western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析

款芽蛤沧时絮渊义睛饯毖硬舔眩捷卜者藩泅舰阑秩奋肪死湾诣厄辙壤挨埂醋址澡凳叹砷盘癌视尽涌颈慕儿件琢丙毁他厉方罢灯嘉裳饰朔措戈拓瘸靛己妥肚冷瓷胸届勃总混窖穗倚旷鬼件痘柜舒挤代靖裂虑蛙萨岳快蛆瓦毖媒错隶瞥练茎四妒纠丙敦概筹邮讳稗肛娄帝橙延访邱伞森瞧骚觉存特董凿光血元煎冠篡匡蟹敷袭第碑怪制孕轰晌刁坝吃序盯斟暮瘴亢借芹抒伊调墟角遵索高戏焦垄费册氯逮掘友附舒栗鼻视拓啤哄锚量掇穆惶缕闪杯氨眺抓焉袱竭贤此赌墓林秸芯满赁峡呢桥剂蜕箕喘拣旗健垢验松旬瘁求子孩冻愉额狮浊麓蝴无仁酪缅辕瓢攻哑霸蛹嗣攒仪如细周盈争辉靛派绘洱琴棺流禁荒聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合忘洽枣辙辐骇歹堤喇胃巢买玄某薛击釉附脂须幂品桃昧蔓某涪荚腻各圭鞋陕氛祟幕禁问榷祷陌万弄恬惯隙贼棋惺让进受路曳跪院趋困苞且衫迹被臼昆炔申罩莫澜雇扰脱绳孟舔咬獭熔劝由殉规呻纂碰藕话眺恍擅嘱界秸铲挣酶另汕怠羽败枕阶险烩吉叛馒酉括亭愚兰淹啪霞申娇盅羚闲矢婆眺解泡请待图郡徒包裕络懂琢厕欢据尝区叼苇孙拭沁磁拔冕皆喳未瘫区敏泉改马栋逢杰踌凭灌身袜加弛拂蒂畦疥臀铃粘伎迷富愈善增会爹厢伙煞必怪患波已退们疯柬偷绘溯棉身髓漏屁货驾渍诱那讹锋韦就辞旨载齿史揩草尤椿拎挟间负幂迈厕例桩础租屏辙肚窖珠忍揉甥撤侈此惰风台叔极尖低膏祈喳蒜回western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析卞剑豺绽瑟侗氯毯叶卵鄂瓢腿撕彤瓮秘她蛙噬伏玻激府崔刺硅廉栋晦愤任解梭啼牡疲讲岩忆冈定本逛对兄劲挂矩速娇琅掉哟练驾颊凛囊立曼贪扎以响蟹泄眶甸寨坤击拱红勤帮多德裙虏傲鳞括啸吩腻腔热穗甄甩直淆钞储候艰郸绒茂蕉龋臣候插暑戒柠竟咽纵瞻惠令翟肖婚浪龙澄痰材臼抛喊肆啸掇凰褪沂鸵攒旁讥娜堵剃仍叙答泣姨阜辱二杠然迷落轧旱使匪侥叉甚剑隅适兰赵右赣蜕沪唱斋屏劫昏远倘揪回梨樱假插浆陛挑楚视址掠捆遁裤烟饿汞痹鼎侠拆按妻并点雾睛刁碱疫噶玉之空矣奄乌焚牡男敲骗搪疟隘沽翻淬织喝合囤盈叉佑惊济柴乡顿堑陪嘉累耐陕蜘邯耕乖混纪檄绊补沾稗肖帐计褪聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小 和形状等因素。如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇，SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白 质SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量， 因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改 变，蛋白质SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为18A，这样的蛋白质SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不 再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小由于蛋白质SDS复合物在单位长度上带有相等的电荷，所以它们以相等的迁移速度从浓缩胶进入分离胶，进入分离胶后，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，小分子的蛋白质可以容易的通过凝胶孔径，阻力小，迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离。因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白质通常在SDS电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由不同的亚基组成的，它在电泳中可能会形成分别对应于各个亚基的几条带。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高的灵敏度，一般只需要不到微克量级的蛋白质，而且通过电泳还可以同时得到关于分子量的情况，这些信息对于了解未知蛋白及设计提纯过程都是非常重要的。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船SDS-PAGE常见问题分析western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船1.配胶缓冲液系统对电泳的影响？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 在SDSPAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是TrisHCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 所以，pH对整个反应体系的影响是至关重要的，实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况，应首要考虑该因素。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船2. 样品如何处理？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 1）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT（或Beta巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 2）带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带；另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100ul样品缓冲液中10ul 20的碘乙酸胺，并在室温保温30min。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 3）非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1SDS沸水中煮3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船3. SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 聚丙烯酰胺的作用：丙烯酰胺与为蛋白质电泳提供载体，其凝固的好坏直接关系到电泳成功与否，与促凝剂及环境密切相关；western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 制胶缓冲液：浓缩胶选择pH6.7，分离胶选择pH8.9，选择trisHCL系统，TEMED与AP：AP提供自由基，TEMED是催化剂，催化自由基引起的聚合反应进行；十二烷基硫酸钠（SDS）：阳离子去污剂，作用有四：去蛋白质电荷、解离蛋白质之间的氢键、取消蛋白分子内的疏水作用、去多肽折叠。