【毕业学位论文】（Word原稿）脑肠肽Ghrelin对脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体-1调节作用研究

兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 1 前 言 脓毒症肠道功能障碍或衰竭，主要表现是胃肠动力、营养转运吸收及肠上皮屏障功能障碍，营养底物尤其是蛋白质、葡萄糖无法在肠道内转运吸收，出现腹痛腹胀、营养不良、肠粘膜萎缩、免疫功能紊乱、菌群失调，最终导致肠道细菌、内毒素易位及肠源性感染，在此基础上引发或加重其他器官功能衰竭，故肠功能衰竭又被称为多脏器功能衰竭的 “发动机 ”1足见肠道在脓毒症及 迄今为止，对脓毒症肠道功能障碍认识与研究不足， 严重感染病人肠道功能障碍 尚无有效调控治疗手段 ， 胃肠道粘膜的抗损伤和促修复相关因素 尚在探索之中。 作为预防性保护胃肠功能手段包括早期肠内营养、微生态制剂、丙氨酸 药大黄、小剂量前列环素、胃肠道去污染等途径，试图达到维护肠黏膜正常的结构与屏障功能 5、调节肠道菌群生态平衡 6、改善胃肠黏膜低灌流状态，清除氧自由基、预防肠缺血 7的目的，但临床疗效并不尽如人意。 营养物质吸收功能是肠道基本功能，研究发现 肠道蛋白质吸收的主要途径是肠上皮细胞 短 肽载体 (1对蛋白质分解产物 短肽 (二肽、三肽 )的转运 8，且 在病理状态下 9。 然而， 脓毒症时机体处于严重应激状态，肠道组织细胞缺血、缺氧，可能影响着肠道上皮细胞内 氧与注氧后 基因水平下调了肠上皮细胞刷状缘 10； 腔注射脂多糖（ 降低大鼠空肠 并非 地塞米松能阻止 11。 受炎性介质影响。应用小鼠腹腔注射 肠上皮 增强了近端和远端结肠部分的 12；小鼠腹腔注射2100端结肠部也有微量表达，但是对空肠和回肠 12。总之，小肠上皮 善 迄今为止 ， 严重感染病人肠道蛋白质营养底物摄取的详细机制及可能调控因兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 2 素尚不十分清楚 ， 经肠补充的蛋白质底物与病人的实际吸收和利用率存在严重的不符。由于蛋白质的吸收与代谢在脓毒症的治疗及恢复中占有重要地位，研究脓毒症蛋白质吸收途径的调控对脓毒症治疗具有重大意义。 研究发现肠功能衰竭在很大程度上也是内分泌功能尤其是胃肠激素、脑肠肽类激素的分泌的衰竭。新近研究 的脑肠肽 体液途径调节胃肠功能，作为胃肠道粘膜的抗损伤和促修复的有效手段受到瞩目。 999年从大鼠胃黏膜及下丘脑发现的一种新脑肠肽激素 ， 是迄今发现的唯一生长激素释放激素受体 (内源性配体，由 28个氨基酸组成 13。循环中的 ， 1/3由肠粘膜 产生，且其受体（ 泛分布于胃肠道组织中，在胃肠功能方面起着重要作用 14包括：促进食欲、增进饮食、增加体重 、促进胃肠动力 等。在小鼠失血性休克及胃黏膜损伤模型中， 改善胃黏膜损伤 20 8 轻了绒毛的缩短、降低 制饥饿诱导的小肠上皮细胞的凋亡 26。尤为重要的是， 出脓毒症时胃肠功能障碍调控作用的潜能。 27在 2007年首度发现 素；动物实验中显示，脓毒症晚期（ 0h），血清中 脓毒症早期其受体水平显著提高 28。 善肠道黏膜通透性，减轻肠壁水肿，减少细菌移位 29，减少死亡率 30。同时在脓毒症早期，外源性 改善脓毒症血管过度收缩，改善组织灌注，延缓脓毒症向休克进展 31。在脓毒症动物实验中外源性 2,33、减弱脓毒症诱导的急性肺损伤 34、保护内毒素诱导的肾衰 35等作用。表明，持脓毒症胃肠功能屏障、减少细菌移位以及改善后续的 示出对肠衰竭治疗的潜能。研究表明， 善全身及局部炎性状态。离体试验显示 生、单核细胞粘附以及 体试验中， 制内毒素诱导的细胞因子（ 生 36。 37的实验也证实 ， 小鼠内毒素血症模型上，发现把 淋巴细胞共孵育，能大大降低致炎物质诱导的炎性细胞因子 为重要，在严重脓毒症时外源性 1（ 抑制 通路改善组织的灌注及功能 38。 