemsParameterScanTypeMRM(MRM)PolarityNegatvieIonSourceTurboSpray气帘气25入口电压-10出口电压-7离子源温度550C雾化气70辅助雾化气803.4药动学数据处理将测得的葛根素与内标的峰面积比值代入由随行的标准曲线拟合而成的一4元一次方程中，计算其浓度，计算平均值。将各组数据代入DAS2.0软件中处理，按二室模型拟合，得各组的药代动力学参数，并计算各药代动力学参数。4结果4.1HPLC-MS的方法学考察4.1.1专属性实验分别取大鼠空白血浆，空白血浆加标准品和IS样品，以及大鼠给药后的血浆样品按照步骤“2.4”项下方法操作处理，测得大鼠空白血浆、含药血浆和服药后血浆典型质谱色谱图，观察大鼠血浆中有无干扰物以及方法的专属性和特异性。如图，表明血浆中内源性物质不干扰样品的测定，葛根素和IS在当前色谱条件下峰形良好，单个样品分析时间5min，葛根素的保留时间约为2.61min,内标对羟基苯甲酸的保留时间约为2.18min。AB5C图1A空白血浆色谱图；B含药1ng/ml血浆葛根素及IS色谱图；C葛根桂枝汤在雌性大鼠4h血浆中葛根素色谱图及IS色谱图4.1.2标准曲线的制备配置浓度分别为10、20、100、500、2000、10000、20000ng/ml、的葛根素甲醇溶液，依次取上述浓度溶液10l，加入100l空白血清中，配置成药物浓度分别为1、2、10、50、200、1000、2000ng/ml的葛根素含药血清，按血清样品预处理项下操作，但不加入10uL甲醇：水(1:1)溶液，取上清液过微孔滤膜（0.45m），进样10l,记录谱峰。以待测物浓度为纵坐标，待测物峰面积与内标峰面积的比值为横坐标，用加权（1/x2）最小二乘法进行回归运算，求得直线回归方程，即为标准曲线。如图2，得回归方程：y=0.00422x-0.00256，r=0.9992，权重1/x2。在血药浓度1-2000ng/ml范围内与峰面积比线性关系良好，定量下限1ng/ml。6图2标准曲线4.2复方桂枝葛根汤的药代动力学研究取每个时间点的药物浓度数据，计算其平均值，标准偏差，相对标准偏差，如表3，表4。以时间为横坐标，血药浓度为横坐标，绘制药-时曲线图。将各组数据代入DAS2.0软件中处理，按二室模型拟合，得各组的药代动力学参数。表3复方桂枝葛根汤组不同时间点葛根素的血浆浓度time,h平均值标准偏差相对标准偏差0.251.360.8965.4%0.51.711.0762.6%0.753.351.5044.6%15.361.4827.6%1.52.080.4521.5%22.170.6529.9%41.300.097.1%60.820.1922.7%80.730.068.1%120.630.011.2%7表4葛根素组不同时间点葛根素的血浆浓度time,h平均值标准偏差相对标准偏差0.08355.08.114.7%0.3349.67.615.3%0.83195.612.66.4%1.3168.310.36.1%2174.09.85.6%4178.46.93.8%6129.84.23.2%858.11.01.7%1040.81.84.3%164.00.511.5%242.60.310.6%图230mg/kg葛根素组在大鼠中的药时曲线图图35g/kg复方桂枝葛根汤在大鼠中的药时曲线图从图2图3结果判定大鼠灌胃给予葛根素和复方桂枝葛根汤的体内药代动力学过程均符合二室模型，这是由DAS2.0药动学程序对数据进行处理，通过8拟合两种房室模型组合三种权重系数以及作散点图综合判断的结果，最终均以二室模型所拟合效果最佳，由此判定葛根素和复方桂枝葛根汤中葛根素口服给药途径在体内药动学过程为二室模型。