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文档简介
专题2微生物的培养与应用 本节目录 回归教材 夯实基础 知能演练 强化闯关 高频考点 深度剖析 基础盘点一 微生物的实验室培养1 培养基 1 概念 人们按照微生物对 的不同需求 配制出供其 的营养基质 2 营养构成 一般都含有水 氮源和无机盐 此外还要满足微生物生长对ph 特殊营养物质以及 的要求 3 种类 按照物理性质可分为 培养基和 培养基 营养物质 生长繁殖 碳源 氧气 液体 固体 煮沸消毒法 紫外线消毒法 灼烧灭菌 高压蒸汽灭菌 3 大肠杆菌的纯化培养 1 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基配制步骤 计算 溶化 倒平板 2 纯化大肠杆菌 纯化大肠杆菌 其关键的步骤是 纯化培养方法 法和 法 纯化培养原理 在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的 即可获得较纯的菌种 称量 灭菌 接种 平板划线 稀释涂布平板 菌落 二 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数1 分离原理 土壤中细菌之所以能分解尿素 是由于它们能合成 这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起 作用 以尿素为唯一氮源的培养基能促进分解尿素的细菌的生长和繁殖 并抑制或阻止其他微生物的生长 从而将目的菌分离 2 统计菌落数目 统计样品中的活菌一般用 法 3 实验流程 土壤取样 制备 微生物的培养与观察 细菌的计数 脲酶 催化 稀释涂布平板 培养基 三 分解纤维素的微生物的分离1 纤维素酶 1 组成 纤维素酶是一种复合酶 它包括c1酶 cx酶和葡萄糖苷酶 2 作用 刚果红染色法 是否产生透明圈 3 筛选流程土壤取样 富含 的环境 选择培养 用选择培养基培养 以增加纤维素分解菌的数量 梯度稀释 涂布平板 将样品涂布于含cr的鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落 产生 的菌落周围出现透明圈 纤维素 纤维素酶 知识导图 考点突破 1 微生物的营养 2 平板划线法与稀释涂布平板法 对点突破1 平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法 下列描述正确的是 a 都要将菌液进行一系列的梯度稀释b 平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作c 稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养d 都会在培养基表面形成单个的菌落解析 选d 平板划线法不需要进行梯度稀释 稀释涂布平板法需要将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面 平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个的菌落 2 2013 辽宁大连双基测试 下列是有关微生物的培养与应用的问题 请分析回答 1 如图是利用 法进行微生物接种 把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面 图中右手拿的器具称为 2 分析下面培养基的配方 nano3 kh2po4 nah2po4 mgs04 7h2o kcl h2o 若用于培养纤维素分解菌 应加入 物质 为检测纤维素分解菌的存在与否 还应加入 染料 3 获得的菌种如果需要长期保存 可以采用 的方法 答案 1 平板划线稀释接种环 2 纤维素粉刚果红 3 甘油管藏 1 筛选菌株 1 原则 人为提供有利于目的菌生长的条件 同时抑制或阻止其他微生物的生长 2 菌株筛选原理的比较 2 几种典型微生物的筛选方法 1 培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌 2 培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌 3 培养基中缺乏氮源时 可以分离固氮微生物 4 当培养基的某种营养成分为特定化学成分时 也具有分离效果 如当石油是唯一碳源时 可以抑制不能利用石油的微生物的生长 使能够利用石油的微生物生存 达到分离能消除石油污染的微生物的目的 5 改变微生物的培养条件 也可以达到分离微生物的目的 如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物 3 微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用特别提醒即使使用了选择培养基 所得到的微生物也未必全为 目标微生物 因此 常需对选择培养基中菌落做进一步鉴定 对点突破3 2013 山东青岛调研 在农田土壤的表层自生固氮菌较多 用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养 可将自生固氮菌与其他细菌分开 对培养基的要求是 加抗生素 不加抗生素 加氮素 不加氮素 加葡萄糖 不加葡萄糖 37 恒温箱中培养 28 30 温度下培养a b c d 解析 选c 细菌对抗生素敏感 故培养基中应不加抗生素 自生固氮菌有固氮功能 故培养基中不需要加氮素 自生固氮菌是异养的 应该加葡萄糖 其生长繁殖的适宜温度是28 30 4 下列关于微生物分离和培养的叙述 错误的是 a 微生物培养前 需对培养基进行消毒b 测定土壤样品中的细菌数目 常用菌落计数法c 分离土壤中不同的微生物 要采用不同的稀释度d 分离能分解尿素的细菌 要以尿素作为培养基中的唯一氮源解析 选a 微生物培养前 需对培养基进行灭菌 而不是消毒 测定土壤样品中的细菌数目 常用菌落计数法 分离土壤中不同的微生物 要采用不同的稀释度 因为不同的微生物在土壤中的含量不同 分离能分解尿素的细菌 要以尿素作为培养基中的唯一氮源 1 显微镜直接计数法 1 原理 利用特定细菌计数板或血细胞计数板 在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量 2 方法 用计数板计数 3 缺点 不能区分死菌与活菌 2 间接计数法 活菌计数法 1 原理 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有多少活菌 2 计算公式 每克样品中的菌株数 c v m 其中 c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 v代表涂布平板时所用的稀释液的体积 ml m代表稀释倍数 3 操作 设置重复组 增强实验的说服力与准确性 同时为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 对点突破5 分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是 a 经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上b 富集培养这一步可省略 但培养纤维素分解菌少c 经稀释培养后 用刚果红染色d 对照组可用等量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上解析 选a 经选择培养后 再经稀释 才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 富集培养可省略 经稀释培养后 用刚果红染色 设置对照能证明经富集培养的确得到了要分离的微生物 6 下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验 完成下列问题 实验原理 农田的表层土壤中 自生固氮菌的含量比较多 将用表层土壤制成的稀泥浆 接种到无氮培养基上进行培养 在这种情况下 只有自生固氮菌才能生长繁殖 用这种方法 可以将自生固氮菌与其他细菌分离 材料用具 农田的表层土壤 无氮培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 盛有9ml无菌水的试管 无菌吸管 无菌涂布器 无菌培养皿 盛有90ml无菌水的锥形瓶 恒温箱 1 方法步骤 倒平板 分别将无氮培养基 牛肉膏蛋白胨培养基倒平板 应在 操作 制备土壤稀释液 取土样10g加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中 充分摇匀 用无菌吸管吸取上清液1ml 转至盛有9ml的无菌水的试管中 依次稀释到107稀释度 涂布 按照由107 103稀释度的顺序分别吸取0 1ml进行平板涂布 每个稀释度下 无氮培养基应至少涂布 个平板 牛肉膏蛋白胨培养基涂布 个 培养 放入恒温箱内 在28 30 下培养3 4d 细菌的计数 当菌落数目稳定时 选取菌落数在 的平板进行计数 如果测定的平均值为50 则每克样品中的菌落数是 稀释度是105 2 预期结果 相同稀释度下 牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数 填 多于 或 少于 无氮培养基上的数目 原因是 答案 1 酒精灯火焰旁 31 30 3005 107 2 多于无氮培养基上只有土壤中的自生固氮菌生存繁殖 而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存 易错警示 将消毒和灭菌混为一谈微生物培养过程中 要十分重视无菌操作 现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作 防止杂菌污染 请分析下列操作 错误的是 煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 接种操作要在酒精灯火焰附近进行 无菌繁殖脱毒苗时 要对植物的外植体进行消毒 家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 培养基要进行高压蒸汽灭菌 加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌a b c d 解析
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