试验九 紫外光光度分析法实验N.doc

试验九 紫外光光度分析法实验（水样总氮的测定）实验目的：掌握紫外分光光度计的使用方法掌握土壤有效磷的测定方法实验方法：过硫酸钾消解，紫外分光光度法实验要求：认真操作；详细记录；计算正确实验时间：2007年6月20日14：3018：00实验内容：第一部分 紫外/可见光分光光度计一、分光实验原理分光光度法分析的原理是利用具有不同分子结构的物质对光显示选择性吸收现象来进行物质的定性和定量分析，其理论基础是光的吸收定律朗伯比尔定律：当一束平行单色光垂直透过某溶液时，其能量就会被吸收而减弱，其减弱程度（吸光度）A与溶液的浓度C和溶液的光径长度L的乘积成正比。A = KCL本法具有较高的灵敏度和一定的准确度，操作简便，适用范围广，是非常重要的分析方法。二、 分光光度计结构以754PC分光光度计为例，其结构主要由5部分组成：光源单色器样品室检测放大控制系统结果显示系统仪器以氘灯作紫外区光源，卤钨灯为可见区光源，采用光栅型单束结构光路。光源灯发出的复合光进入单色器，经光栅色散由出射狭缝射出一束单色光，当样品槽内样品进入光路，单色光被样品溶液吸收后透射出的单色光被光电池接受，转换成与样品透射光强度成一定比例的电信号，经放大器放大和A/D变换后，由仪器CPU控制显示出样品的吸光度或透光率。三、 分光光度计使用方法（1）使用本仪器前，应了解本仪器的工作原理和各个操作按钮之功能。（2）将仪器的电源开关接通，仪器进入自检状态，当显示器上显示“546.0nm 100%T”时，仪器自检完毕进入测试状态。（3）设置波长：按动键并观察显示屏上波长值，至需要的测试波长。（4）设置测试模式：按下“设置测试键”切换设置测试：T透射比测试/A吸光度测试/C浓度测试。（5）吸光度测试：按动“测试模式”键，切换到透射比测试模式“T”。 调整测试波长。按动“测试模式”键，切换到吸光度测试模式“A”。置入参比样品，按下“调满度”键，此时仪器显示“BLANK.”延迟几秒便显示“-0.000A”或“0.000A”。置入测试样品，读取测试数据。（6）透射比测试：按动“测试模式”键，切换到透射比测试模式“T”。 调整测试波长。置入参比样品，按下“调满度”键，此时仪器显示“BLANK.”延迟几秒便显示“100%T”。置入测试样品，读取测试数据。（7）浓度方式测试：按动“测试模式”键，切换到透射比测试模式“T”。 调整测试波长。置入参比样品，按下“调满度”键，此时仪器显示“BLANK.”延迟几秒便显示“100%T”。置入标准浓度样品。按动“测试波长”键，切换到浓度测试模式。按动“功能”键至“STD/CONC=01000”功能。按动数字键，设置标准样品浓度，并按下“确认”键。置入测试样品，读取测试数据。四、 注意事项 （1）拿比色皿时，手指只能捏住毛玻璃的两面。石英比色皿供紫外光谱区用，玻璃比色皿供可见光谱区用。（2）测定时，比色皿要用被测液荡洗23次，以避免被测液浓度的改变。（3）要用吸水纸将附着在比色皿外表面的溶液擦干。擦时应注意保护其透光面，勿使产生划痕。（4）测定一系列溶液时，依据由稀到浓的顺序。（5）比色皿放入比色皿架内时，应注意它们的位置，尽量使它们前后一致，否则容易产生误差。为了防止光电管疲劳，在不测定时，应经常使暗箱盖处于启开位置。连续使用仪器的时间一般不应超过2h，最好是间歇半小时后，在继续使用。第二部分 水样总氮的测定一、原理污水排入水体、土壤营养渗漏，使水体含量氮含量增高，会造成藻类过度繁殖，河流、湖泊透明度降低，水质变坏发生富营养化。氮是评价水质的重要指标。在120C、碱性介质中，过硫酸钾将水样中的有机氮、氨氮、亚硝酸盐氮氧化为硝酸盐氮。用紫外分光光度计于波长220nm和275 nm处分别测定其吸光度，按A = A220 A275计算硝酸盐氮吸光度。检测范围0.054 mg/ L。二、主要仪器1、高压蒸汽消毒器2、紫外分光光度计3、50ml刻度管（每组1支，公用8支）4、12 ml移液管、1020 ml移液管、烧杯、量筒、漏斗、玻璃棒（每组各1支）三、试剂1、1：9盐酸溶液：（共用50ml）2、碱性过硫酸钾溶液：（10 g过硫酸钾 + 3.75g氢氧化钠）/250ml，放于聚乙烯瓶中，可储存1周。3、硝酸钾储备溶液(100ppm)：硝酸钾于110C烘干2小时，干燥器中冷却，0.7218g /1000ml，定容前加2 ml 三氯甲烷，可保存6个月。4、硝酸钾标准溶液(10ppm)：吸取10 ml硝酸钾储备溶液(100ppm)，定容至100 ml。四、操作步骤1、水样的预处理取50mm水样过滤，吸取15mm放入50ml刻度管中，加碱性过硫酸钾溶液5ml，加棉塞，置于高压蒸汽消毒器中加热，压力达1.1kg/cm2（120C）时，调节电压保持此压力30分钟，停止加热，待压力表指针降至零后取出冷却。如混浊，过滤洗涤。加入1：9盐酸溶液1 ml，定容至25ml。2、水样吸光度测定在紫外分光光度计上用波长220nm和275 nm处分别测定其吸光度，按A = A220 A275计算硝酸盐氮吸光度。检测范围0.054 mg/ L。3、标准曲线的制作（1）取8支比色管，