表5统计矩参数参数单位复方桂枝葛根汤组葛根素组MeanSDMeanSDAUC(0-t)ug/L*h15.10.9139225.2AUC(0-)ug/L*h20.25.0140525.1AUMC(0-t)ug/L*h63.01.5736931123AUMC(0-)ug/L*h1891227285182MRT(0-t)H4.20.25.00.08MRT(0-)H8.73.85.20.12VRT(0-t)h211.70.3513.50.79VRT(0-)h210798.418.62.7t1/2zH6.53.83.40.6TmaxH1.001.61.5Zeta0.140.090.210.06Cz(尾点回归值)ug/L0.460.22.350.90Cmaxug/L5.41.519611.5由表5上药动学参数及它们的药时曲线图得知，葛根素在体内吸收、分布过程远远快于消除过程，达峰时间分别为1.0h和1.6h，说明葛根素血药浓度能迅速达峰，在体内能较快地被吸收，这与文献10记载的葛根素药动学研究结果吻合，认为葛根素的药动学过程特征为在体内代谢较快，容易被破坏，生物利用度低。本实验证实，大鼠灌胃给予葛根素与复方桂枝葛根汤后的药动学行为具有显著性差异。葛根素组t1/2=3.5,复方组的t1/2=6.5，具有显著性差异(单体样本T检验，P0.05)，复方组中的葛根素在大鼠体内消除过程较慢，说明复方组中某种成分阻碍了葛根素在大鼠体内的消除，使葛根素的消除半衰期延长；复方组较葛根素组Tmax降低，表明以复方应用时葛根素血药浓度更快达峰；两组MRT也存在明显的差异（单体样本T检验，P0.05），表明以复方应用时，葛根素在体内的分布比单体应用时分布广，体内滞留时间延长。复方中其它成分对葛根素药动学影响的具体原因有待进一步研究确证。本实验以葛根素为测量指标，采用HPLC-MS研究葛根素单体，复方葛根桂枝汤经口服给药在大鼠体内药代动力学特征。本方法专属性高、灵敏度高、准确性好、稳定等特点，可用于复方中葛根素药代动力学研究。95讨论5.1测量指标的选择中药复方药动学的研究，存在代表整个处方指标选择困难问题。实验选用葛根素作为测量指标，葛根是复方葛根桂枝汤中的君药，葛根素是葛根的主要有效成分，且现在对葛根素有一定的研究基础，为葛根素作为测量指标提供了依据。且复方葛根桂枝汤中，除葛根外，主要有臣药桂枝和白芍，其中葛根在汤中比例最高，白芍、桂枝次之，三药比例为6:3:2。复方有效成分含量低，本就难以检测，选择高含量的葛根能降低实验的灵敏度要求，增加实验的可行性。葛根素是从葛根中提取的主要有效成分，现有研究显示，葛根素吸收较快，但胃肠道吸收程度较差。口服生物利用度较低，大部分经粪便以原型排泄，少部分吸收入血11。综上所述，本实验选取葛根素为测量指标，测定复方葛根桂枝汤中葛根素的药动学行为，分析该处方中药配伍的合理性。5.2血浆样品的处理血浆、血清等含大量蛋白质的物质，待测成分容易与蛋白质结合，而且蛋白质受到氧气和微生物的影响发生氧化、降解等变质现象。所以在样品的预处理要注意时间的把握，从冰箱取出来后需快速处理，避免样品因外在条件而影响测量结果。血样处理方法常用到的蛋白沉淀试剂有甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂，本实验使用甲醇，据王雪莉12等研究指出，甲醇能较好的沉淀血浆中蛋白，提取效果较好，对待测成分的损失较少。若甲醇加入量不足，血浆中蛋白沉淀不完全，对待测指标成分有粘附作用，容易发生指标成分分离不佳的现象，血样中其他内源性物质容易粘附或沉降在色谱柱上，使柱效下降，降低色谱柱的洗脱能力，从而对质谱分析产生影响，对此在预实验过程中，曾用原液体积的2倍、3倍、5倍甲醇作沉淀蛋白测试，结果显示取100L血浆加300L的甲醇沉淀蛋白效果最佳。5.3检测条件5.3.1色谱条件的选择高效液相测定葛根素含量时，流动相的选择较困难，需大量实验摸索才能10够达到所需要的峰形。本实验我先用2010年版中国药典葛根中葛根素含量测定的流动相甲醇-水（25：75）做为流动相，测定复方血浆样品，结果分离效果较差。所以尝试改变流动相的比例分析色谱图，多次实验发现改变流动相比例所得的质谱图都不是很理想。则考虑到所需要的色谱峰等度洗脱不能很好的分离出来，则用梯度洗脱。