高中生物《第三章 第二节 月季的花药培养》课件5 新人教版选修1.ppt

种子有果皮包被着 胚珠有子房壁包被着 被子植物裸子植物 种子无果皮包被着 胚珠无子房壁包被着 种子 花的结构 被子植物的有性生殖是在花里进行的 雌蕊和雄蕊是进行有性生殖的主要部分 雌蕊 雄蕊 雌蕊的结构 花粉粒 花粉管 精子 2个 卵细胞 极核 一 被子植物的花粉发育 雄蕊 一 基础知识 药隔 药隔 花粉囊 囊壁 花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的 因此 花粉是单倍体的生殖细胞 花粉粒的形成 经历时期 四分体时期 单核期 双核期 四分体时期 小孢子 精子 精子 有丝分裂 花粉管细胞核 生殖细胞核 生殖细胞 营养细胞 双核期 两个精子和一个营养细胞的基因型相同 1个花粉母细胞 4个小孢子 减分 有分 4个花粉管细胞核 4个生殖细胞核 有分 8个精子 二 产生花粉植株的两条途径 三 影响花药培养的因素 1 材料的选择 时期 初花期 选择合适的花粉发育时期是 提高诱导成功率的重要因素 只有某一个时期对离体刺激敏感 最适合花药培养的小孢子发育时期为单核靠边期 措施 2 培养基的组成 花药培养所采用的培养基因植物的不同而有所变化 3 其他因素亲本植株的生长条件 材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响 六 实验操作 一 材料的选取 某些植物的花粉细胞核不易着色 需采用焙花青 铬矾法 这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色 最常用的方法有醋酸洋红法 1 方法 醋酸洋红法染色机理 醋酸洋红为碱性染色剂 而花粉细胞内有染色体 染色体主要成分是dna和蛋白质 易被碱性染料着色染成红色 醋酸洋红的配置 2 醋酸洋红法 将体积分数45 的醋酸100ml煮沸 缓缓加入1g洋红 在加热回流8h 冷却至50 过滤即可 将花药放在载玻片上 加一滴质量分数1 的醋酸洋红 用镊柄将花药捣碎 盖上盖玻片在显微镜下检查 染色操作 3 焙花青 铬钒法 将无水酒精与冰醋酸按体积比为3 1的比例混匀 卡诺氏固定液的配制方法 将5g铬明矾 k2so4cr2 so4 24h2o 加入90ml蒸馏水中 溶解后加入0 1g焙花青 混匀并加热至沸腾 煮沸5分钟后冷却至室温 过滤 加蒸馏水定容至100ml 焙花青 铬钒溶液的配制方法 花药应该在卡诺氏固定液中固定20min 然后取出放在载玻片上 加焙花青 铬钒溶液染色 盖上盖玻片后在显微镜下检查 染色操作 二 材料的消毒 1 酒精处理 花蕾用体积分数为70 的酒精浸泡30秒 立即取出 无菌水清洗 无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 2 消毒液处理 放入质量分数为0 1 的氯化汞溶液中2 4分钟 也可质量分数为1 的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液 无菌水冲洗3 5次用于培养花药 实际上多数未熟 由于它的外面有花萼 花瓣或颖片保护 通常处于无菌状态 所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可 三 接种和培养 在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药 要彻底去除花丝 因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 1 剥取花药 勿损伤花药 以免诱导出非花粉愈伤组织 注意 立即将花药接种于培养基上 通常每瓶接种花药7 10个 2 接种 培养条件 温度控制在25 左右 不需要光照 幼小植株形成后才需要光照 3 培养 培养 一般经过20 30天培养后 会发现花药开裂 长出愈伤组织或释放出胚状体长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上 以便进一步分化出再生植株 注意 如果花药开裂释放出胚状体 则一个花药内就会产生大量幼小植株 必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开 分别移植到新的培养基上 否则这些植株将很难分开 在花药培养中 特