39研究亦证实了明 炎机制显示， 位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 3 质的释放减轻靶器官损害 40。 而 要受血糖及胰岛素水平的调控，危重患者存在着胰岛素抵抗会影响到胃肠道吸收功能。研究证实 ， 以改善胰岛素抵抗，从而促进胃肠道吸收功能 41。 但 注。 根据和 外环则含有多个氨基化位点，提示激素可参与 42。 已 发现的可调节 状腺素、糖皮质激素、表皮生长因子、胃泌素、 胆囊收缩素 及胰岛素等 43。 下丘脑双重分布激素，其 受体广泛分布于胃肠道黏膜组织， 不但具有重要的能量代谢调节作用，而且具有促进食欲、增加摄食及消化道细胞增殖、抑制炎性介质释放、维持 脓毒症胃肠功能屏障、减少细菌移位以及改善后续的 前为止，通过脑肠肽改善脓毒症肠功能、维护机体的氮的吸收的重要课题在国内外尚无深入研究。 本课题认为， 脓毒症病理机制复杂， 到内毒素、缺血、缺氧及炎性介质等多因素影响，由于 促进动物摄食行为、增进食欲 、增加体质量及对胃肠道粘膜的抗损伤和促修复、 改善组织灌注 、抑制炎性反应方面发挥作用，显示出 调控脓毒症状况下对肠上皮 能与表达进行调控的潜能， 以此推测， 能在改善脓毒症时肠道 达及活性抑制发挥保护作用。 基于以上假说，本课题建立大鼠盲肠结扎穿刺模型（ 将探讨： （ 1）脓毒症状况下 小肠上皮 物学功能变化以及与 平变化 相关性 ；（ 2） 给予外源性 肠上皮 达和功能影响。本课题希望通过研究 外源性 肠道短 肽吸收载体 调控作用，揭示 脓毒症肠道吸收功能的影响，探索脓毒症肠功能衰竭治疗的新途径。 兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 4 第一部分：脓毒症大鼠小肠上皮 短肽载体 物学功能变化及与 关性 言 小 肠上皮短肽载体 (1对蛋白质分解产物 短肽的转运是肠道吸收蛋白质的主要途径 44，在 脓毒症复杂病理条件如 内毒素、缺血、缺氧及炎性介质等多因素影响下 ，小肠上皮 关研究甚少 。 新近发现的激素 已表明，脓毒症时血清中 给予外源性 28。但脓毒症时机体自身 平是否影响着 小 肠上皮 本研究拟采用盲肠结扎穿刺（ 型，探讨脓毒症小肠上皮 及 与 为脓毒症肠道功能障碍防治提供理论基础。 料与方法 究对象 选取 性 重 275 上海交通大学附属 第一人民医院实验动物中心提供，动物许可证号： ） 2009 要实验仪器 旋涡振荡器 (型号： 海青浦泸西仪器厂 超级净化工作台 型号： 国 高压蒸汽灭菌器 型号： 海申安医疗器械厂 酶标仪 型号： 兰雷勃酶标仪 低温冷冻离心机 型号： 国 紫外杀毒车 型号： 海跃 进医用光学器械厂 匀浆机 型号： 国 倒置荧光显微镜 型号： 本 液枪 型号： 国 型号： 国 兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 5 冷藏冰箱 型号： 来克斯 冰箱公司 流式细胞仪 型号： L 美国 图像分析系统 型号： 本 型号： 胶成像分析系统 胶成像分析系统 超低温冰箱 型号： 国 恒温振荡器 型号： 海精宏实验设备公司 石蜡切片机 型号： 北 徕克公司 生物安全柜 型号： 2 美国 摊骗机 型号： 北 徕克公司 光学显微镜 型号： 本 效液相色谱仪 型号： 本岛津 干式恒温器 型号： 州蓝焰科技有限公司 电子天平 型号： 海舜宇恒平科学 仪器 要 实验 试剂 国 兔抗大鼠 美国 兔抗大鼠 英国 国 美国 美国 氯仿 海试剂一厂 碧云天 生物科技有限公司 美国 国 异丙醇 州振亚化工厂 焦碳酸二乙酯（ 上海基尔顿生物科技有限公司 上海基尔顿生物科技有限公司 海基尔顿生物科技有限公司 逆转录试剂 上海基尔顿生物科技有限公司 上海基尔顿生物科技有限公司 中性树脂 上海基尔顿生物科技有限公司 无水乙醇 海振兴化工一厂 兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 6 甲醛 上海国药集团 美国 杰美基因生物公司 流式抗体 美国 美国 R&组织 美国 R& 美国 R&组织 美国 R& 美国 R&组织 美国 R&要实验用试剂的配置 (1) 8g 于双蒸水中，定容至 1000装，高压灭菌后 4 保存。 (2) 制备分离胶 ( 30: w/v 丙烯酰胺：双丙烯酰胺 30% 38ul 合 ， 灌胶前加入 0% 36 5体积 胶浓度 10% 用注射器将配制好的溶液缓慢加入到装配好的板中至凝胶高度为 6厘米左右，预留 板凝胶溶液上覆盖 置 1小时左右至聚合完全。 (3) 制备基层胶 30:w/v 丙烯酰胺：双丙烯酰胺 660 M 630 州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 7 20% 25 ul 3.6 合 ， 灌胶前加入 0% 25 5体积 5用 纸吸去分离胶上层覆盖的所有溶液 ， 如上配制积层胶。用 10射器将积层胶加入板中至顶端，小心插入梳子，注意不要产生气泡。凝胶聚合 1 小时左右。 (4) 1M 2.4 0% 3 油 (100%) 3 巯基乙醇 1.6 酚蓝 体积 10 储存于 4C) 准备 1X 上样缓冲液的样品液：如 6 白样品加入 3 X 上样染液储存液。每孔配制含 50蛋白样的样品液。上样前煮沸 3 分钟。 (5) 蛋白质转移缓冲液 氨酸 醇 1L 加水至总体积为 5L (6) 甘露醇 10甲磺酰氟 2mM 于双蒸水中，定容至 1000装，高压灭菌后 4 保存。 (7) 100 100 10mM 州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 8 溶于双蒸水中，定容至 1000装，高压灭菌后 4 保存。 (8) 洗膜缓冲液 马来酸 100 150 v/v） 于双蒸水中，定容至 1000装，高压灭菌后 4 保存。 毒症模型制备 参照 45的盲肠结扎穿孔（ 法。 实验前动物禁食 12h， 自由饮水 ， 腹腔内注射 巴比妥钠 40mg/醉成功后， 行 无菌操作 ， 铺无菌巾， 腹正中切口 2 逐层分离腹壁， 轻轻挑出盲肠， 于盲肠盲端 2/3处用 4号线结扎 ， 避免结扎血管， 用 18轻 将盲肠贯通穿孔一次 ， 穿孔为两个 ， 轻轻挤出少许粪便 ， 动作轻柔， 避免损伤肠系膜血管，然后将盲肠还纳腹腔 ， 逐层缝合腹壁切 口 ，消毒切口 。 动物处置方法符合动物伦理学标准。 验分组 及处理 60 只大鼠按随机数字表法分为 对照组（ n=10）和脓毒症模型组（ n=50），脓毒症组又根据模型建立后 4h、 8h、 12h、 16h、 20h 随机分为 5 个亚组 ，每组 10只 。 对照组 大鼠剖腹后仅分离盲肠，不结扎和穿孔 ；脓毒症组大鼠剖腹后行 组术后均给予生理盐水 30ml/下注射。 分别在建模 4h、 8h、 12h、 16h、 20机处理 10只 大鼠 ， 留取静脉血 4 以 取上段空肠，长度约 15部分 测黏膜 部分 行小肠黏膜 病理，一部 分 于 4 下 制备 小肠黏膜刷状缘囊泡（ ， 待测小肠 上皮 及 功能。 本检测 肠黏膜病理 小肠黏膜病理采用 苏木素一伊红 (色 方法 ，光镜下观察 小 肠黏膜病理学变化。 具体步骤如下： a、取材与固定：将大鼠小肠 1组织块 于 10福尔马林中固定 24h 以上 ； b、组织冲洗：流水冲去固定液； c、组织脱水、透 明； d、组织包埋：常规石蜡包埋； e、组织修块； f、切片：用石蜡切片机切片，厚约 3m；兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 9 g、组织贴片： 45 水浴展片， 载玻片捞片 ，置于 65 恒温干燥箱，待石蜡完全融化后，取出； h、 色； I、封片、光学显微镜观察。 