通过不断的摸索实验，最好选择得出本实验的色谱流动相为5%乙腈（包含0.1%FA）：95%乙腈（包含0.1%FA）梯度洗脱，0-5min，有机相从0%-100%-0%，水相则刚好相反。5.3.2质谱条件的选择葛根素在ESI离子源各自正负离子模式下的响应情况做比较，发现负离子模式响应值高且稳定，它们各自的母离子m/zM-H415.2，m/zM+H416.2。通过对碰撞能量等条件优化发现葛根素两个离子对m/z:415.2-295.2;m/z:415.2-267.2，其中m/z:415.2-295.2离子对响应值较高，选此离子对作为定量分析。离子源被优化的工作参数包括：源电压、加热毛细管温度、鞘气、辅助气、透镜电压等工作参数。二级质谱打碎优化的工作参数包括：碰撞能量和碰撞气压力。一级质谱及二级质谱产生的被测化合物的离子根据以前报道的方法鉴定。5.4研究结果差异性探讨潘璐琳13等的研究表明大鼠分别灌胃给予葛根提取物和脑得生片，药-时曲线均符合二房室模型，Tmax无较大差异。但是，灌胃脑得生后葛根素的max为葛根提取物的2.23倍，AUC(0-t)为3.03倍，CL为0.54倍。这种差异表明，脑得生中的其他配伍药材对其葛根素的体内过程有较大的影响，提高了葛根素口服吸收的生物利用度。与本实验所得数据存在差异，结果相似，但本实验却无法直接从药动学参数得出关于生物利用度高低的结论，由于本实验给药时没有统一葛根素的含量，实验得出的AUC、VRT、Cmax没有可比性，实验结果通过比较Tmax、MRT、t1/2得出结论，李煦颖14等研究证明不同剂量葛根素在大鼠体内的药代动力学存在差异，指出高、中、低剂量组的Tmax、MRT、t1/2不存在显著差异，证明给药剂量的不同对这些参数的影响不明显，故Tmax、MRT、t1/2具有一定的可比性，得出的结果有意义。实验数据存在差异还11可能由于检测方法不同引起的，HPLC-MS拥有非常高的灵敏度，获得的数据可靠性高。郭莹,万海同15等研究提出葛根素药动学的差异还跟实验的动物及动物所处的生理病理状态、给药的方式相关。陈晓兰，杜守颖16等通过对静脉注射、鼻腔给药、灌胃三种给药方式下葛根素的药动学比较研究，发现鼻腔给药吸收迅速，生物利用度较口服高。本次受试药物为汤剂，吸收时间比静注延长。血管外给药在药物分布和吸收方面比静脉注射或滴注的给药方式要复杂得多。5.5研究展望通过实验结果可得，复方桂枝葛根汤中复杂成分能影响其有效成分葛根素的体内药动学行为。结合前人的研究结果，提示我们将中药复方制剂进行临床应用时，应考虑中药复方中其它复杂成分对有效成分药动学的影响，这些影响可能会造成其药理作用及临床疗效的差异。因此，研究中药复方的药动学，仅对其中某一有效成分单体进行药动学研究不能反映该中药复方的整体药动学特点，若以单一成分体现一个中药复方汤剂的药代动力学特性，不利于反映出中药复方整体药动学特性，应对其有效成分及其影响因素进行全面研究，才能得到科学准确的数据，才能为临床合理用药提供切实、可靠的理论支持。参考文献1韩国柱中草药药代动力学M中国医药科技出版社，1999：184-1912张敏.桂枝加葛根汤治疗颈椎病100例的疗效观察J.中国医学装备，2014，11：395-396.3刘梅，王拥军，施杞，等.葛根汤和桂枝汤调节椎间盘组织Fas、bcl-2蛋白表达的实验研究J.中国骨伤，2004,14（10）：198-200.4姚丹，丁选胜葛根素药理作用机制探讨及临床应用J中国临床药理学与治疗学，2008，13(4)：4684725GaoQ，YangB，YeZG，eta1Openingthecalciumactivatedpotassiumchannelparticipatesinthecardioprotectiveeffect12ofpuerarinJEurJPharmacol，2007，574(2-3)：179-1846陈晓兰，杜守颖，陆洋，等葛根提取物不同途径给药后葛根素在大鼠体内药代动力学研究J中华中医药杂志，2011，26（