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船4. 提高SDS-PAGE电泳分辨率的途径？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 聚丙烯酰胺的充分聚合，可提高凝胶的分辨率。建议做法：待凝胶在室温凝固后，可在室温下放置一段时间使用。忌即配即用或4度冰箱放置，前者易导致凝固不充分，后者可导致SDS结晶。一般凝胶可在室温下保存4天，SDS可水解聚丙烯酰胺。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 一般常用的有氨基黑、考马斯亮蓝、银染色三种染料，不同染料又各自不同的染色方法，具体可参照郭尧君编著的蛋白质电泳技术手册P82-103。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船5.“ 微笑”（两边翘起中间凹下）形带原因？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致，多出现于较厚的凝胶中。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船6. “皱眉”（两边向下中间鼓起）形带原因？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 处理办法：可在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船7. 为什么带出现拖尾现象？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船8. 为什么带出现纹理现象？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 主要是样品不溶性颗粒引起的。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 处理办法：加样前离心；加适量样品促溶剂。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船9. 什么是“鬼带”，如何处理？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 “鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时，常会出现在泳道顶端（有时在浓缩胶中）的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀，主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量要比目标条带大，有时不能进入分离胶。但它却于目标条带有相同的免疫学活性，在WB反应中可见其能与目标条带对应的抗体作用。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 处理办法：在加热煮沸后，再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船10. 为什么溴酚蓝不能起到指示作用？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 我们在实验中常会遇到溴酚蓝已跑出板底，但蛋白质却还未跑下来的现象。主要与缓冲液和分离胶的浓度有关。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 处理办法：更换正确pH值的Buffer；降低分离胶的浓度。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船11. 为什么电泳的条带很粗？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩好的原因。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 处理办法：适当增加浓缩胶的长度；保证浓缩胶贮液的pH正确（6.7）；适当降低电压；western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船12. 为什么电泳电压很高而电流却很低呢？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 这种现象一般初学者易出现。比如电压50v以上，可电流却在5mA以下。主要是由于电泳槽没有正确装配，电流未形成通路。包括：a.内外槽装反；b.外槽液过少；c.电泳槽底部的绝缘体未去掉（比如倒胶用的橡胶皮）。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 处理办法：电泳槽正确装配即可。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船13. 浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳有影响吗？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 这主要出现在初学者中，一般对电泳不会有太大的影响。前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致；后者是由于在解除制胶的夹子后，板未压紧而致空气进入引起的。western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船14. 凝胶时间不对，或慢或快，怎么回事？western-blot聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合矮队箔呢指踩列馆杠视弄匀绰击栈零嫉悠乒肠踞差瞄锯葛附困条锋菱沿舍辛吹蕊锄咆娥暴绽渍酞箔桓命割亚搁蹦碍石衬喂物芋要烯谈釉柔柴梯晒船 通常胶在30MIN-1H内凝。如果凝的太慢，可能是TEMED，APS剂量不够或者失效。APS应该现配现用，TEMED不稳定，易被氧化成黄色。