肠黏膜及血清 定 采用酶联免疫吸附法（ 定 小肠黏膜 组织 及血清 体操作流程如下： （ 1）标准品的稀释 ，制作标准曲线 ；（ 2）加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准 品准确加样 50测样品孔中先加样品稀释液 40后再加待测样品 10 3）温育：用封板膜封板后置 37温育 30 4）配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用；（ 5）洗涤：小心揭开封板膜，弃去洗液，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30s 后弃去，如此重复 5 次，拍干；（ 6）加酶：每孔加入酶标试剂 50白孔除外；（ 7）温育：操作同（ 3）；（ 8）洗涤：操作同（ 5）；（ 9）显色：每孔加入显色剂加入显色剂 轻振荡混匀， 37避光显色 10 10）终止：每孔加终 止液 50止反应（此时蓝色转为黄色）；（ 11）测定：以空白孔调零，450长依序测量各孔的吸光度（ ）。 白印迹（ 测 白表达 （ 1） 制作大鼠小肠粘膜刷状缘囊泡（ 46：在 4 下进行，冰盐水清净 大鼠肠管，纵向剖开肠管， 置于冰板上 ，固定肠管 ， 刮取肠粘膜组织，称取重量 2g 后，加缓冲液 1 (10露醇 ， 甲磺酰氟 ， 2 分钟， 在 4 、 16000g 条件下 离心 2 分钟 ， 取上层清夜 加 入24冲液 1 振荡混匀，取出后加氯化钙（浓度 10拌并放置 15 分钟（步骤 1）。将此浑悬液在 4 、 3000g 条件下离心 15 分钟，取上层清夜加入 10，并再次充分振荡混匀。将该混合液 在 4 、 27000g 条件下离心 15 分钟，得到的沉淀加缓冲液 1（步骤 2）， 重复 步骤 1 和步骤 2 两 次。得到的最终沉淀用 18 号细针反复抽取加入缓冲液 2（ 100mM 100 10， 缓冲液的 持在 用 。 （ 2）将提取的 50总蛋白 ， 上样于 10% 丙烯酰胺凝胶，电泳后转膜至硝基纤维素膜。加入兔抗大鼠 克隆抗体 (封闭液 1： 1000 稀释 )， 膜在 5 液中室温孵育 1 小时以封闭膜上的非特异结合 ， 室温孵育2h，洗膜缓冲液（ 100来酸， 150洗膜后 ， 封闭过的膜加入一级抗体 4 过夜，抗原抗体结合。 膜 3 次，每次 5 分钟 。 加 入 1： 5000)以结合一级抗体 ， 室温孵育膜 1 小时 ，膜 3 次，每次 5 分钟，每次 膜上加 电化学发光（ 发光底物 ， 在暗兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 10 室内压片。同法显示， 为加样的内参照，稀释 1： 1500 鼠抗 克隆抗体作为一抗，稀释 1： 1500 记的 为二抗。 所有蛋白提取过程均在 4 进行防止蛋白分解。 化学发光试剂盒中两种试剂等比例混合为反应液 ，将膜置于反应液中室温孵育 5 分钟 ， 去除过量的溶液，将膜夹在两塑料薄膜之间，以 X 光胶片曝光 ， 片经 密度仪扫描，根据测定蛋白条带的面积和深浅计算光密度值 (件 )， 图片扫描保存为电脑文件，并用分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化 。并以同一样品中 密度 /密度比值作为 相对含量。 时定量 检测 达 （ 1）组织总 抽提 ： 将所试验的标本按序排放在管架，室温待解冻 ； 依次将各组组织转移至 12 55核酶 试管中 ， 依次每一管中加入 1动匀浆器 (转速 为 10000r/理 3045 秒 ， 每标本间处理后用酒精棉球擦拭 ，焦碳酸二乙酯 处理水清洗 。 各管中加入氯仿 200激烈振荡 15 秒 ； 在 4 、12000r/件下 离心 10 分钟 ； 小心吸出水层加入依次编号的 中 ， 再加入二倍体积的异丙醇 (约 600 轻轻振荡 混匀 ， 置于 箱 冷冻 30 分钟 ； 在 4 、10000r/件下 离心 10 分钟 ， 弃 去 上清 液 ， 留 取 沉淀 ； 然后 用 6505%乙醇洗涤沉淀 ， 在 4 ， 8000r/件下 ， 离 心 5 分钟 ， 弃 去 上清 液 ， 留 取 沉淀 ；揭开 管盖 ， 干式恒温器 设定温度为 65 ， 烘干 约 5钟 ； 20碳酸二乙酯（ 处理水 ， 溶解 箱保存 标本 ， 待测 。 （ 2）逆转录 成 ： 将经过稀释后的 本进行 逆 转录反应在以下体系中进行： 5逆转录 d T） 转录酶 体积 20反应条件： 37 ， 6095 ， 5灭活 （ 3） 应： 将制备好的 行 增 ， 扩增体系如 下 ： 5逆转录 州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 11 上游引物 F 游引物 R 体积 50扩增条件 ：（ 1） 50 ， 2（ 2） 95 ， 5（ 3） 95 ，15s； 60 ， 45s， 40 目的基因 海基尔顿生物有限 公司设计合成。引物序列见表 1。 表 1 基因 序列 扩增长度 游引 物： 5 228游引物： 5 游引物： 5 181游引物： 5 采用 针法 ，对目的基因和管家基因分别定量检测，通过校准，分析各组样品中 的基因的相对表达量。 取功能检测 取各组 0l， 23 培养箱中孵育 15取出。移除孵育液，每孔加入含二肽 转运液 摇床 37 中孵育，在不同的时间点（每隔 10用 冷的终止液终止孵育。将孵育液立即倒入微孔过滤器（ 20行负压过滤，用 5预冷的终止液洗涤 1次。微孔过滤器提取物加入 300l 蒸馏 水，振荡 5 分钟后，行高效液相色谱，测定 底物 摄取浓度。 据的统计学处理 采用 计软件进行数据处理。所有连续变量通过正态性检验，呈正态分布资料以均数 标准差（ xs）表示。多组间单因素方差分析 (多组间两两比较，若方差齐用 验，若方差不齐用 检验。 P差异有统计学意义。 兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 12 果 肠黏膜病理改变 对照组小肠黏膜结构无显著变化，小肠微绒毛排列整齐；脓毒症 组不同程度的出现肠绒毛结构紊乱、短缩、脱落，黏膜水肿，炎性细胞浸润，毛细血管出血和溃疡形成。见图 1。 图 1 小肠粘膜病理结构变化 （ 100） 注： A：对照组，结构清晰，肠上皮绒毛结构完整； B：脓毒症 4h 组，肠上皮绒毛脱落，毛细血管充血； C：脓毒症 8h 组，肠上皮绒毛脱落，黏膜水肿，毛细血管充血； D：脓毒症12h 组，肠上皮绒毛脱落、短缩，毛细血管充血； E：脓毒症 16h 组，肠上皮绒毛脱落，溃疡形成； F：脓毒症 20h 组，肠上皮绒毛脱落，毛细血管出血，溃疡形成，大量炎性细胞浸润。 清及肠 黏膜 平 脓毒症组各时间点血清和肠黏膜 较对照组明显升高（ P均在脓毒症 4h 时达到高峰，之后有缓慢下降趋势 ，见表 2。 表 2 脓毒症时血清及肠组织 平变化 组别 动物数（只） 血清 ） 肠 组织 ） 血清 ） 肠 组织 ） 对照组 10 毒症 4h 组 10 毒症 8h 组 10 毒症 12h 组 10 毒症 16h 组 10 毒症 20h 组 10 州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 13 注：与对照组比较， 脓毒症 4h 组比较， 脓毒症 8h 比较， 脓毒症 12h 比较， 脓毒症 16h 比较， 清及肠黏膜 平变化 脓毒症时， 血清和肠黏膜 平均在建模 4h 时达高峰，后逐渐下降，脓毒症组各时间点与对照组比较均有统计学意义（ P ，见 图 2、 3。 图 2 脓毒症时血清 平变化 规律 注：与对照组比较， 图 3 脓毒症时小肠粘膜 平变化规律 注：与对照组比较， 白表达水平 兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 14 脓毒症 12h、 16h 和 20h 组小肠上皮 白表达较对照组明显下降（ P 脓毒症各亚组内 12h、 160 P ，见图 4。 图 4 脓毒症大鼠 术后 小 肠上皮 白表达 变化 注： 4h：脓毒症 4h 组， 8h：脓毒症 8h 组， 12h：脓毒症 12h 组， 16h：脓毒症 16h 组，20h：脓毒症 20h 组 ； 肽载体 与对照组比较， 脓毒症 4h 组比较，脓毒症 8h 比较， 与脓毒症 12h 比较， 达水平 脓毒症 8h、 12h、 16h 和 20h 组小肠上皮 达 水平 较对照组下降（ P 脓毒症各亚组 之间 小肠上皮 达 水平 具有统计学 差异（ P ，见图 5、 6、 7。 兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 15 图 5 增动力学曲线 图 6 增动力学曲线 图 7 脓毒症大鼠术后小肠上皮 达 变化 注 ： 4h：脓毒症 4h 组， 8h：脓毒症 8h 组， 12h：脓毒症 12h 组， 16h：脓毒症 16h 组，20h：脓毒症 20h 组； 短 肽载体 甘油醛 与对照组比较，脓毒症 4h 组 比较， 脓毒症 8h 比较， 与脓毒症 12h 比较，兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 16 与脓毒症 16h 比较， 取功能水 平 脓毒症 12h、 16h 和 20h 组小肠上皮 取量较对照组明显下降（ P 脓毒症各亚组内 12h、 16h 和 20h 组小肠上皮 取量均较脓毒症 4h 和 8h 组下降，差异具有统计学意义（ P ，见图 8。 图 8 脓毒症大鼠术后小肠上皮 取功能 变化 注： 4h：脓毒症 4h 组， 8h：脓毒症 8h 组， 12h：脓毒症 12h 组， 16h：脓毒症 16h 组，20h：脓毒症 20h 组； 氨酸 与对照组比较， 脓毒症 4h 组比较， 脓毒症 8h 比较， 白表达相关性 脓毒症时，血清和肠黏膜 平均与肠上皮 白表达 量（ A 值）具有显著相关性（ r=r=P 呈正相关 ，见图 9、 10。 兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 17 图 9 血清 平与 白表达相关性 图 10 小肠黏 膜 平与 白表达相关性 论 脓毒症时可出现急性肠功能障碍，其特征是肠道吸收功能丧失， 营养底物尤其是蛋白质、葡萄糖无法在肠道内转运吸收， 机体不能满足蛋白质 能量、液体、电解质和微量营养物质的平衡，出现 营养不良、免疫功能紊乱，在此基础上引发或加重其他器官功能衰竭 1,47。业已表明，小 肠上皮 肽 （ 二肽、三肽 ） 的转运 是 肠道蛋白质吸收的主要途径 ， 其表达数量及功能活性的高低直接影响着机体营养状况及疾病预后 48。 因此，研究脓毒症下 肠上皮兰州大学硕士 学位论文 脑肠肽 脓毒症大鼠小肠上皮短肽载体 节作用研究 18 将为临床感染病人的营养支持模式及肠功能障碍改善提供理论依据。 盲肠结扎穿刺模型（ 目前国际上 公认的脓毒症动物治疗模型，能模拟腹腔脓肿发展到弥漫性腹膜炎 ，随着时间推移，贯续 出现 脓毒性休克和多器官功能障碍的临床过程 49,50。在此过程中， 机体处于严重应激状态，肠道组织细胞缺血、缺氧 和过度炎性刺激 ， 可能 影响着肠道上皮 12研究表明， 应用小鼠腹腔注射 肠上皮 11研究 表明 ，腹腔注射脂多糖（ 降低大鼠空肠 但此种变化并非 塞米松可通过抑制 今为止，对脓毒症复杂多因素病理生理条件下小肠上皮短肽载体的表达及功能的改变的认识仍不十分清楚。本研究运用大鼠 毒症 8上皮 P 同时 2P 在此后脓毒症进程中（ 2检测到的 揭示脓毒症状况下，大鼠小肠组织 进一步研究显示， 脓毒症 12h、 16h、 20功能较对照组明显下降，且较脓毒症 4异具有统计学意义（ P。本研究证实了脓毒症复杂病理条件下小肠上皮营养载体 在基因转录和蛋白表达水平均受到抑制，下调了肠上皮 致使机体对蛋白底物转运吸收受到抑制 。 分析其可能机理： 脓毒症时 小肠黏膜组织水肿，肠绒毛结构紊乱、短缩，肠黏膜组织屏障受到损伤，会直接破坏肠上皮 使其分布减少 ； 既往研究表明，脓毒症时由于大量炎性介质如 引起小肠蛋白吸收障碍 51。本研究示， 4后维持较高水平，支持炎性因子可引起小肠上皮 与 11研究结果具有一致性。而12另一研究表明， 小鼠腹腔注射 2100空肠和回肠 可能与大鼠和小鼠之间肠上皮 脑肠肽 是生长