10）：2408-24117杜力军，於兰，常琪新工艺制备的葛根黄的药代动力学研究J中药药理与临床，1997，13（20）：198朱秀媛，苏成业，李振华，等葛根有效成分的代谢研究葛根素的代谢及其药代动力学分析J药学学报，1979，14（6）：3499Y，PanWS，ChenSL，eta1Pharmacokinetic，tissuedistribution，andexcretionofPuerarinandPuerarinphospholipidcomplexinratsJDrugDevIndPharm，2006，32(4)：413-42210JeevanKPrasain，NingPeng，RayMoore，eta1TissuedistributionofpuerarinanditsconjugatedmetabolitesinratsassessedbyliquidchromatographytandemmassspectrometryJPhytomedicine，2009，16(1)：65-7111邓新国，胡世兴，张清炯，等葛根素腹腔注射在家兔房水中的药代动力学研究J眼科研究，2003，21（3）：25812王雪莉，邢东明，盖国胜，等.微细化工艺制备的葛根微粉溶出度和生物利用度的研究J.中国药学杂志，2004，39（4）：283.13潘璐琳，欧阳臻，杨雨，等.葛根及复方中葛根素在大鼠体内的药动学研究J.中国药学杂志，2009,44（9）：703-705.14李煦颖,赵妍,王琳，等.葛根素及葛根提取物在大鼠体内药代动力学研究J.中国生化药物杂志，2009,30（6）：383-386.15郭莹,万海同,张莉,等.葛根素的药代动力学研究概况J.时珍国医国药，2006，17（6）：1083-1084.16陈晓兰，杜守颖，陆洋,等.葛根提取物不同途径给药后葛根素在大鼠体内药代动力学研究J.中华中医药杂志，2011,26（10）：2408-2410.13综述葛根素的药动学研究概况自古以来，葛根就是一种比较常用的中药材，葛根素就是葛根的主要有效成分之一，别名葛根黄酮，英文名Puerarin，葛根素化学名为4,7-二羟基8-D吡喃葡萄糖醛基异黄酮，化学式为C21H20O9，相对分子量为416。易溶于甲醇等极性大的溶剂，不溶于氯仿等极性小的溶剂。葛根素具有抗心律失常的作用，能够扩张冠状动脉，抗心肌缺血，能降低血黏度，抗血小板活性，改善纤溶活性及减轻炎症反应，有利于冠脉内血栓的消除。能够扩张脑血管，加快脑血流速度，增加脑血流量。可抑制D-半乳糖诱导的蛋白糖基化反应，对糖基化状态并发的脑神经细胞损害具有保护作用。葛根素还是一种有效的自由基清除剂，能有效地清除自由基，抑制细胞膜、脾、肝、脑组织的氧化损伤。葛根素通过下调型糖尿病大鼠脂肪组织ADRP基因mRNA表达，降低胰岛素抵抗水平，改善脂代谢紊乱1。葛根素是治疗心血管疾病的主要有效物质，临床广泛用于治疗糖尿病、高血压、冠心病等病症2。近年来随着葛根素日益广泛用于临床，有关不良反应，甚至罕见不良反应也不断见于文献，其发生原因与患者体质、药物及其纯度等相关。随着药物化学的发展及人类健康水平的不断提高，对药物的药代动力学性质的要求越来越高。判断一个药物的应用前景特别是市场前景，不单纯是疗效强，毒副作用小；更要具备良好的药代动力学性质。为了给临床葛根素新药的设计提供依据，现就近年来葛根素药代动力学研究概况综述如下：1葛根素药动学研究的方法1.1血浆样品的处理方法血浆样品中含有许多内源性物质和蛋白质等杂质，对药代动力学样品的处理主要是去除其中的蛋白，多加入有机溶剂。血浆与甲醇的比例多为1:4，血浆14与6%的高氯酸钾的比例为1:1，血浆与乙腈的比例为1:4。离心，取上清液。1.2检测方法目前中药药动学研究的主要方法可以分为两大类：一是针对有效组分明确的中药，即体内药物浓度法；二是化学基础研究相对薄弱、成分尚不明确的中药及复方，该类主要以生物效应法为研究方法。目前对于葛根的有效组分研究较为深入和明确,普遍采用体内药物浓度法，如血药浓度法。