高中生物 第五章 DNA和蛋白质技术 5.2 多聚酶链式反应扩增DNA片段课件 新人教版选修1.ppt

课题2多聚酶链式反应扩增dna片段 多聚酶链式反应 pcr技术 是一种在体外快速扩增特定基因或dna序列的方法 故又称为dna体外扩增技术 课题背景 pcr技术能迅速扩增dna片段 原因是 dna分子具有 结构 dna复制时遵循 原则 规则的双螺旋 碱基互补配对 3 基础知识 1 dna的基本单位 脱氧核苷酸 一 dna的结构 atgc 2 化学结构 dna分子是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链 即一条链为3 5 另一条链为5 3 盘旋而成的规则双螺旋结构 5 5 3 3 4 3 磷酸基团 在5 的位置上 2 细胞内dna复制所需条件 模板 原料 酶 能量 引物 dna的两条链 四种脱氧核苷酸 解旋酶 dna聚合酶 dna atp 二 dna复制 1 复制方式 3 细胞内dna复制特点 边解旋变复制 半保留复制 dna复制的方向 引物 dna母链 dna的复制方向总是从子链的5 端向3 端延伸 引物从模板链3 端结合 dna起始端 3 5 dna聚合酶能不能从头开始dna复制 dna聚合酶只能从引物3 端延伸dna链 合成子链 因为dna聚合酶只能将新的核苷酸加到已有的dna双链上 所以dna复制需要引物 3 5 从中选出适合的引物进行pcr 1 cctaga 2 gttcgc 3 aaagt 4 tttca 3 5 5 3 结论 1 引物结合在母链的3 端 2 复制不是从头开始 3 dna聚合酶从引物3 端开始结合上去4 子链dna延伸的方向从5 到3 1 pcr 多聚酶链式反应 技术 体外模拟dna复制的技术 2 原理 二 pcr原理 利用了dna的热变性原理 通过控制温度来控制双链的解聚与结合 dna双链 单链 变性 加热80 100 复性 缓慢冷却 重复30次 1步骤 变性 复性 延伸 三pcr的反应过程 90 以上 50 左右 72 左右 2体外pcr扩增dna的条件 模板 原料 酶 2种引物 dna的两条链 四种脱氧核苷酸 taqdna聚合酶 引物 引物 在一定的缓冲液中进行 严格控制温度 模板dna 3 3 5 5 三pcr的反应过程 5 引物1 引物2 5 5 3 3 5 3 3 三pcr的反应过程 5 引物1 引物2 5 5 3 3 5 3 3 taq酶 taq酶 子链 子链 第1轮结束 第2轮开始 三pcr的反应过程 pcr技术的操作过程 1 上一次循环的产物作为下一次循环模板2 dna聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的dna序列 使这段固定长度的序列呈指数扩增 pcr的反应过程总结 2n 细胞内dna复制与体外pcr的技术区别 四pcr反应的实验操作及操作提示 1 pcr仪 2 微量离心管 一种薄壁塑料管 总容积为0 5ml 3 微量移液器 用于定量转移pcr配方中的液体 其上的一次性吸液枪头用一次更换一次 实质上一台能够自动调控温度的仪器 pcr反应 无pcr仪时 1 理论上dna扩增数目的计算 五课题成果评价 一条dna 复制n次 dna为2n 2 课题延伸 实验中dna含量的测定 可以通过测量dna含量来评价扩增的效果 dna在260nm的紫外线波段