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2 2 1动物细胞培养和核移植技术 2 2动物细胞工程 动物细胞工程 动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合生产单克隆抗体等 动物细胞培养 对于皮肤烧伤的病人该如何治疗 概念 一 动物细胞培养 细胞株 细胞系 取动物组织块 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 动物胚胎或幼龄动物的组织 器官 此处细胞在该生活环境中能无限生长和增殖吗 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质 动物细胞培养过程 动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 剪碎 胰蛋白酶 传代培养 无限传代 10代以内 保持正常二倍体核型 加培养液制成 单个细胞 分瓶继续培养 动物细胞培养液的主要成分 1 液体培养基2 成分中有动物血清等 营养需要 基本营养物质 包括水 葡萄糖 氨基酸 维生素及一些无机离子 血清 体外培养细胞既需要上述基本营养物质 还需要促细胞生长因子等物质才能正常生长 繁殖 血清中含有多种这类物质 有利于多数细胞的存活和生长 较植物组培培养基有何独特之处 动物细胞培养条件 1 无菌 无毒的环境 添加一定量的抗生素 定期更换培养液 2 营养 葡萄糖 氨基酸 促生长因子 无机盐 维生素 微量元素 动物血清 血浆等 3 温度和ph温度36 5 0 5度 ph7 2 7 44 气体环境o2和co2 95 空气和5 co2 通常采用培养皿或松盖培养瓶 将其置于含95 空气加5 co2的混合气体的培养箱中进行培养 维持培养液的ph值 动物细胞生长特性 细胞贴壁 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上 称为细胞贴壁 培养瓶或培养皿的内表面光滑 无毒 易于贴附 细胞的接触抑制 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时 细胞就会停止分裂增殖 这种现象称为细胞的接触抑制 要求 有关概念 从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞 动物组织消化后的初次培养称为原代培养 将原代细胞从培养瓶中取出 配制成细胞悬浮液 分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养 称为传代培养 原代培养 传代培养 如何界定原代培养和传代培养 细胞株和细胞系 遗传物质改变 遗传物质未改变 洗涤 稀释 分离 植物组织培养和动物细胞培养的比较 动物细胞培养 植物组织培养 植物组织培养和动物细胞培养的比较 获得细胞 细胞的全能性 细胞株 细胞系 植物体 快速繁殖 培育无病毒植株等 葡萄糖 动物血清 蔗糖 植物激素 液体培养基 固体培养基 细胞增殖 动物细胞培养技术的应用 生产蛋白生物制品 病毒疫苗 干扰素 单克隆抗体等健康细胞培养 如获得大量自身的皮肤细胞 用于植皮 用于检测有毒物质用于生理 病理 药理等方面的研究 为治疗和预防疾病提供理论依据 二 动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核 移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中 使其重组并发育成为一个新的胚胎 这个新的胚胎最终发育为动物个体 克隆动物 分类 细胞分化程度低 恢复全能性容易 细胞分化程度高 恢复全能性不容易 一 动物细胞核移植概念 卵细胞 乳腺细胞 c母绵羊子宫 多利羊 多利羊的培育过程 2001年11月3日下午6点零5分 在莱阳农学院动物胚胎工程中心实验场 一头名叫 桂花 的黑白花奶牛 只用了15分钟 就顺利产出一头全身黑色的雌性肉牛 专家们给它起了一个吉祥的名字 康康 二 体细胞核移植的过程 以高产奶牛为例 培养 取出核 甲牛供体 乙牛受体 去除核 核植入 卵裂 早期重组胚胎 代孕母牛丙 移植 克隆牛 遗传物质与甲基本相同 细胞核移植 胚胎移植 物理或化学方法激活 显微操作法 4 过程 请看教材p48图2 21 核移植的受体细胞是什么 处在什么时期 用此细胞作为受体细胞有什么好处 减数第二次分裂中期卵母细胞 卵母细胞体积大 便于操作 含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件 胚胎移植 体细胞核移植过程 体细胞克隆动物 供体细胞 重组细胞 代孕母牛 体细胞的核移植过程 p49讨论 1 在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前 为什么必须先去掉受体卵母细胞的核 2 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞 想一想 这是为什么 3 你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物 是对体细胞供体动物进行了100 的复制吗 为什么 5 体细胞核移植技术的应用前景 1 在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程 2 保护濒危物种 3 医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植 4 了解胚胎发育和衰老过程 追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病 6 体细胞核移植技术存在的问题 1 成功率非常低2 许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷3 克隆动物食品的安全性问题 小结 动物细胞培养 动物细胞培养概念动物细胞培养的过程动物细胞培养的条件动物细胞培养技术的应用 动物体细胞核移植技术和克隆动物 核移植技术和克隆动物的概念 体细胞核移植技术的过程 体细胞核移植技术的应用前景 体细胞核移植技术存在的问题 下列有关动物细胞培养的叙述 不正确的是 a 用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织b 将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞c 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离 制成悬浮液d 动物细胞培养只能传50代左右 所培养的细胞就会衰老死亡 练习 d 动物细胞体外培养时 通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质 下图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果 从该图提供的信息可以获得的正确结论是 a 正常细胞与癌细胞的增值速率相同b 有无血清对正常细胞培养的影响不同c 培养基中补充血清有助于正常细胞的培养d 培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大 bcd 离体的植物组织或细胞在适当培养条件下发育成完整的植株 离体动物体细胞却没有发育成动物的成熟个体 原因是 a 动物细胞内没有成套的遗传物质b 动物细胞的全能性随分化程度提高而受到限制 分化潜能变弱c 动物细胞的细胞核太小d 动物细胞的全能

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