针对此方法，一般利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)。随着检测技术的不断进步，色谱联用技术已经成为中药复杂成分分析中的一种重要手段。高效液相色谱二极管阵列检测法（HPLC-DAD）、高效液相色谱-质谱法（HPLC-MS）、超高效液相色谱质谱法（UPLC-MS）等方法均已用于葛根有效组分及其复方的药代动力学研究。有以大豆苷元、对羟基苯甲酸为内标物的内标法。用外标法测定血或组织中的葛根素，流动相多用甲醇-水（或酸水）系统，甲醇比例多为25%左右。荧光分光光度法也能用于葛根素含量的检测，但因其灵敏度低，少有人使用。2葛根素药动学研究结果2.1吸收研究表明通过口服给予葛根素后，葛根素在大鼠肠内的吸收速率常数为0.0320.012h-1，吸收率在16.98%21.78%之间。因为葛根素水溶性和脂溶性较小，不易透过生物膜，使它在肠道内的吸收速率常数较小，吸收较慢(4h吸收率仅为20%左右）。冬菊3等研究了葛根素在大鼠小肠内的吸收，发现吸收剩余药量的对数与时间呈现良好线性关系，表现为一级动力学过程；葛根素在肠内吸收总量与药物浓度成正比，其吸收机制为被动扩散。葛根素属于偏亲水性，在酸性条件下P值最大，说明葛根素在酸性条件下的亲水性小，亲脂性相对较大；在胃肠道吸收方面，实验结果表明,葛根素在胃中吸收略高于小肠吸收,也验证了葛根素为弱酸性，而弱酸性药物在胃的酸性条件下为非解离型,亲脂性较大，比较容易吸收。但由于各种pH值下，P值均较低,说明其亲脂性较差,预示其在细胞跨膜转运实验的低表观渗透系数、在体胃、肠吸收实验中的低吸收百15分率和整体实验中的低生物利用度4。2.2分布小鼠静脉注射葛根素后，迅速分布在肝、肾、血浆、脾、肌肉、肺和生殖器官（子宫和睾丸）中，且在肝脏与肾脏中分布的葛根素浓度最高，在心脏与脑组织中葛根素的浓度相对其他组织较低。小鼠灌胃给药的分布与静脉注射给药相似，灌胃给药葛根素分布在各组织器官中的浓度均较静脉注射低，但葛根素静脉注射给药的分布在肝与心、肝与脑的比例，和肾与心、肾与脑的比例比口服给药时的相应比例高5。葛根素可通过血脑屏障进入脑内，但含量较低。蛋白结合实验表明，葛根素同肝、肾、血浆、肺组织蛋白结合率分别为（32.54.4)%、（27.13.1)%、（24.63.5)%及15.8%。葛根素能透过血-眼屏障，进入房水、玻璃体,但进入玻璃体内的葛根素浓度很低6。2.3代谢和排泄葛根素口服主要通过粪便排泄，静脉注射则主要肝肾代谢，由尿液、胆汁排出。葛根素在大鼠肝脏的消除呈线性动力学过程，且周边室的表观分布容积(Vp)减少，提示葛根素能够特异性的分布到肝脏，从而增大葛根素在肝脏中的浓度。维拉帕米和红霉素的加入可抑制葛根素在大鼠肝脏的消除，而利福平的加入可加速葛根素的消除，由此可推测,细胞色素P450可能参与了葛根素在大鼠肝脏的消除过程7。2.4药动学参数葛根素在SD大鼠胃及小肠吸收分别为(21.0411.63)%及(20.774.54)%;葛根素单剂量口服给予Beagle犬后，血药浓度变化符合一室模型,t1/2为2.291h,AUC0-24为9.919mg/，Tmax为1.500h，max为1.270mg/ml，生物利用度为6.40%。朱秀媛8等根据静脉注射后药代动力学参数：葛根素分布半衰期t1/2()仅3.0分钟,说明药物由中央室向周边室的分布极为迅速。消除半衰期t1/2()为18分钟，说明排泄及代谢较快,中央室表观分布容积v1为19.9ml，16约占体重的13%,总表观分布容积vd为53.7ml，约占体重的36%,说明该药在体内分布较广。小鼠、大鼠、兔口服葛根素制剂后，葛根素在体内的药-时过程为线性动力学过程，符合二室模型。2.5影响因素从上文葛根素的代谢排泄的论述，可看出不同的给药方式对他的药代动力学有影响。不同的实验动物，药动学也存在差异，葛根素在大鼠、兔、犬,种动物体内的药代动力学参数与其体重具有相关性：表观分布容积、稳态分布容积